Кампари шприц: рецепты коктейлей, как правильно пить, цена

Содержание

рецепты с шампанским, соком, тоником и мартини в домашних условиях

Кампари — темно-красный итальянский аперитив крепостью 25 градусов. В его составе насчитывается более 60 различных трав и фруктов. А точная рецептура держится в тайне с момента создания биттера.

В равной степени сладкий и горький, он быстро стал желанным ингредиентом многих известных миксов. Коктейли с Кампари имеют необычный пряный аромат и утонченный травяной вкус. Такие напитки приятно готовить и пить, а если есть нужные компоненты — легко сделать в домашних условиях.

Содержание

  1. С чем сочетать биттер
  2. Рецепты коктейлей с Campari
  3. Гарибальди
  4. Сатана
  5. С тоником
  6. Русский Campari
  7. Красные розы
  8. Белый
  9. Яблочный Джек
  10. Американо
  11. Негрони
  12. Валентино
  13. Волна
  14. Джинджер Роджерс
  15. Шприц
  16. Адриатика
  17. Игристая страсть
  18. Профи
  19. Кампари Маргарита
  20. Би ту Би (B2B)
  21. Итальянский Мохито
  22. Цитрусовый торнадо
  23. Закон открытий
  24. Баттер-скотч
  25. Никарагуа Негрони Пунш
  26. Горькая Сангрия
  27. Горькая пилюля
  28. Полезное видео пяти рецептов коктейлей с Кампари (Campari)

С чем сочетать биттер

Цитрусово-травяной ликер пьют не разбавленным как аперитив. Предварительно напиток охлаждают до 10°C либо добавляют лед.

Теплый биттер утрачивает вкусовую яркость, приобретая неприятный травяной привкус.

Чистый ликер разливают по небольшим (50 мл) рюмочкам, пьют не спеша, маленькими глотками. А закусывают разными фруктами: лимонами, яблоками, киви, виноградом, апельсином.

Также ликер можно смешивать с разными жидкостями:

  1. С содовой. Этот способ считается классическим. Смешивают в таком соотношении: 1 часть алкоголя на 2 части содовой. Обязательно добавляют лед и дольку лимона. Идеальная закуска – фруктовая тарелка из грейпфрута, апельсина и лимона.
  2. С соками. Идеально Кампари миксуется с апельсиновым свежевыжатым фрешем. Отлично подходит для смешивания вишневый, ананасовый, гранатовый сок. Пропорции: 1 часть спиртного на 2 части фреша.
  3. С джином, вермутом, коньяком водкой и другим крепким спиртным биттер смешивают в пропорции 1:1.
  4. С газировкой – швепсом или спрайтом. Такой микс предпочитает молодежь.

Мнения расходятся по поводу сочетания ликера Кампари с лимонным и грейпфрутовым соком. Одни считают, что горечь в этих фруктах портит вкус напитка. Другим такое сочетание нравится.

Рецепты коктейлей с Campari

Известны десятки рецептов коктейлей с Кампари: простых и сложных. Каждый найдет напиток по своему вкусу.

Гарибальди

Вкусный и простой коктейль с соком апельсина создан в 1861 году в Милане. Назван микс в честь Джузеппе Гарибальди – известного итальянца-полководца, любившего носить яркую куртку красного цвета. Второе название коктейля – Кампари Оранж.

Состав:

Апельсиновый фреш 140 мл
Ликер Кампари 60 мл
Лед 150 г
Апельсин 1 долька

Приготовление:

  1. Заполнить льдом бокал.
  2. Влить фреш и биттер.
  3. Смешать.
  4. Украсить ломтиком апельсина.

Полезное видео рецепта коктейля с Кампари Гарибальди (Кампари Оранж)

Сатана

Коктейль схож с Гарибальди. Небольшие отличия в составе и пропорциях. Пойдет тем, кому хочется более насыщенный цитрусовый вкус.

Состав:

Кампари 100 мл
Апельсиновый фреш 60 мл
Сок лимона 10 мл

Приготовление:

  1. В стакан всыпать лед.
  2. Влить соки и ликер.
  3. Перемешать.

С тоником


Биттер Кампари с тоником – самое простое сочетание для ценителей натурального вкуса ликера.

Состав:

Кампари 50 мл
Тоник 150 мл
Лед 150 г
Апельсин или лайм 1 долька

Приготовление:

  1. Хайбол наполнить льдом.
  2. Влить биттер, затем разбавить тоником.
  3. Перемешать напитки.
  4. Сервировать ломтиком цитруса.

Русский Campari

Очень простой в приготовлении коктейль. В него входит всего 2 компонента: водка и биттер. Как итог – мягкий вкус с небольшой горчинкой.

Состав:

Биттер 50 мл
Водка 50 мл

Приготовление:

  1. Шейкер заполнить льдом.
  2. Влить спиртное.
  3. Взбить.
  4. Перелить в охлажденный бокал через сито.

В качестве закуски к коктейлю подают маслины или оливки.

Красные розы

Простой коктейль на основе Кампари с шампанским легко приготовить дома.

Состав:

Кампари 100 мл
Сухое шампанское 100 мл
Кубики льда 150 мл

Приготовление:

  1. Хайбол заполнить кубиками льда.
  2. Налить ликер и шампанское.
  3. Смешать.

Для украшения коктейля подойдет цедра или ломтик лимона.

Белый

Тандем из белого сухого вина с ликером Кампари  понравится женской аудитории.

Состав:

Белое сухое вино 50 мл
Кампари 20 мл
Лед 150 г

Приготовление:

  1. Бокал для вина наполнить кубиками льда.
  2. Налить вино и биттер.
  3. Перемешать.

В качестве украшения коктейля используют ломтик апельсина.

Яблочный Джек

Ярко выраженный яблочный вкус и почти полное отсутствие горечи – отличительны черты коктейля.

Состав:

Кампари 50 мл
Виски 50 мл
Яблочный сок 300 мл

Приготовление:

  1. В шейкер положить лед.
  2. Влить все жидкости.
  3. Взболтать и перелить сквозь стейнер в высокий узкий бокал.

Американо

Этот микс стал первым коктейлем с биттером. Создал его Гаспаре Кампари – основатель самого бренда Campari.

Состав:

Ликер 30 мл
Вермут Россо 30 мл
Содовая 100 мл
Лед 150 г

Приготовление:

  1. В олд фешен или рокс влить спиртное.
  2. Разбавить газировкой.
  3. Смешать компоненты.
  4. Бросить лед.
  5. Декорировать апельсиновым кружочком.

Подробнее о коктейлях с вермутом: 25 вкусных рецептов для приготовления в домашних условиях →

Негрони

Создателем сочетания джин, кампари и вермут стал граф Камилло Негрони. Произошло это в 1919 году. По сути это интерпретация коктейля «Американо», в котором заменили содовую на джин, для увеличения крепости напитка. Это один из самых популярных коктейлей.

Внешне Негрони не отличается от Американо. Поэтому декорируют их по-разному: первый – апельсиновой цедрой, второй – ломтиком свежего цитруса.

Состав:

Сухой джин 30 мл
Биттер Кампари 30 мл
Вермут Россо 30 мл
Лед 150 г

Приготовление:

  1. В рокс налить спиртное в любой последовательности.
  2. Перемешать.
  3. Добавить лед.
  4. Декорировать апельсиновой цедрой.

Больше коктейлей Негрони: рецепты для приготовления дома→
Видео рецепт приготовления коктейля с Кампари Негрони в домашних условиях

Валентино

Напиток назван в честь бармена, его придумавшего. От Негрони и Американо отличается лишь легким зерновым привкусом, который в коктейль привносит виски.

Состав:

Ржаной виски 60 мл
Кампари 15 мл
Мартини Россо 15 мл
Лед 100 мл

Приготовление:

  1. В шейкер положить лед.
  2. Влить все жидкие составляющие.
  3. Взболтать.
  4. Через стейнер перелить в бокал.
  5. Декорировать цедрой апельсина.

Волна

Бодрящий и мягкий напиток с фруктово-травяным вкусом.

Состав:

Биттер
30 мл
Апельсиновый фреш 100 мл
Клубничный сок с мякотью 200 мл

Приготовление:

  1. В высоком бокале смешать соки и ликер.
  2. Добавить по желанию кубики льда.

Подавать с соломинкой. Бокал украсить ягодкой клубники.

Джинджер Роджерс

Коктейль получил название в честь знаменитой американской актрисы, хотя она не увлекалась алкогольными напитками. Все дело в том, что имя Джинджер в переводе обозначает «имбирь». А эта пряность является обязательным компонентом этого коктейля.

Состав:

Кампари 60 мл
Сок апельсина 90 мл
Клубника 1 шт.
Клементин 1 шт.
Имбирь молотый Щепотка
Содовая (7UP или другая) 60 мл

Приготовление:

  1. В шейкере раздавить пестиком или мадлером клементин и клубнику.
  2. Влить сок и биттер.
  3. Заполнить шейкер льдом.
  4. Взболтать и перелить через ситечко в бокал.

Количество содовой можно варьировать по личным предпочтениям.

Шприц

Коктейль с ликером Кампари Шприц обладает терпким вкусом. Приготовить напиток легко самостоятельно.

Состав:

Кампари 60 мл
Игристое вино Просекко 60 мл
Содовая 30 мл
Оливка 1 шт.

Приготовление:

  1. В большой бокал насыпать лед.
  2. Поочередно налить игристое вино, ликер и содовую.
  3. Перемешать.
  4. Украсить оливкой.

На закуску к коктейлю подают колбасную и сырную нарезку.

Подробнее о коктейлях с Просекко: 15 лучших рецептов →

Адриатика

Этот коктейль популярен на курортах Греции и Италии благодаря своим универсальным свойствам. Он отлично утоляет жажду в летний зной и согревает прохладным вечером.

Состав:

Кампари 35 мл
Водка 25 мл
Лимонный ликер 1 ч.л.
Апельсиновый сок 2 ч.л.
Лед 100 г

Приготовление:

  1. В шейкере смешать сок, водку и лимонный ликер.
  2. В бокал всыпать лед.
  3. Затем налить микс из шейкера.
  4. Сверху влить биттер.
  5. Перемешать коктейльной ложечкой.

Украшают коктейль долькой цитруса на свой вкус.

Игристая страсть

В этом коктейле гармонично сочетается Кампари с шампанским и грейпфрутовым соком.

Состав:

Шампанское 60 мл
Биттер 60 мл
Сок грейпфрута 30 мл
Апельсин 1 долька
Малина 1 ягода
Мята 1 листик

Приготовление:

  1. В заранее охлажденный бокал влить биттер с грейпфрутовым соком.
  2. Добавить шампанское.
  3. Смешать.
  4. На зубочистку насадить ломтик апельсина, малину и листик мяты. Сервировать коктейль.

При смешивании биттера и сока с шампанским, напиток начинает активно пениться.

Профи

Дамский вариант коктейля с приятными нотками цитруса.

Состав:

Кампари 30 мл
Мартини Бьянко 30 мл
Шампанское 100 мл
Апельсиновый фреш 40 мл
Лед 6 кубиков

Приготовление:

  1. Шампанское, фреш, кампари и мартини влить в шейкер.
  2. Смешать и перелить в бокал со льдом.
  3. Сервировать кусочком апельсина.

Кампари Маргарита

Одна из разновидностей коктейля Маргарита. Попробовать напиток можно не только в баре. Ведь способ приготовления очень прост.

Состав:

Кампари 30 мл
Текила 45 мл
Куантро 15 мл
Лаймовый фреш 30 мл

Приготовление:

  1. Заполнить льдом шейкер.
  2. Взболтать компоненты.
  3. Перелить в бокал для Маргариты смесь, используя ситечко.

Би ту Би (B2B)

В этом коктейле объединились сразу два биттера – итальянский и чешский. Микс имеет выраженный травяной привкус.

Состав:

Кампари 20 мл
Бехеровка 40 мл
Виноградный сок 50 мл
Газированная вода 100 мл
Лед 100 г
Лайм 1 долька

Приготовление:

  1. Бокал заполнить кубикам льда.
  2. Влить биттеры.
  3. Влить сок винограда.
  4. Смешать.
  5. В конце влить газировку.
  6. Сервировать ломтиком лайма.

Больше коктейлей с Бехеровкой: 14 простых рецептов для приготовления дома→

Итальянский Мохито

От классического рецепта в этом Мохито осталось несколько ингредиентов: ром, мята и сахар. Напиток получается необычным, но вкусным. Особой популярностью сочетание Кампари и Просекко пользуется у женской аудитории.

Состав:

Белый ром Bacardi  45 мл
Шампанское Просекко 30 мл
Ликер Кампари 15 мл
Лимонный сок 20 мл
Сахарный сироп 20 мл
Мята 3 веточки
Лед 250-300 г

Приготовление:

  1. Мяту положить в шейкер и подавить пестиком (или мадлером), чтоб дала сок.
  2. Добавить лед, сироп, сок, рок и ликер.
  3. Хорошенько взболтать.
  4. Перелить в массу в бокал.
  5. Налить Просекко.
  6. Декорировать веточкой мяты.

Больше рецептов коктейлей с белым ромом Бакарди (Bacardi) →

Цитрусовый торнадо

Коктейль отличается выраженным цитрусовым сладко-горьким вкусом.

Состав:

Ликер Старый Таллин 40 мл
Биттер Кампари 40 мл
Мартини Россо 40 мл
Сок лимона 20 мл

Приготовление:

  1. Шейкер заполнить льдом.
  2. Влить туда спиртное и сок.
  3. Смешать и перелить в охлажденный стакан..
  4. Украсить апельсиновой цедрой.

Подробнее о коктейлях с ликером — 20 простых рецептов для приготовления в домашних условиях →

Закон открытий

Цитрусовый, пряный и травяной – все вкусы в этом коктейле находятся в гармонии.

Состав:

Имбирный ликер 60 мл
Кампари 15 мл
Лимонный сок 30 мл
Тоник По вкусу
Мята 1 веточка

Приготовление:

  1. Заполнить льдом шейкер.
  2. Добавить все компоненты, исключая тоник.
  3. Хорошенько взболтать.
  4. Перелить через ситечко в бокал.
  5. Долить тоник.
  6. Декорировать коктейльной трубочкой.

Баттер-скотч

Коктейль с пикантным имбирным вкусом и оттенками ванили.

Состав:

Кампари 20 мл
Скотч 50 мл
Херес 5 мл
Ванильный сироп 5 мл
Корень имбиря 5 г
Апельсиновая цедра 1 кусочек
Лед 200 г

Приготовление:

  1. Очищенный корень имбиря положить в шейкер и хорошенько его растолочь.
  2. Влить жидкие составляющие.
  3. Всыпать кубики льда, потрясти.
  4. Перелить через сито коктейль в охлажденную мартинку.
  5. Декорировать цедрой апельсина.

Никарагуа Негрони Пунш

Рецепт этого коктейля с Кампари легко воплотить в домашних условиях. Для приготовления понадобится емкость для пунша и силиконовая форма для создания ледяной глыбы. Коктейль с необычной подачей приятно удивит гостей.

Состав:

Кампари 450 мл
Ром 300 мл
Мартини Россо 220 мл
Грейпфрутовый фреш 300 мл
Жидкий мед 75 мл
Лимон 12 шт.
Бутоны гвоздики 30 шт.

Приготовление:

  1. Выжать сок из 10 лимонов.
  2. Добавить к фрешу гвоздику.
  3. Смешать и перелить в форму.
  4. Убрать в морозилку до полной заморозки глыбы.
  5. В емкость для приготовления пунша влить ром, кампари, мартинисок грейпфрута.
  6. Добавить мед и перемешать.
  7. Положить ледяную глыбу.
  8. Декорировать коктейль ломтиками лимона.

Горькая Сангрия

Вариация классического коктейля. Отличается неожиданно возникающей горечью Кампари.

Состав:

Красное вино 400 мл
Клюквенный сироп 100 мл
Кампари 150 мл
Бурбон 150 мл
Апельсин 1 шт.
Минеральная газированная вода
Свежая клюква

Приготовление:

  1. В емкость объемом 1 л налить вино, сироп, бурбон и кампари. Смешать.
  2. Апельсин порезать кружочками. Половину из них положить в емкость с алкоголем.
  3. Убрать в холодильник микс на 1,5-2 часа.
  4. При подаче коктейль разливают в бокалы наполовину и разводят его 90 мл газировки.
  5. Декорируют кружочком апельсина и ягодкой клюквы.

Горькая пилюля

Многослойный коктейль с горьким первоначальным вкусом и приятным послевкусием.

Состав:

Водка 15 мл
Кампари 15 мл
Сироп из маракуйи 20 мл

Приготовление:

  1. В стопку налить сироп.
  2. Далее аккуратно по тыльной стороне ложечки влить Кампари.
  3. Последний слой коктейля – водка.

Коктейль принято пить одним глотком.

Перечисленные рецепты коктейлей с Кампари – это известные миксы на основе биттера, которые можно приготовить самостоятельно у себя на кухне.

Автор: Евгения Гончарова,
специально для Tonnasamogona.ru

Полезное видео пяти рецептов коктейлей с Кампари (Campari)

( 2 оценки, среднее 2.5 из 5 )

Коктейльное меню BRUXX

Новинки

Симфония №5
— Людвиг ван Бетховен

Согласно легенде Бетховен долго не мог придумать вступление к «Симфонии № 5». Уставший, он прилёг вздремнуть и услышал стук в дверь. Именно ритм этого стука впоследствии и стал началом знаменитой симфонии. Впечатлившись этой историей мы тоже решили прислушаться… к гусю! Его гогот навел нас на сочетание самых летних ингредиентов: Совиньон Блана с абрикосовым дистиллятом и банановым ликером. Откуда все же здесь гусь? Сами задаемся этим вопросом. Но мы у него теперь в долгу.

650 р. / 130 мл

Каприс №24
— Николло Паганини

Во времена Паганини скрипачи и педагоги для своих учеников часто писали упражнения и этюды для совершенствования техники. Иногда эти этюды называли «каприсами». Рецепт нашего коктейля мы оттачивали днями и ночами, поэтому он совершенно точно утолит любой ваш каприз. В его составе: ореховый ликёр, яичный белок, лимонная вода и сахарный сироп.

550 р. / 150 мл

Spotify

Spotify

Полет валькирий — Рихард Вагнер

Гениальное сочинения Вагнера наверняка хоть раз в жизни слышал каждый человек. Изначально «Полёт валькирий» был задуман композитором не как самостоятельная композиция, а как часть оперы. Наш коктейль отдаёт дань классике, а именно спритцам, и как «Полет валькирий» является частью коктейльной оперы. Состав: розовое вино, ликёр из бузины и джин.

550 р. / 120 мл

Голубая рапсодия
— Джордж Гершвин

Джордж Гершвин внёс эту композицию в ещё несуществующее сочинение программы предстоящего концерта. А этот коктейль тоже был первым в ещё планируемой коктейльной карте Goose Goose! Освежающий и лёгкий напиток, в составе которого милк панч джин на эрл грей и французский розовый сидр, – идеальный аккомпанемент для вашего летнего вечера в ресторане.

650 р. / 120 мл

Spotify

Spotify

Времена года.
Лето — Антонио Вивальди

В композиции «Лето» Вивальди блестяще воплощает состояния, которые хорошо знакомы каждому, изнывающему от зноя: лень и истома. Наш коктейль создан, чтобы справляться со зноем в это жаркое лето. В его составе джин, сухой вермут, лимончелло и вода S. Pellegrino клементин-персик.

650 р. / 200 мл

Вальс цветов
— Чайковский

Завораживающая музыка Вальса, глубоко проникающая в душу, ассоциируется с тёплым лучом солнца, который мы постарались передать в нашем коктейле благодаря сочетанию джина с кордиалом гранат-лаванда, красным вермутом и водой S. Pellegrino со вкусом граната и чёрной смородины. Настоящий вальс вкусов!

550 р. / 200 мл

Spotify

Spotify

Вальс №2 — Дмитрий Шостакович

Когда был придуман «Вальс №2», у всех было предположение, что Шостакович воспользовался приёмом компиляции: взял наиболее яркие интонации из популярных произведений и соединил их. Никто не знает, так ли это на самом деле, но в нашем коктейле точно соединились самые яркие ингредиенты, словно они создают совершенное произведение искусства. В составе грушевая водка, сироп грецкого ореха, лимонная вода и пена из горгонзолы.

550 р. / 130 мл

Spotify

Коктейльная классика

Белый Русский
White Russian

Изобретен в 60-ые, считался женским коктейлем, нереднко стильные девушки под музыку «диско» танцевали на барных стойках в обнимку с бокалом White Russian. В составе кофейно-сливочный ликер и водка Белуга.
Coffee and cream liqueur, vodka Белугв

550 р. / 110 мл

Космополитан
Cosmopolitan

Тоби Чеккини с Манхэттена доработал изначальный рецепт классического Космо, известного с 1985 года, сделав его на основе водка, ликера Cointreau и клюквенного морса . Пик популярности коктейль приобрел в 1998 году благодаря сериалу «Секс в большом городе», в котором «Космополитен» являлся любимым напитком героинь. Vodka Белуга, Cointreau liqueur, cranberry juice

550 р. / 130 мл

Драй Мартини
Dry Martini

Традиционно местом происхождения мартини считается Сан-Франциско. Коктейль для мужчин в смокингах, любимый коктейль Бонда, Яна Флеминга, Хэменгуэя и Черчилля — это «Сухой мартини». Коктейль-аперитив , традиционно на основе джина и вермута.
Cocktail aperitif, traditionally based on gin and vermouth.

550 р. / 90 мл

Олд Фешн
Old Fashion

Еще в 1881 году в городе Луисвилль, что в штате Кентукки, открылся Pendennis Club, где собиралась местная аристократия. Среди прочих напитков в нем подавали Whiskey Cocktail. Его рецептура практически не изменилась за 200 лет. Это крепкий цитрусовый коктейль на основе бурбона с добавлением ангостуры. Strong citrus cocktail based on bourbon with angostura.

550 р. / 90 мл

Маргарита
Margarita

В 40ое в Мексике в городке Тихуана любила коротать время в барах светская публика США. Среди них за барной стойкой сидела актриса Марджори Кинг, которая имела аллергию на все виды алкоголя, кроме текилы, тогда бармен и смешал для нее напиток в изящном бокале: текила, лимонный сок, ликер Cointreau.
Tequila, lemon juice, Cointreau liqueur.

550 р. / 120 мл

Кловер клаб
Clover Club

С 1882 по 1914 год джентльменский клуб Clover Club устраивал ежемесячные обеды в филадельфийском The Bellevue-Stratford Hotel, на которых встречались сливки общества. Там и зародилось история одноименного коктейля. В основе джин, лимонный сок, малиновое пюре и яичный белок.
Gin, lemon juice, raspberry puree, egg white

550 р. / 150 мл

Дайкири
Daiquirí

Родился на Кубе, ходит много легенд о том, что к его созданию приложил руку сам Хемингуэй. Сочетает в себе белый ром, сока лайма и тростниковый сахар.
White rum, lime juice, cane sugar

550 р. / 120 мл

Виски Сауэр
Whiskey Sour

Один из пионеров коктейльной классики. Напиток появился в XIX веке. По одной из версий, англичанин Элитотт Стабб, перебравшийся в Перу, придумал Whiskey Sour в своем припортовом баре, а матросы разнесли рецепт напитка по всему свету.

550 р. / 100 мл

Беллини
Bellini

Напиток был «изобретен» в Венеции Джузеппе Чиприани, владельцем культового «Бара Гарри», и назван в честь живописца Джовани Беллини, который умел добиваться на своих полотнах уникальных розоватых оттенков белого одеяния святых и ангелов. Цвет получившегося коктейля напомнил Чиприани этот цвет.

550 р. / 150 мл

Кампари Шприц
Campari Spritz

Это собрат напитка Апероль Шприц. При этом последний более мягкий, а коктейль на основе Биттера «смелый и напористый».

550 р. / 170 мл

Апероль Шприц
Aperol Spritz

Немецкое «спритц» означает «плеснуть», поэтому «Aperol Spritz» — это ликер Апероль, который плеснули в венецианский коктейль.

550 р. / 170 мл

Негрони
Negroni

Коктейль был придуман графом Камилло Негрони, который попросил бармена Фоско Скарселли сделать более алкогольным его любимый коктейль «Американо», заменив содовую на джин.

550 р. / 120 мл

Лимончелло Шприц
Limoncello Spritz

Фантазии GOOSE GOOSE на тему летнего итальянского коктейля. Смешали свежую лимонную классику с игристым в бокале для Апероль — Limoncello Spritz — новый хит сезона.

550 р. / 170 мл

Джин Тоник
Gin Tonic

Появился первоначально Джин Тоник, как своеобразное лекарственное питье в XVIII веке. Смешивали его английские солдаты, когда находились на территории Индии.

Gordon’s — 550 р., Bombay — 590 р,, Tankerey Ten — 750 р.

от 550 р. / 190 мл

Вернуться в меню

17 коктейлей с Кампари (Campari)

Итальянский алкогольный напиток Кампари, получивший название по фамилии своего изобретателя, постепенно стал одним из самых популярных цитрусово-травяных ликеров в мире. Горький ликер Кампари, как и другие биттеры, является популярным ингредиентом для ряда довольно известных и многими любимых коктейлей. Коктейли с Кампари (Campari) весьма необычные из-за свойств ликера, обычно имеют горьковатый привкус и красный окрас. Только на Взболтай все рецепты коктейлей с Кампари представлены исключительно с фотографиями. Теперь вам не придется гадать, как же все-таки выглядит тот или иной коктейль.

Валентино (The Valentino)

Рецепт коктейля

  1. Водка или Ржаной Виски – 60 мл
  2. Кампари – 15 мл
  3. Сладкий вермут – 15 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в стакан для смешивания наполненный льдом.
  2. Перемешайте и перелейте через стрейнер в охлажденный коктейльный бокал.
  3. Украсить спиралью из цедры апельсина.

Другие похожие напитки

Этот популярный красный биттер входит в состав многих напитков, среди которых коктейли:

  • —с вермутом—;
  • —с «Мартини»—;
  • с вином;
  • с бурбоном;
  • —с водкой—;
  • с кальвадосом;
  • с джином;
  • с текилой.

Самым популярным и известным во всем мире является —коктейль Негрони—, который помимо классического рецепта имеет еще три вариации:

  • «Президент Негрони»;
  • «Мсье Негрони»;
  • «Негрони и цветок».

Ждем ваших отзывов о полюбившихся коктейлях с красным биттером «Campari».

Голландский Негрони (Dutch Negroni)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 30 мл
  2. Джин – 45 мл
  3. Сладкий вермут – 30 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в стакан для смешивания наполненный льдом.
  2. Тщательно перемешайте с помощью барной ложки.
  3. Перелейте через стрейнер в бокал рокс наполненный кубиками льда.
  4. Украсить массивной долькой апельсина.

Как правильно пить Кампари

Львиная доля популярности Campari приходится не только на его вкусовые особенности, но еще и на успешные рекламные кампании с участием известных звезд: Джессики Альбы, Милы Йовович, Евы Мендес и многих других. Итальянский бренд позиционирует себя, как утонченный, жаркий и страстный ликер.

Джессика Альба в рекламе Campari

Охлаждать ликер необходимо, так как теплым или комнатной температуры он становится достаточно специфичным и не очень приятным на вкус.

Чтобы снизить крепость ликера и поубавить его горечи, вермут Campari принято разбавлять свежими соками:

  • апельсиновым;
  • грейпфрутовым;
  • лимонным;
  • вишневым;
  • гранатовым;
  • ананасовым.

Смешивается такое освежающее питье соотношением 1:2 (одна часть биттера и две доли сока). Душной летней порой нет ничего лучше стаканчика этого напитка с кубиками льда, позвякивающими об стекло. Молодые люди предпочитают миксовать вермут с газированными напитками, чаще всего с такими, как «спрайт» или «швепс».

Микс вермута и апельсинового сока уже давно стал признанным простым коктейлем под названием «Гарибальди». В это питье иногда добавляют листики мяты или мелиссы для придания вкусу пикантности.

Еще одним выбором, с чем пить Кампари, становятся другие алкогольные напитки:

  • мартини;
  • водка;
  • джин;
  • коньяк;
  • и другие.

Обычно смешивают в соотношении 1:1.

Джинджер Роджерс (Ginger Rogers)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 60 мл
  2. Апельсиновый сок – 90 мл
  3. Клубника — 1 шт.
  4. Клементин – 1 шт.
  5. Молотый имбирь — щепотка
  6. 7UP или другая содовая

Как приготовить

  1. В шейкере с помощью мадлера раздавите клубнику и клементин.
  2. Налейте в шейкер Кампари и сок. Добавьте лед в шейкер на треть.
  3. Тщательно взболтайте и перелейте через стрейнер в стакан хайбол наполненный кубиками льда.
  4. По желанию долейте содовой.
  5. Украсить кусочками клубники и клементина. Сверху посыпать молотым имбирем.

Чрезмерное употребление алкоголя вредит Вашему здоровью

Продажа спиртных напитков несовершеннолетним лицам запрещена. Обращаем ваше внимание на то, что данный интернет-сайт носит исключительно информационный характер и ни при каких условиях информационные материалы и цены, размещенные на сайте, не является публичной офертой, определяемой положениями Статьи 437 Гражданского кодекса РФ.

В соответствии с рекомендациями ФС РАР уведомляем: алкогольная продукция может быть приобретена непосредственно в магазинах WineStreet.

ООО «Вайнс Маг», ИНН 9710065810, лицензия: 77РПА0014121 от 26.09.2018 109052, г. Москва, 4-я Магистральная, 5, стр. 1, время работы: ежедневно с 10:00 до 22:00.

Продажа спиртных напитков несовершеннолетним лицам запрещена.

Обращаем ваше внимание на то, что данный интернет-сайт носит исключительно информационный характер и ни при каких условиях информационные материалы и цены, размещенные на сайте, не является публичной офертой, определяемой положениями Статьи 437 Гражданского кодекса РФ.

В соответствии с рекомендациями ФС РАР уведомляем: алкогольная продукция может быть приобретена непосредственно в магазинах WineStreet.

ООО «Вайнс Маг», ИНН 9710065810, лицензия: 77РПА0014121 от 26.09.2018 109052, г. Москва, 4-я Магистральная, 5, стр. 1, время работы: ежедневно с 10:00 до 22:00.

Диеци Е Лоде (Dieci E Lode)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 15 мл
  2. Джин – 75 мл
  3. Грейпфрутовый сок – 45 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в шейкер наполненный на треть льдом.
  2. Взболтать и процедить через стрейнер в охлажденный льдом коктейльный бокал.
  3. Украсить ломтиком лайма.

Пирог из Лосося с Луком-Пореем

…………………………………………………………………………………………………………………………………………………

Время приготовления — 1 ч

Ингредиенты на 6-8 порций:

  • Слоеное тесто — 1 стандартная упаковка
  • Копченый Лосось — 250 г
  • Лук-Порей — 1 стебель
  • Свежие жидкие сливки — 150 мл
  • Яйца — 2 шт.
  • Соль
  • Перец
  • Оливковое масло первого холодного отжима
  • Мелко нарезанные листья петрушки
Рецепт приготовления:
  1. Лук Порей вымыть и разрезать вдоль на 2 части.
  2. Отложить немного для украшения готового пирога.
  3. Копченого лосося нарезать полосками, сложить вместе с оставшимся луком и все мелко накрошить.
  4. Примерно треть получившейся массы сложить в сотейник, добавить 3 ст. л. оливкового масла и потушить на медленном огне.
  5. Добавить вторую треть лососевой массы в сотейник, прибавить огонь до среднего и тушить еще несколько минут.
  6. Затем долить в сотейник примерно 75 мл теплой воды (4 ст.л.), положить туда оставшуюся смесь лосося и лука и тушить еще 5 мин.
  7. Затем снять сотейник с огня и поставить остывать.
  8. Вылить сливки в миску, добавить яйца, соль и перец и хорошенько перемешать вручную венчиком-сбивалкой.
  9. Добавить к полученной массе остывшую смесь лосося и лука порея и аккуратно перемешать до получения однородной массы.
  10. Выстелить дно формы для пирога бумагой для выпечки, выложить сверху ровным слоем тесто и поставить в духовку, заранее разогретую до 220° примерно на 20 мин.
  11. Вынуть наполовину испеченное тесто из духовки, аккуратно выложить поверх него рыбную массу и поставить назад в духовку.
  12. Выпекать, пока поверхность пирога не станет золотистой и плотной.
  13. Вынуть из духовки, порезать на 6-8 частей и подавать, посыпав каждую порцию нарезанными листьями петрушки и луком пореем.

………………………………………………………………………………………………….. Рецепт № 2

Закон открытий (Opening Act)

Рецепт коктейля

  1. Имбирный ликер (Domaine de Canton) – 60 мл
  2. Кампари – 15 мл
  3. Лимонный фреш – 30 мл
  4. Тоник
  5. Мята

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты, кроме тоника, в шейкер на треть наполненный льдом.
  2. Тщательно взболтайте и перелейте через стрейнер в охлажденный бокал коллинз.
  3. Долейте коктейль тоником.
  4. Украсить веткой мяты.

Производство ликера Кампари

Подробный состав ликера КампариКампари производители, разумеется, стараются не разглашать. Во вкусе ощущается горечь, которую жидкость приобретает благодаря наличию в составе апельсина; аромат раскрывается нотками спелой ежевики, свежескошенной травы, дубовой коры, кислого розового винограда и липового меда. Вкус напитка раскрывается постепенно: горечь медленно сменяется приятной, еда ощутимой сладостью.

Споры о том, какие конкретно компоненты и в каком количестве входят в рецептуру Кампари ведутся не первый десяток лет. Так, разные специалисты называют разные цифры: кто-то говорит, что в состав биттера входит всего 20 ингредиентов, кто-то утверждает, что их 80. Единственное, в чем сходятся мнения специалистов – в состав ликера точно входят сахар, алкогольная составляющая, питьевая вода, кора каскаролла, померанец Чинотто, женьшень, горечавка, аир обыкновенный и ревень. Помимо этого, в составе Кампари также различают различные химические минералы.

Ликер Кампари производится посредством трехступенчатой дистилляции: на первом этапе осуществляется перегонка спирта, на втором происходит отбор вредных для здоровья фракций и на третьем – длительное настаивание спиртовой основы на травяных и фруктовых ингредиентах.

Кампари Маргарита (Campari Margarita)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 30 мл
  2. Текила – 45 мл
  3. Куантро – 15 мл
  4. Лаймовый фреш – 30 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в шейкер наполненный на треть льдом.
  2. Взболтать и процедить через стрейнер в охлажденный льдом бокал Маргарита.

Интересные факты о Кампари

Рассмотрим некоторые интересные факты о Кампари.

  • На первых порах цвет напитка обеспечивался введением в состав пищевого красителя кармина, получаемого путем переработки самок насекомых кошенили. Сейчас производители применяют более гуманные синтетические заменители.
  • Конкуренты, желая понизить спрос на ликер, утверждали, что в состав Кампари входит наркотическое вещество туйон, способное вызывать галлюцинации, однако ни одна из многочисленных проверок не смогла это подтвердить.
  • Биттер получил название в честь своего «отца» и, по совместительству, владельца небольшой кондитерской лавки – Гаспаре Кампари.
  • В кулинарии Кампари часто используют в качестве добавки во время приготовления желе, крема для торта, пропитки для бисквита или дополнения к фруктовым нарезкам.

Ликер Кампари – это биттер со специфическим вкусом, который производится в Италии. Ег орецептура хранится в секрете. Часто Кампари используют для приготовления коктейлей.

  • Апероль: что это, как пить, состав, рецепты коктейлей
  • Ликер Амаретто: описание, состав, виды, как пить, история, крепость
  • Ликер Блю Кюрасао: состав, крепость, описание, рецепты коктейлей, как пить, разновидности и производители
  • Ликер Бейлис: описание и состав, как пить, рецепты в домашних условиях

Кампари Спарклинг Пэшн (Campari Sparkling Passion)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 60 мл
  2. Просекко – 60 мл
  3. Грейпфрутовый сок – 30 мл
  4. Пюре из маракуйи – 3 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в шейкер наполненный треть льдом.
  2. Взболтать и процедить через стрейнер в охлажденный льдом флюте.
  3. Украсить малиной, апельсином и свежей мятой на зубочистке.

С чем сочетать биттер

Цитрусово-травяной ликер пьют не разбавленным как аперитив. Предварительно напиток охлаждают до 10°C либо добавляют лед.

Теплый биттер утрачивает вкусовую яркость, приобретая неприятный травяной привкус.

Чистый ликер разливают по небольшим (50 мл) рюмочкам, пьют не спеша, маленькими глотками. А закусывают разными фруктами: лимонами, яблоками, киви, виноградом, апельсином.

Также ликер можно смешивать с разными жидкостями:

  1. С содовой. Этот способ считается классическим. Смешивают в таком соотношении: 1 часть алкоголя на 2 части содовой. Обязательно добавляют лед и дольку лимона. Идеальная закуска – фруктовая тарелка из грейпфрута, апельсина и лимона.
  2. С соками. Идеально Кампари миксуется с апельсиновым свежевыжатым фрешем. Отлично подходит для смешивания вишневый, ананасовый, гранатовый сок. Пропорции: 1 часть спиртного на 2 части фреша.
  3. С джином, вермутом, коньяком водкой и другим крепким спиртным биттер смешивают в пропорции 1:1.
  4. С газировкой – швепсом или спрайтом. Такой микс предпочитает молодежь.

Мнения расходятся по поводу сочетания ликера Кампари с лимонным и грейпфрутовым соком. Одни считают, что горечь в этих фруктах портит вкус напитка. Другим такое сочетание нравится.

Малена (Malena)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 30 мл
  2. Ржаной Виски – 30 мл
  3. Крепленое вино – 20 мл
  4. Апельсиновая вода – 5 капель
  5. Апельсиновый биттер – 3 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в стакан для смешивания наполненный льдом.
  2. Тщательно перемешайте с помощью барной ложки.
  3. Перелейте через стрейнер в охлажденный коктейльный бокал или бокал рокс.
  4. Украсить цедрой апельсина и измельченной корицей.

Италия – родина «Кампари» и не только…

Итальянцы обычно перед едой пьют аперитивы. Чаще всего это легкое белое вино. Бокал белого и красного вина можно употреблять во время еды, а вот по завершении трапезы подаются напитки, улучшающие пищеварение: коньяк, ликер, напоминающий вермут, или граппа.

Есть мнение, что самым популярным алкогольным напитком в Италии является именно биттер «Кампари», цена которого колеблется в пределах от 9,5 до 12 евро за бутылку. Не меньше распространен в стране ликер «Самбука», для его приготовления используют пшеничный спирт, сахар, вытяжки цветов, бадьян, ягоды бузины и различные травы. Средняя стоимость одной бутылки достигает 15 евро. Наибольшей популярностью у итальянцев пользуется самбука марки Molinari Sambuca Extra. А вот «Граппа» — самый крепкий напиток в Италии. По содержанию алкоголя его можно сравнить с водкой. Соответственно, это напиток на любителя. Пол-литровая бутылка «Граппы» обойдется от 7 до 10 евро.

Мохито Итальяно (Mojito Italiano)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 15 мл
  2. Ром – 45 мл
  3. Сахарный сироп – 20 мл
  4. Лимонный фреш – 20 мл
  5. Проссеко – 30 мл
  6. Мята – 3 веточки

Как приготовить

  1. С помощью мадлера раздавите мяту в шейкере таким образом, чтобы мята начала испускать эфирные масла.
  2. Налейте в шейкер все ингредиенты, кроме Проссеко, а затем добавьте лед.
  3. Хорошенько взболтайте и перелейте через стрейнер в хайбол наполненный кубиками льда.
  4. Долейте в хаболл Проссеко.
  5. Украсить веточкой мяты.

Состав и технология приготовления

Ликер Campari имеет ни с чем не сравнимый вкус, в котором горечь играет ключевую роль и отличает его от других знаменитых алкогольных напитков. Пробуя глоток биттера, в самом начале можно ощутить пряность, а затем затяжную приятную горечь. В ароматических нотках чувствуются ежевичные оттенки, древесный мох, виноградная лоза и листва. Доминируют в биттере цитрусовые тона, мед, хинин и ароматные травы. Далеко не всем приходится по вкусу ликер, но его всегда можно скомбинировать с другими напитками, и тогда он заиграет по-новому, станет менее агрессивным и более мягким.

Его состав никто точно не знает, потому что это большая тайна. С давних времен ведутся споры о том, сколько компонентов входит в алкоголь данного вида, но к единому мнению специалисты так и не пришли. По различным оценкам биттер содержит от 20 до 80 ингредиентов, из них знакомы потребителям только сахар, спирт и вода. По некоторым предположениям профессиональных дегустаторов напиток имеет в составе кору каскаролла, миртолистный померанец, женьшень, горечавку, аир и ревень. Кроме этого, в ликере присутствуют химические минералы, полезные для здоровья.

Особое внимание уделяется цвету напитка. До 2006 года для придания красивого темно-красного оттенка использовали кармин. Это натуральный краситель красного цвета, который производится самками кошенили. После 2006 года производители Кампари отказались от кармина в пользу искусственного красителя.

Готовится ликер путем настаивания, которое называется мацерацией.

Крепость алкогольного аперитива составляет 25-28% об.

Никарагуа Негрони Пунш (Nicaraguan Negroni Punch)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 450 мл
  2. 7-й летний Ром – 300 мл
  3. Красный вермут – 220 мл
  4. Грейпфрутовый сок – 300 мл
  5. Мед – 75 мл
  6. Свежий лимон – 12 шт.
  7. Сухая гвоздика – 30 шт.

Как приготовить

  1. Выдавите лимонный фреш из 10 лимонов в пластиковую посуду и добавьте сухую гвоздику. Перемешайте и поставьте в морозильную камеру. Дождитесь полной заморозки. Желательно использовать такую посуду, которая сформирует ледяную. Совет: используя различные формы, например силиконовые, вы можете добиться абсолютного разного дизайна ледяной глыбы.
  2. В посуду для пунша налейте все ингредиенты и тщательно перемешайте, затем достаньте заготовленную ранее ледяную глыбу и положите в пунш.
  3. Украсить кусочками свежего лимона.

Рецепты коктейлей с Campari

Известны десятки рецептов коктейлей с Кампари: простых и сложных. Каждый найдет напиток по своему вкусу.

Гарибальди

Вкусный и простой коктейль с соком апельсина создан в 1861 году в Милане. Назван микс в честь Джузеппе Гарибальди – известного итальянца-полководца, любившего носить яркую куртку красного цвета. Второе название коктейля – Кампари Оранж.

Состав:

Апельсиновый фреш140 мл
Ликер Кампари60 мл
Лед150 г
Апельсин1 долька

Приготовление:

  1. Заполнить льдом бокал.
  2. Влить фреш и биттер.
  3. Смешать.
  4. Украсить ломтиком апельсина.

Полезное видео рецепта коктейля с Кампари Гарибальди (Кампари Оранж)

Сатана

Коктейль схож с Гарибальди. Небольшие отличия в составе и пропорциях. Пойдет тем, кому хочется более насыщенный цитрусовый вкус.

Состав:

Кампари100 мл
Апельсиновый фреш60 мл
Сок лимона10 мл

Приготовление:

  1. В стакан всыпать лед.
  2. Влить соки и ликер.
  3. Перемешать.

С тоником

Биттер Кампари с тоником – самое простое сочетание для ценителей натурального вкуса ликера.

Состав:

Кампари50 мл
Тоник150 мл
Лед150 г
Апельсин или лайм1 долька

Приготовление:

  1. Хайбол наполнить льдом.
  2. Влить биттер, затем разбавить тоником.
  3. Перемешать напитки.
  4. Сервировать ломтиком цитруса.

Русский Campari

Очень простой в приготовлении коктейль. В него входит всего 2 компонента: водка и биттер. Как итог – мягкий вкус с небольшой горчинкой.

Состав:

Биттер50 мл
Водка50 мл

Приготовление:

  1. Шейкер заполнить льдом.
  2. Влить спиртное.
  3. Взбить.
  4. Перелить в охлажденный бокал через сито.

В качестве закуски к коктейлю подают маслины или оливки.

Красные розы

Простой коктейль на основе Кампари с шампанским легко приготовить дома.

Состав:

Кампари100 мл
Сухое шампанское100 мл
Кубики льда150 мл

Приготовление:

  1. Хайбол заполнить кубиками льда.
  2. Налить ликер и шампанское.
  3. Смешать.

Для украшения коктейля подойдет цедра или ломтик лимона.

Белый

Тандем из белого сухого вина с ликером Кампари понравится женской аудитории.

Состав:

Белое сухое вино50 мл
Кампари20 мл
Лед150 г

Приготовление:

  1. Бокал для вина наполнить кубиками льда.
  2. Налить вино и биттер.
  3. Перемешать.

В качестве украшения коктейля используют ломтик апельсина.

Яблочный Джек

Ярко выраженный яблочный вкус и почти полное отсутствие горечи – отличительны черты коктейля.

Состав:

Кампари50 мл
Виски50 мл
Яблочный сок300 мл

Приготовление:

  1. В шейкер положить лед.
  2. Влить все жидкости.
  3. Взболтать и перелить сквозь стейнер в высокий узкий бокал.

Американо

Этот микс стал первым коктейлем с биттером. Создал его Гаспаре Кампари – основатель самого бренда Campari.

Состав:

Ликер30 мл
Вермут Россо30 мл
Содовая100 мл
Лед150 г

Приготовление:

  1. В олд фешен или рокс влить спиртное.
  2. Разбавить газировкой.
  3. Смешать компоненты.
  4. Бросить лед.
  5. Декорировать апельсиновым кружочком.

Подробнее о коктейлях с вермутом: 25 вкусных рецептов для приготовления в домашних условиях →

Негрони

Создателем сочетания джин, кампари и вермут стал граф Камилло Негрони. Произошло это в 1919 году. По сути это интерпретация коктейля «Американо», в котором заменили содовую на джин, для увеличения крепости напитка. Это один из самых популярных коктейлей.

Внешне Негрони не отличается от Американо. Поэтому декорируют их по-разному: первый – апельсиновой цедрой, второй – ломтиком свежего цитруса.

Состав:

Сухой джин30 мл
Биттер Кампари30 мл
Вермут Россо30 мл
Лед150 г

Приготовление:

  1. В рокс налить спиртное в любой последовательности.
  2. Перемешать.
  3. Добавить лед.
  4. Декорировать апельсиновой цедрой.

Видео рецепт приготовления коктейля с Кампари Негрони в домашних условиях

Валентино

Напиток назван в честь бармена, его придумавшего. От Негрони и Американо отличается лишь легким зерновым привкусом, который в коктейль привносит виски.

Состав:

Ржаной виски60 мл
Кампари15 мл
Мартини Россо15 мл
Лед100 мл

Приготовление:

  1. В шейкер положить лед.
  2. Влить все жидкие составляющие.
  3. Взболтать.
  4. Через стейнер перелить в бокал.
  5. Декорировать цедрой апельсина.

Волна

Бодрящий и мягкий напиток с фруктово-травяным вкусом.

Состав:

Биттер30 мл
Апельсиновый фреш100 мл
Клубничный сок с мякотью200 мл

Приготовление:

  1. В высоком бокале смешать соки и ликер.
  2. Добавить по желанию кубики льда.

Подавать с соломинкой. Бокал украсить ягодкой клубники.

Джинджер Роджерс

Коктейль получил название в честь знаменитой американской актрисы, хотя она не увлекалась алкогольными напитками. Все дело в том, что имя Джинджер в переводе обозначает «имбирь». А эта пряность является обязательным компонентом этого коктейля.

Состав:

Кампари60 мл
Сок апельсина90 мл
Клубника1 шт.
Клементин1 шт.
Имбирь молотыйЩепотка
Содовая (7UP или другая)60 мл

Приготовление:

  1. В шейкере раздавить пестиком или мадлером клементин и клубнику.
  2. Влить сок и биттер.
  3. Заполнить шейкер льдом.
  4. Взболтать и перелить через ситечко в бокал.

Количество содовой можно варьировать по личным предпочтениям.

Шприц

Коктейль с ликером Кампари Шприц обладает терпким вкусом. Приготовить напиток легко самостоятельно.

Состав:

Кампари60 мл
Игристое вино Просекко60 мл
Содовая30 мл
Оливка1 шт.

Приготовление:

  1. В большой бокал насыпать лед.
  2. Поочередно налить игристое вино, ликер и содовую.
  3. Перемешать.
  4. Украсить оливкой.

На закуску к коктейлю подают колбасную и сырную нарезку.

Подробнее о коктейлях с Просекко: 15 лучших рецептов →

Адриатика

Этот коктейль популярен на курортах Греции и Италии благодаря своим универсальным свойствам. Он отлично утоляет жажду в летний зной и согревает прохладным вечером.

Состав:

Кампари35 мл
Водка25 мл
Лимонный ликер1 ч.л.
Апельсиновый сок2 ч.л.
Лед100 г

Приготовление:

  1. В шейкере смешать сок, водку и лимонный ликер.
  2. В бокал всыпать лед.
  3. Затем налить микс из шейкера.
  4. Сверху влить биттер.
  5. Перемешать коктейльной ложечкой.

Украшают коктейль долькой цитруса на свой вкус.

Игристая страсть

В этом коктейле гармонично сочетается Кампари с шампанским и грейпфрутовым соком.

Состав:

Шампанское60 мл
Биттер60 мл
Сок грейпфрута30 мл
Апельсин1 долька
Малина1 ягода
Мята1 листик

Приготовление:

  1. В заранее охлажденный бокал влить биттер с грейпфрутовым соком.
  2. Добавить шампанское.
  3. Смешать.
  4. На зубочистку насадить ломтик апельсина, малину и листик мяты. Сервировать коктейль.

При смешивании биттера и сока с шампанским, напиток начинает активно пениться.

Профи

Дамский вариант коктейля с приятными нотками цитруса.

Состав:

Кампари30 мл
Мартини Бьянко30 мл
Шампанское100 мл
Апельсиновый фреш40 мл
Лед6 кубиков

Приготовление:

  1. Шампанское, фреш, кампари и мартини влить в шейкер.
  2. Смешать и перелить в бокал со льдом.
  3. Сервировать кусочком апельсина.

Кампари Маргарита

Одна из разновидностей коктейля Маргарита. Попробовать напиток можно не только в баре. Ведь способ приготовления очень прост.

Состав:

Кампари30 мл
Текила45 мл
Куантро15 мл
Лаймовый фреш30 мл

Приготовление:

  1. Заполнить льдом шейкер.
  2. Взболтать компоненты.
  3. Перелить в бокал для Маргариты смесь, используя ситечко.

Би ту Би (B2B)

В этом коктейле объединились сразу два биттера – итальянский и чешский. Микс имеет выраженный травяной привкус.

Состав:

Кампари20 мл
Бехеровка40 мл
Виноградный сок50 мл
Газированная вода100 мл
Лед100 г
Лайм1 долька

Приготовление:

  1. Бокал заполнить кубикам льда.
  2. Влить биттеры.
  3. Влить сок винограда.
  4. Смешать.
  5. В конце влить газировку.
  6. Сервировать ломтиком лайма.

Итальянский Мохито

От классического рецепта в этом Мохито осталось несколько ингредиентов: ром, мята и сахар. Напиток получается необычным, но вкусным. Особой популярностью сочетание Кампари и Просекко пользуется у женской аудитории.

Состав:

Белый ром Bacardi45 мл
Шампанское Просекко30 мл
Ликер Кампари15 мл
Лимонный сок20 мл
Сахарный сироп20 мл
Мята3 веточки
Лед250-300 г

Приготовление:

  1. Мяту положить в шейкер и подавить пестиком (или мадлером), чтоб дала сок.
  2. Добавить лед, сироп, сок, рок и ликер.
  3. Хорошенько взболтать.
  4. Перелить в массу в бокал.
  5. Налить Просекко.
  6. Декорировать веточкой мяты.

Больше рецептов коктейлей с белым ромом Бакарди (Bacardi) →

Цитрусовый торнадо

Коктейль отличается выраженным цитрусовым сладко-горьким вкусом.

Состав:

Ликер Старый Таллин40 мл
Биттер Кампари40 мл
Мартини Россо40 мл
Сок лимона20 мл

Приготовление:

  1. Шейкер заполнить льдом.
  2. Влить туда спиртное и сок.
  3. Смешать и перелить в охлажденный стакан..
  4. Украсить апельсиновой цедрой.

Закон открытий

Цитрусовый, пряный и травяной – все вкусы в этом коктейле находятся в гармонии.

Состав:

Имбирный ликер60 мл
Кампари15 мл
Лимонный сок30 мл
ТоникПо вкусу
Мята1 веточка

Приготовление:

  1. Заполнить льдом шейкер.
  2. Добавить все компоненты, исключая тоник.
  3. Хорошенько взболтать.
  4. Перелить через ситечко в бокал.
  5. Долить тоник.
  6. Декорировать коктейльной трубочкой.

Баттер-скотч

Коктейль с пикантным имбирным вкусом и оттенками ванили.

Состав:

Кампари20 мл
Скотч50 мл
Херес5 мл
Ванильный сироп5 мл
Корень имбиря5 г
Апельсиновая цедра1 кусочек
Лед200 г

Приготовление:

  1. Очищенный корень имбиря положить в шейкер и хорошенько его растолочь.
  2. Влить жидкие составляющие.
  3. Всыпать кубики льда, потрясти.
  4. Перелить через сито коктейль в охлажденную мартинку.
  5. Декорировать цедрой апельсина.

Никарагуа Негрони Пунш

Рецепт этого коктейля с Кампари легко воплотить в домашних условиях. Для приготовления понадобится емкость для пунша и силиконовая форма для создания ледяной глыбы. Коктейль с необычной подачей приятно удивит гостей.

Состав:

Кампари450 мл
Ром300 мл
Мартини Россо220 мл
Грейпфрутовый фреш300 мл
Жидкий мед75 мл
Лимон12 шт.
Бутоны гвоздики30 шт.

Приготовление:

  1. Выжать сок из 10 лимонов.
  2. Добавить к фрешу гвоздику.
  3. Смешать и перелить в форму.
  4. Убрать в морозилку до полной заморозки глыбы.
  5. В емкость для приготовления пунша влить ром, кампари, мартини, сок грейпфрута.
  6. Добавить мед и перемешать.
  7. Положить ледяную глыбу.
  8. Декорировать коктейль ломтиками лимона.

Горькая Сангрия

Вариация классического коктейля. Отличается неожиданно возникающей горечью Кампари.

Состав:

Красное вино400 мл
Клюквенный сироп100 мл
Кампари150 мл
Бурбон150 мл
Апельсин1 шт.
Минеральная газированная вода
Свежая клюква

Приготовление:

  1. В емкость объемом 1 л налить вино, сироп, бурбон и кампари. Смешать.
  2. Апельсин порезать кружочками. Половину из них положить в емкость с алкоголем.
  3. Убрать в холодильник микс на 1,5-2 часа.
  4. При подаче коктейль разливают в бокалы наполовину и разводят его 90 мл газировки.
  5. Декорируют кружочком апельсина и ягодкой клюквы.

Горькая пилюля

Многослойный коктейль с горьким первоначальным вкусом и приятным послевкусием.

Состав:

Водка15 мл
Кампари15 мл
Сироп из маракуйи20 мл

Приготовление:

  1. В стопку налить сироп.
  2. Далее аккуратно по тыльной стороне ложечки влить Кампари.
  3. Последний слой коктейля – водка.

Коктейль принято пить одним глотком.

Перечисленные рецепты коктейлей с Кампари – это известные миксы на основе биттера, которые можно приготовить самостоятельно у себя на кухне.

Автор: Евгения Гончарова, специально для Tonnasamogona.ru

Район Негрони (Neighborhood Negroni)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 30 мл
  2. Джин – 30 мл
  3. Красный вермут – 30 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в стакан для смешивания наполненный льдом.
  2. Тщательно перемешайте с помощью барной ложки.
  3. Перелейте через стрейнер в охлажденный коктейльный бокал.
  4. Украсить цедрой апельсина.

Рецепт приготовления «Топ скуп»

В качестве основы в этом миксе служит водка, а вкусовые нюансы создают дынный ликер, ананас и лайм. Такое экзотическое сочетание понравится тем, кто любит пикантные вкусы.

Что подготовить

КомпонентыКоличество
водка30 мл
ликер из дыни10 мл
«Campari»5 мл
биттер грейпфрутовый2 мл
сок ананаса30 мл
фреш лайма10 мл
физалис5 г
кубики замороженной воды200 г

Как сделать

  1. В шейкере соедините 10 мл фреша лайма, 30 мл сока ананаса, 5 мл «Campari», 10 мл ликера и 30 мл водки.
  2. Теперь добавьте 2 мл грейпфрутового биттера и 200 г кубиков замороженной воды.
  3. Встряхните хорошенько шейкер и через ситечко перелейте в стакан полученную смесь.
  4. Украсьте физалисом.

C&B Олд Фешен (C&B Old Fashioned)

Рецепт коктейля

  1. Джин – 45 мл
  2. Лиллет Бланк (Lillet Blanc) – 20 мл
  3. Кампари – 20 мл
  4. Бенедиктин (Bénédictine) – 20 мл
  5. Куантро – 20 мл
  6. Содовая

Как приготовить

  1. Налейте все ингредиенты, кроме содовой, в стакан для смешивания со льдом.
  2. Тщательно перемешайте с помощью барной ложки.
  3. Перелейте через стрейнер в бокал олд фешен наполненный кубиками льда.
  4. Долейте коктейль содовой.
  5. Украсить цедрой апельсина.

Виды Campari

Предприятие, выпускающее данный вид ликера, никогда не гналось за количеством и баснословными прибылями. В линейке всего две разновидности.

Кампари Биттер

Производители уверяют, что ликер Campari Bitter производится по той самой схеме, которую в XIX веке разработал Г. Кампари. Это ликер со сложным вкусом, сочетающим аромат трав, фруктовые нотки, специи.

Крепость биттера может быть разной, в зависимости от страны, в которую его импортируют. Примерный диапазон — от 20,5 до 28,5°. Разливают напиток в бутыли по 0,5, 0, 7 и 1,0 л.

Кампари Сода

Слабоалкогольный напиток для категории людей, не переносящих крепкое спиртное. По классификации это скорее коктейль, чем ликер. В нем всего 10°.

На вкус десертный ликер Кампари достаточно мягкий, без выраженной горечи. Для его создания берут классический биттер Кампари, разбавляют содовой водой, обогащают газом.

Продается Кампари Сода в небольших бутылочках, объемом всего 0,1 л.

Сиело Россо (Cielo Rosso)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 30 мл
  2. Цитрусовая водка – 60 мл
  3. Сок красный апельсин – 60 мл
  4. Лимонный фреш – 30 мл
  5. Сахарный сироп – 30 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в шейкер на треть наполненный льдом.
  2. Тщательно взболтайте и перелейте через стрейнер в охлажденный коктейльный бокал.
  3. Украсить спиралью из цедры лимона, и свежей веткой базилика.

Знаменитый вкус Кампари

Ликер Кампари

Дегустаторы отмечают, что ликер имеет интенсивный аромат и горьковатый вкус, присущий всем биттерам. Многие известные бренды скрывают рецептуру своих продуктов, чтобы никто из конкурентных компаний не смог придумать более совершенный аналог. Правда, попыток всё равно никто не оставляет. Аперитив Кампари биттер не стал исключением. Поэтому для неспециалиста по алкогольным напиткам угадать, каков же истинный состав вермута, представляется непосильной задачей.

По профессиональным оценкам, рецептура ликера включает от 50 до 69 ингредиентов. Основными компонентами в составе Кампари являются:

  • пряные травы;
  • кора деревьев;
  • специи;
  • цедра различных фруктов;
  • кармин.

Удивительный цвет напиток обретает благодаря пищевому красителю – кармину, эта специфическая амброзия имеет свой знаменитый насыщенный цвет рубина. До 2006 его получали из кошенильного червеца (кошенили) – насекомого из отряда полужесткокрылых, а после перешли только на искусственные красители.

По некоторым данным первые партии включали в себя (подобно ) наркотическое вещество – туйон, дающее галлюциногенный эффект. После этого многочисленные инспекционные проверки множество раз проводились на производстве, но эта информация так и не была доказана и перешла в разряд легенд

Определенно сомелье говорят о земляных и древесных нотках ежевики, винограда, мха, лесной подстилки, камней аромата вермута. Также угаданы дегустаторами померанец миртнолистный (горький средиземноморской апельсин), аир, желтая горечавка, каскаролла и пальчатый ревень. Все ингредиенты смешиваются между собой определенными пропорциями, затем полученный состав разводят с сахарным сиропом и водой, а после добавляют красители.

Биттер Кампари также не обделен такими химическими элементами, которые полезны для здоровья:

  • витаминами В2 и РР;
  • калием;
  • кальцием;
  • магнием;
  • железом;
  • фосфором;
  • натрием.

Вкус аперитива – острый, с вкраплениями хинина, меда, цедры цитрусовых фруктов, пепла, земли.

Для тех, кто следит за фигурой, калорийность напитка – 112 ккал на 100 грамм питья. А крепость не разбавленного кампари 25-28%. Нельзя не вспомнить о такой разновидности ликера, как Campari Soda: крепость 10%.

Рандеву

Ингредиенты

  1. 15 мл — Джин
  2. 15 мл — Киршвассер
  3. 15 мл — Кампари
  4. 2 капли — Лимонный сок (фреш)

Как сделать коктейль

  1. В шейкере со льдом взболтайте все ингредиенты.
  2. Перелейте через стрейнер содержимое шейкера в охлажденный коктейльный бокал.
  3. Украсить спиралью из цедры лимона.

Make Me Please Це Shakerato!

Все началось, на самом деле, в 2021. Это был один из моих приездов в Parovoz Speakeasy, может на курсы, может на какое-то мероприятие по Martini Time Machine, не помню уже. Помню только, мы ехали по бульвару Шевченко и Сергей Алексеев, новоиспеченный бренд-амбасадор Campari в Украине только вернувшийся из Campari Academy в Милане, сказал: «А ты знаешь, он действительно крутой и вкусный, просто надо взбить как следует… и тогда эта вот пенка будет… они его пьют и любят даже, правда…».

Что? Campari Shakerato. Порция Campari Bitter взбитая в шейкере со льдом и поданная straight up в коктейльном бокале.
Та ну шо ж за дичь.
Нет, не дичь, ребята. Чистая итальянская La Dolce Vita в бокале. И да, он действительно с пенкой

рецепты с шампанским, соком, тоником и мартини в домашних условиях

Кампари — темно-красный итальянский аперитив крепостью 25 градусов. В его составе насчитывается более 60 различных трав и фруктов. А точная рецептура держится в тайне с момента создания биттера.

В равной степени сладкий и горький, он быстро стал желанным ингредиентом многих известных миксов. Коктейли с Кампари имеют необычный пряный аромат и утонченный травяной вкус. Такие напитки приятно готовить и пить, а если есть нужные компоненты — легко сделать в домашних условиях.

С чем сочетать биттер

Цитрусово-травяной ликер пьют не разбавленным как аперитив. Предварительно напиток охлаждают до 10°C либо добавляют лед.

Теплый биттер утрачивает вкусовую яркость, приобретая неприятный травяной привкус.

Чистый ликер разливают по небольшим (50 мл) рюмочкам, пьют не спеша, маленькими глотками. А закусывают разными фруктами: лимонами, яблоками, киви, виноградом, апельсином.

Также ликер можно смешивать с разными жидкостями:

  1. С содовой. Этот способ считается классическим. Смешивают в таком соотношении: 1 часть алкоголя на 2 части содовой. Обязательно добавляют лед и дольку лимона. Идеальная закуска – фруктовая тарелка из грейпфрута, апельсина и лимона.
  2. С соками. Идеально Кампари миксуется с апельсиновым свежевыжатым фрешем. Отлично подходит для смешивания вишневый, ананасовый, гранатовый сок. Пропорции: 1 часть спиртного на 2 части фреша.
  3. С джином, вермутом, коньяком водкой и другим крепким спиртным биттер смешивают в пропорции 1:1.
  4. С газировкой – швепсом или спрайтом. Такой микс предпочитает молодежь.

Мнения расходятся по поводу сочетания ликера Кампари с лимонным и грейпфрутовым соком. Одни считают, что горечь в этих фруктах портит вкус напитка. Другим такое сочетание нравится.

Производство ликера Кампари

Подробный состав ликера КампариКампари производители, разумеется, стараются не разглашать. Во вкусе ощущается горечь, которую жидкость приобретает благодаря наличию в составе апельсина; аромат раскрывается нотками спелой ежевики, свежескошенной травы, дубовой коры, кислого розового винограда и липового меда. Вкус напитка раскрывается постепенно: горечь медленно сменяется приятной, еда ощутимой сладостью.

Споры о том, какие конкретно компоненты и в каком количестве входят в рецептуру Кампари ведутся не первый десяток лет. Так, разные специалисты называют разные цифры: кто-то говорит, что в состав биттера входит всего 20 ингредиентов, кто-то утверждает, что их 80. Единственное, в чем сходятся мнения специалистов – в состав ликера точно входят сахар, алкогольная составляющая, питьевая вода, кора каскаролла, померанец Чинотто, женьшень, горечавка, аир обыкновенный и ревень. Помимо этого, в составе Кампари также различают различные химические минералы.

Ликер Кампари производится посредством трехступенчатой дистилляции: на первом этапе осуществляется перегонка спирта, на втором происходит отбор вредных для здоровья фракций и на третьем – длительное настаивание спиртовой основы на травяных и фруктовых ингредиентах.

Рецепты коктейлей с Campari

Известны десятки рецептов коктейлей с Кампари: простых и сложных. Каждый найдет напиток по своему вкусу.

Гарибальди

Вкусный и простой коктейль с соком апельсина создан в 1861 году в Милане. Назван микс в честь Джузеппе Гарибальди – известного итальянца-полководца, любившего носить яркую куртку красного цвета. Второе название коктейля – Кампари Оранж.

Состав:

Апельсиновый фреш140 мл
Ликер Кампари60 мл
Лед150 г
Апельсин1 долька

Приготовление:

  1. Заполнить льдом бокал.
  2. Влить фреш и биттер.
  3. Смешать.
  4. Украсить ломтиком апельсина.

Полезное видео рецепта коктейля с Кампари Гарибальди (Кампари Оранж)

Сатана

Коктейль схож с Гарибальди. Небольшие отличия в составе и пропорциях. Пойдет тем, кому хочется более насыщенный цитрусовый вкус.

Состав:

Кампари100 мл
Апельсиновый фреш60 мл
Сок лимона10 мл

Приготовление:

  1. В стакан всыпать лед.
  2. Влить соки и ликер.
  3. Перемешать.

С тоником

Биттер Кампари с тоником – самое простое сочетание для ценителей натурального вкуса ликера.

Состав:

Кампари50 мл
Тоник150 мл
Лед150 г
Апельсин или лайм1 долька

Приготовление:

  1. Хайбол наполнить льдом.
  2. Влить биттер, затем разбавить тоником.
  3. Перемешать напитки.
  4. Сервировать ломтиком цитруса.

Русский Campari

Очень простой в приготовлении коктейль. В него входит всего 2 компонента: водка и биттер. Как итог – мягкий вкус с небольшой горчинкой.

Состав:

Биттер50 мл
Водка50 мл

Приготовление:

  1. Шейкер заполнить льдом.
  2. Влить спиртное.
  3. Взбить.
  4. Перелить в охлажденный бокал через сито.

В качестве закуски к коктейлю подают маслины или оливки.

Красные розы

Простой коктейль на основе Кампари с шампанским легко приготовить дома.

Состав:

Кампари100 мл
Сухое шампанское100 мл
Кубики льда150 мл

Приготовление:

  1. Хайбол заполнить кубиками льда.
  2. Налить ликер и шампанское.
  3. Смешать.

Для украшения коктейля подойдет цедра или ломтик лимона.

Белый

Тандем из белого сухого вина с ликером Кампари понравится женской аудитории.

Состав:

Белое сухое вино50 мл
Кампари20 мл
Лед150 г

Приготовление:

  1. Бокал для вина наполнить кубиками льда.
  2. Налить вино и биттер.
  3. Перемешать.

В качестве украшения коктейля используют ломтик апельсина.

Яблочный Джек

Ярко выраженный яблочный вкус и почти полное отсутствие горечи – отличительны черты коктейля.

Состав:

Кампари50 мл
Виски50 мл
Яблочный сок300 мл

Приготовление:

  1. В шейкер положить лед.
  2. Влить все жидкости.
  3. Взболтать и перелить сквозь стейнер в высокий узкий бокал.

Американо

Этот микс стал первым коктейлем с биттером. Создал его Гаспаре Кампари – основатель самого бренда Campari.

Состав:

Ликер30 мл
Вермут Россо30 мл
Содовая100 мл
Лед150 г

Приготовление:

  1. В олд фешен или рокс влить спиртное.
  2. Разбавить газировкой.
  3. Смешать компоненты.
  4. Бросить лед.
  5. Декорировать апельсиновым кружочком.

Подробнее о коктейлях с вермутом: 25 вкусных рецептов для приготовления в домашних условиях →

Негрони

Создателем сочетания джин, кампари и вермут стал граф Камилло Негрони. Произошло это в 1919 году. По сути это интерпретация коктейля «Американо», в котором заменили содовую на джин, для увеличения крепости напитка. Это один из самых популярных коктейлей.

Внешне Негрони не отличается от Американо. Поэтому декорируют их по-разному: первый – апельсиновой цедрой, второй – ломтиком свежего цитруса.

Состав:

Сухой джин30 мл
Биттер Кампари30 мл
Вермут Россо30 мл
Лед150 г

Приготовление:

  1. В рокс налить спиртное в любой последовательности.
  2. Перемешать.
  3. Добавить лед.
  4. Декорировать апельсиновой цедрой.

Видео рецепт приготовления коктейля с Кампари Негрони в домашних условиях

Валентино

Напиток назван в честь бармена, его придумавшего. От Негрони и Американо отличается лишь легким зерновым привкусом, который в коктейль привносит виски.

Состав:

Ржаной виски60 мл
Кампари15 мл
Мартини Россо15 мл
Лед100 мл

Приготовление:

  1. В шейкер положить лед.
  2. Влить все жидкие составляющие.
  3. Взболтать.
  4. Через стейнер перелить в бокал.
  5. Декорировать цедрой апельсина.

Волна

Бодрящий и мягкий напиток с фруктово-травяным вкусом.

Состав:

Биттер30 мл
Апельсиновый фреш100 мл
Клубничный сок с мякотью200 мл

Приготовление:

  1. В высоком бокале смешать соки и ликер.
  2. Добавить по желанию кубики льда.

Подавать с соломинкой. Бокал украсить ягодкой клубники.

Джинджер Роджерс

Коктейль получил название в честь знаменитой американской актрисы, хотя она не увлекалась алкогольными напитками. Все дело в том, что имя Джинджер в переводе обозначает «имбирь». А эта пряность является обязательным компонентом этого коктейля.

Состав:

Кампари60 мл
Сок апельсина90 мл
Клубника1 шт.
Клементин1 шт.
Имбирь молотыйЩепотка
Содовая (7UP или другая)60 мл

Приготовление:

  1. В шейкере раздавить пестиком или мадлером клементин и клубнику.
  2. Влить сок и биттер.
  3. Заполнить шейкер льдом.
  4. Взболтать и перелить через ситечко в бокал.

Количество содовой можно варьировать по личным предпочтениям.

Шприц

Коктейль с ликером Кампари Шприц обладает терпким вкусом. Приготовить напиток легко самостоятельно.

Состав:

Кампари60 мл
Игристое вино Просекко60 мл
Содовая30 мл
Оливка1 шт.

Приготовление:

  1. В большой бокал насыпать лед.
  2. Поочередно налить игристое вино, ликер и содовую.
  3. Перемешать.
  4. Украсить оливкой.

На закуску к коктейлю подают колбасную и сырную нарезку.

Подробнее о коктейлях с Просекко: 15 лучших рецептов →

Адриатика

Этот коктейль популярен на курортах Греции и Италии благодаря своим универсальным свойствам. Он отлично утоляет жажду в летний зной и согревает прохладным вечером.

Состав:

Кампари35 мл
Водка25 мл
Лимонный ликер1 ч.л.
Апельсиновый сок2 ч. л.
Лед100 г

Приготовление:

  1. В шейкере смешать сок, водку и лимонный ликер.
  2. В бокал всыпать лед.
  3. Затем налить микс из шейкера.
  4. Сверху влить биттер.
  5. Перемешать коктейльной ложечкой.

Украшают коктейль долькой цитруса на свой вкус.

Игристая страсть

В этом коктейле гармонично сочетается Кампари с шампанским и грейпфрутовым соком.

Состав:

Шампанское60 мл
Биттер60 мл
Сок грейпфрута30 мл
Апельсин1 долька
Малина1 ягода
Мята1 листик

Приготовление:

  1. В заранее охлажденный бокал влить биттер с грейпфрутовым соком.
  2. Добавить шампанское.
  3. Смешать.
  4. На зубочистку насадить ломтик апельсина, малину и листик мяты. Сервировать коктейль.

При смешивании биттера и сока с шампанским, напиток начинает активно пениться.

Профи

Дамский вариант коктейля с приятными нотками цитруса.

Состав:

Кампари30 мл
Мартини Бьянко30 мл
Шампанское100 мл
Апельсиновый фреш40 мл
Лед6 кубиков

Приготовление:

  1. Шампанское, фреш, кампари и мартини влить в шейкер.
  2. Смешать и перелить в бокал со льдом.
  3. Сервировать кусочком апельсина.

Кампари Маргарита

Одна из разновидностей коктейля Маргарита. Попробовать напиток можно не только в баре. Ведь способ приготовления очень прост.

Состав:

Кампари30 мл
Текила45 мл
Куантро15 мл
Лаймовый фреш30 мл

Приготовление:

  1. Заполнить льдом шейкер.
  2. Взболтать компоненты.
  3. Перелить в бокал для Маргариты смесь, используя ситечко.

Би ту Би (B2B)

В этом коктейле объединились сразу два биттера – итальянский и чешский. Микс имеет выраженный травяной привкус.

Состав:

Кампари20 мл
Бехеровка40 мл
Виноградный сок50 мл
Газированная вода100 мл
Лед100 г
Лайм1 долька

Приготовление:

  1. Бокал заполнить кубикам льда.
  2. Влить биттеры.
  3. Влить сок винограда.
  4. Смешать.
  5. В конце влить газировку.
  6. Сервировать ломтиком лайма.

Итальянский Мохито

От классического рецепта в этом Мохито осталось несколько ингредиентов: ром, мята и сахар. Напиток получается необычным, но вкусным. Особой популярностью сочетание Кампари и Просекко пользуется у женской аудитории.

Состав:

Белый ром Bacardi45 мл
Шампанское Просекко30 мл
Ликер Кампари15 мл
Лимонный сок20 мл
Сахарный сироп20 мл
Мята3 веточки
Лед250-300 г

Приготовление:

  1. Мяту положить в шейкер и подавить пестиком (или мадлером), чтоб дала сок.
  2. Добавить лед, сироп, сок, рок и ликер.
  3. Хорошенько взболтать.
  4. Перелить в массу в бокал.
  5. Налить Просекко.
  6. Декорировать веточкой мяты.

Больше рецептов коктейлей с белым ромом Бакарди (Bacardi) →

Цитрусовый торнадо

Коктейль отличается выраженным цитрусовым сладко-горьким вкусом.

Состав:

Ликер Старый Таллин40 мл
Биттер Кампари40 мл
Мартини Россо40 мл
Сок лимона20 мл

Приготовление:

  1. Шейкер заполнить льдом.
  2. Влить туда спиртное и сок.
  3. Смешать и перелить в охлажденный стакан..
  4. Украсить апельсиновой цедрой.

Закон открытий

Цитрусовый, пряный и травяной – все вкусы в этом коктейле находятся в гармонии.

Состав:

Имбирный ликер60 мл
Кампари15 мл
Лимонный сок30 мл
ТоникПо вкусу
Мята1 веточка

Приготовление:

  1. Заполнить льдом шейкер.
  2. Добавить все компоненты, исключая тоник.
  3. Хорошенько взболтать.
  4. Перелить через ситечко в бокал.
  5. Долить тоник.
  6. Декорировать коктейльной трубочкой.

Баттер-скотч

Коктейль с пикантным имбирным вкусом и оттенками ванили.

Состав:

Кампари20 мл
Скотч50 мл
Херес5 мл
Ванильный сироп5 мл
Корень имбиря5 г
Апельсиновая цедра1 кусочек
Лед200 г

Приготовление:

  1. Очищенный корень имбиря положить в шейкер и хорошенько его растолочь.
  2. Влить жидкие составляющие.
  3. Всыпать кубики льда, потрясти.
  4. Перелить через сито коктейль в охлажденную мартинку.
  5. Декорировать цедрой апельсина.

Никарагуа Негрони Пунш

Рецепт этого коктейля с Кампари легко воплотить в домашних условиях. Для приготовления понадобится емкость для пунша и силиконовая форма для создания ледяной глыбы. Коктейль с необычной подачей приятно удивит гостей.

Состав:

Кампари450 мл
Ром300 мл
Мартини Россо220 мл
Грейпфрутовый фреш300 мл
Жидкий мед75 мл
Лимон12 шт.
Бутоны гвоздики30 шт.

Приготовление:

  1. Выжать сок из 10 лимонов.
  2. Добавить к фрешу гвоздику.
  3. Смешать и перелить в форму.
  4. Убрать в морозилку до полной заморозки глыбы.
  5. В емкость для приготовления пунша влить ром, кампари, мартини, сок грейпфрута.
  6. Добавить мед и перемешать.
  7. Положить ледяную глыбу.
  8. Декорировать коктейль ломтиками лимона.

Горькая Сангрия

Вариация классического коктейля. Отличается неожиданно возникающей горечью Кампари.

Состав:

Красное вино400 мл
Клюквенный сироп100 мл
Кампари150 мл
Бурбон150 мл
Апельсин1 шт.
Минеральная газированная вода
Свежая клюква

Приготовление:

  1. В емкость объемом 1 л налить вино, сироп, бурбон и кампари. Смешать.
  2. Апельсин порезать кружочками. Половину из них положить в емкость с алкоголем.
  3. Убрать в холодильник микс на 1,5-2 часа.
  4. При подаче коктейль разливают в бокалы наполовину и разводят его 90 мл газировки.
  5. Декорируют кружочком апельсина и ягодкой клюквы.

Горькая пилюля

Многослойный коктейль с горьким первоначальным вкусом и приятным послевкусием.

Состав:

Водка15 мл
Кампари15 мл
Сироп из маракуйи20 мл

Приготовление:

  1. В стопку налить сироп.
  2. Далее аккуратно по тыльной стороне ложечки влить Кампари.
  3. Последний слой коктейля – водка.

Коктейль принято пить одним глотком.

Перечисленные рецепты коктейлей с Кампари – это известные миксы на основе биттера, которые можно приготовить самостоятельно у себя на кухне.

Автор: Евгения Гончарова, специально для Tonnasamogona.ru

История Кампари

Ликер Кампари начинает свою историю в 1828 году на кухне небольшой кондитерской, где юный итальянец Гаспар Кампари проводил эксперименты с различными ингредиентами: в одну из своих попыток приготовить что-то новое он смешал около 60 компонентов и получил первый биттер. Спустя почти полтора века Кампари стал визитной карточкой производящего его бренда. Немного подзаработав, Гаспар в возрасте 32 лет (первый ликер он приготовил, когда ему было 14) в 1860 году основывает компанию Gruppo Campari. Спустя несколько лет Гаспар решает немного поностальгировать и открывает прямо в центре Милана свое кафе, ставшее любимым местом высших слоев общества. С 1860 по 1865 биттер не выходит за пределы семейного ресторанчика.

В 1882 году Гаспар умирает, оставляя и алкогольный завод, и кафе своим потомкам. Младший сын, буквально выросший в стенах фабрики, в 1904 году расширяет производство, добавляя и другую продукцию. В 1926 году он снова подвергает завод неким модификациям: повзрослев, он решает перестать распыляться на огромный ассортимент напитков и теперь выдвигает вперед только два продукта – Кампари и Кордиал Кампари. Его мысли захватывают идеи о выдвижении ликера на мировой рынок. Кампари – это классический аперитив, главный герой статьи; Кордиал Кампари – крепкий ликер на основе спелой малины, который сняли с производства в 2003 году из-за сравнительно низкого спроса и достаточной высокой цены на продукт. В наши дни Кордиал Кампари – редкость, так что если вам удастся обнаружить его на витринах магазинов, покупайте не раздумывая.

В 1932 году на основе биттера производят первый в истории микс-дринк – Кампари-Соду. Дизайн для бутылок, в которых реализовывали новый продукт, разработал один из самых известных на тот момент художников – Фортунадо Деперо. Тара для микс-дринка представляла собой ребристые бутылки конусообразной формы, которые не перетерпели никаких изменений по сей день.

После выхода на рынок Кампари-Соды, биттер получает небывалую популярность – в 60-е годы он продается уже в 80 государствах. К концу 20 столетия напиток расширяет свой охват на более чем 190 стран. В этот же период у ликера появляются первые серьезные конкуренты: компании приходится прибегнуть к покупке более мелких брендов. Так, в 1995 году состоялась первая сделка, вследствие которой к торговой марке присоединился голландский бренд BolsWessanen. В 1996 году Gruppo Campari начинает реализацию шотландского виски и немецкого Егермейстера. Спустя 2 года итальянцы заключают договор с холдингом Skyy Spirits.

В 1999 году конкурировать с Gruppo Campari становится практически невозможно. За последующие 10 лет бренд выходит на лидирующие позиции в алкогольном секторе, забрав под свое крыло десяток других компаний. В 2008 году марка добралась и до украинского рынка, купив Одесский завод шампанских вин.

Никарагуа Негрони Пунш (Nicaraguan Negroni Punch)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 450 мл
  2. 7-й летний Ром – 300 мл
  3. Красный вермут – 220 мл
  4. Грейпфрутовый сок – 300 мл
  5. Мед – 75 мл
  6. Свежий лимон – 12 шт.
  7. Сухая гвоздика – 30 шт.

Как приготовить

  1. Выдавите лимонный фреш из 10 лимонов в пластиковую посуду и добавьте сухую гвоздику. Перемешайте и поставьте в морозильную камеру. Дождитесь полной заморозки. Желательно использовать такую посуду, которая сформирует ледяную. Совет: используя различные формы, например силиконовые, вы можете добиться абсолютного разного дизайна ледяной глыбы.
  2. В посуду для пунша налейте все ингредиенты и тщательно перемешайте, затем достаньте заготовленную ранее ледяную глыбу и положите в пунш.
  3. Украсить кусочками свежего лимона.

Валентино (The Valentino)

Рецепт коктейля

  1. Водка или Ржаной Виски – 60 мл
  2. Кампари – 15 мл
  3. Сладкий вермут – 15 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в стакан для смешивания наполненный льдом.
  2. Перемешайте и перелейте через стрейнер в охлажденный коктейльный бокал.
  3. Украсить спиралью из цедры апельсина.

Диеци Е Лоде (Dieci E Lode)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 15 мл
  2. Джин – 75 мл
  3. Грейпфрутовый сок – 45 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в шейкер наполненный на треть льдом.
  2. Взболтать и процедить через стрейнер в охлажденный льдом коктейльный бокал.
  3. Украсить ломтиком лайма.

Район Негрони (Neighborhood Negroni)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 30 мл
  2. Джин – 30 мл
  3. Красный вермут – 30 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в стакан для смешивания наполненный льдом.
  2. Тщательно перемешайте с помощью барной ложки.
  3. Перелейте через стрейнер в охлажденный коктейльный бокал.
  4. Украсить цедрой апельсина.

Малена (Malena)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 30 мл
  2. Ржаной Виски – 30 мл
  3. Крепленое вино – 20 мл
  4. Апельсиновая вода – 5 капель
  5. Апельсиновый биттер – 3 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в стакан для смешивания наполненный льдом.
  2. Тщательно перемешайте с помощью барной ложки.
  3. Перелейте через стрейнер в охлажденный коктейльный бокал или бокал рокс.
  4. Украсить цедрой апельсина и измельченной корицей.

Как выбрать оригинальный ликер Кампари?

Сегодня, когда рынок кишит подделками, принадлежащими к разным ценовым категориям и включающими в свой состав разные компоненты, выбрать оригинальный продукт становится все сложнее. Чтобы не наткнуться на фальсификат, следует знать на какие пункты нужно обратить внимание.

Место приобретения. Специалисты рекомендуют приобретать Кампари исключительно в специализированных магазинах, где работники при необходимости могут предоставить вам все необходимые сертификаты. Если продавец отказывается предъявить вам документы, подтверждающие происхождение ликера, смело разворачивайтесь и отправляйтесь в другой магазин.

Бенисио Дель Торо рекламирует Кампари

Акцизная марка. Абсолютно все импортные алкогольные напитки обязаны подвергаться маркировке. Если знак защиты на бутылке отсутствует, лучше верните ее обратно на полку.

Тара. Емкость, в которой реализуется биттер не менялась уже долгие годы: это бутылка из прозрачного бесцветного стекла с яркой этикеткой и металлической крышкой. В нижней части емкости обязательно должны присутствовать два небольших изгиба для удобства разлива.

Качество оформления. Бренд тщательно следит за оформлением своей продукции, исключая возможность попадания на полки магазинов бракованных бутылок или напитков, не соответствующих их стандарту качества.

Чистота и консистенция жидкости. Оригинальный ликер должен обладать насыщенным цветом, быть прозрачным, в нем не должно быть признаков осадка. Жидкость должна быть немного вязкой, перетекать медленно и плавно, когда вы переворачиваете бутылку.

Рекламная кампания

Рекламщики активно привлекают к участию в продвижении бренда известных медийных личностей. Так, в разные годы в рекламных роликах снимались:

  • Бенисио Дель Торо;
  • Мила Йовович;
  • Пенелопа Круз;
  • Ольга Куриленко;
  • Ева Мендес;
  • Сальма Хайек;
  • Джессика Альба.

Gruppo Campari была одной из первых компаний, уделявших такое внимание продвижению своей продукции. Имидж алкогольных напитков строится на двух «С» – страсти и сексуальности.

Сальма Хайек в рекламе Кампари

Мохито Итальяно (Mojito Italiano)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 15 мл
  2. Ром – 45 мл
  3. Сахарный сироп – 20 мл
  4. Лимонный фреш – 20 мл
  5. Проссеко – 30 мл
  6. Мята – 3 веточки

Как приготовить

  1. С помощью мадлера раздавите мяту в шейкере таким образом, чтобы мята начала испускать эфирные масла.
  2. Налейте в шейкер все ингредиенты, кроме Проссеко, а затем добавьте лед.
  3. Хорошенько взболтайте и перелейте через стрейнер в хайбол наполненный кубиками льда.
  4. Долейте в хаболл Проссеко.
  5. Украсить веточкой мяты.

Джинджер Роджерс (Ginger Rogers)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 60 мл
  2. Апельсиновый сок – 90 мл
  3. Клубника — 1 шт.
  4. Клементин – 1 шт.
  5. Молотый имбирь — щепотка
  6. 7UP или другая содовая

Как приготовить

  1. В шейкере с помощью мадлера раздавите клубнику и клементин.
  2. Налейте в шейкер Кампари и сок. Добавьте лед в шейкер на треть.
  3. Тщательно взболтайте и перелейте через стрейнер в стакан хайбол наполненный кубиками льда.
  4. По желанию долейте содовой.
  5. Украсить кусочками клубники и клементина. Сверху посыпать молотым имбирем.

Закон открытий (Opening Act)

Рецепт коктейля

  1. Имбирный ликер (Domaine de Canton) – 60 мл
  2. Кампари – 15 мл
  3. Лимонный фреш – 30 мл
  4. Тоник
  5. Мята

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты, кроме тоника, в шейкер на треть наполненный льдом.
  2. Тщательно взболтайте и перелейте через стрейнер в охлажденный бокал коллинз.
  3. Долейте коктейль тоником.
  4. Украсить веткой мяты.

Голландский Негрони (Dutch Negroni)

Рецепт коктейля

  1. Кампари – 30 мл
  2. Джин – 45 мл
  3. Сладкий вермут – 30 мл

Как приготовить

  1. Добавить все ингредиенты в стакан для смешивания наполненный льдом.
  2. Тщательно перемешайте с помощью барной ложки.
  3. Перелейте через стрейнер в бокал рокс наполненный кубиками льда.
  4. Украсить массивной долькой апельсина.

Рецепт коктейль кампари оранж

Главная » Разное » Рецепт коктейль кампари оранж

Оранж, Шприц и другие, рецепты миксов на основе ликера с добавлением шампанского, тоника, апельсинового сока, водки, джина в домашних условиях

Итальянский ликер Кампари (Campari) используется для приготовления самых разных напитков. Этот биттер темно-красного цвета с крепостью 25% запоминается необычным цитрусовым ароматом и насыщенным горьковатым вкусом; придаёт яркий цвет коктейлям.

Из статьи можно узнать, с чем его лучше всего сочетать, а также изучить рецепты наиболее популярных коктейлей на основе Кампари.

Как правильно пить и чем разбавлять?

Этот ликер употребляют в охлажденном виде – 10-15 градусов. Бутылку с аперитивом можно предварительно поставить в холодильник, или добавить пару кусочков льда непосредственно в стакан. Ликер обязательно должен быть охлажден, так как при комнатной температуре он приобретает неприятный травяной привкус и теряет насыщенность.

Кампари употребляют в чистом виде как аперитив перед едой. В таком случае его пьют из стопок, а в качестве закуски подают фрукты или что-то сладкое. Аперитив рекомендуется пить маленькими глотками. Считается, что этот биттер улучшает аппетит и способствует пищеварению.

Традиционно Кампари разбавляют содовой, в пропорции один к двум, в стакан с ликером добавляют немного льда и кружочек апельсина. Лед уравновешивает горькость биттера и подчеркивает его цитрусовый вкус. Часто такой напиток подают с фруктовой тарелкой – апельсин, грейпфрут, лимон, лайм.

Кампари смешивают не только с газировкой, но и разными соками. Лучше всего его вкус раскрывается в сочетании с апельсиновым фрешем. Также биттер часто разбавляют соком – грейпфрутовым, лимонным или вишневым: смешиваются в пропорции 1:2, при этом фруктовый сок разбавляет горечь ликера и снижает крепость готового напитка. Предпочтительно использовать свежевыжатый цитрусовый фреш.

Летом его разбавляют каким-нибудь соком и подают со льдом для утоления жажды.

Иногда смешивают с крепкими алкоголем – водкой, вермутом или джином.

Рецепты миксов на основе ликера в домашних условиях

Бармены придумали десятки коктейлей с ликером Кампари. Их делают на основе разного алкоголя и дополнительных ингредиентов – так что каждый сможет выбрать свой вариант с алкоголем по вкусу.

«Американо»

Это первый напиток, который начали делать на основе Кампари – его придумал основатель бренда, Гаспаре Кампари.

Состав:

  • 30 мл Campari.
  • 30 мл сладкого вермута.
  • 90 мл содовой.

Для приготовления смешивают ликер и вермут, к ним добавляют содовую. Готовый напиток подается в бокале со льдом и долькой апельсина.

Предлагаем посмотреть видео о том, как приготовить коктейль «Американо»:

«Негрони»

На сегодняшний день считается одним из самых известных коктейлей в мире.

Состав: по 30 мл джина Campari и красного вермута.

Бокал наполняют льдом, и по очереди наливают в него джин, вермут и биттер.

«Негрони» и «Американо» внешне очень похожи, поэтому, чтобы избежать путаницы, «Негрони» часто украшают цедрой апельсина.

Предлагаем посмотреть видео о том, как приготовить коктейль «Негрони»:

«Бульвардье» (Boulevardier)

Можно сказать, что это «Негрони», в котором джин заменили на бурбон или ржаной виски.

Состав: по 30 мл ржаного виски Campari и сладкого вермута.

  1. В шейкер насыпать колотый лед, потом добавить все составляющие, взболтать и перелить в бокал.
  2. Сверху положить коктейльную вишню или спираль апельсиновой цедры.

Предлагаем посмотреть видео о том, как приготовить коктейль «Бульвардье»:

«Гарибальди» (или «Оранж»)

Название дано в честь итальянского полководца Джузеппе Гарибальди. Благодаря мягкому сладкому вкусу и невысокой крепости считается женским коктейлем. Его также называют «Кампари Оранж».

Состав:

  • 60 мл Campari.
  • 140 м апельсинового фреша.

Классический вариант напитка – насыпать в бокал лед, добавить ликер и апельсиновый сок.

Можно сделать:

  • лимоннный «Гарибальди» – тогда вместо апельсинового сока добавляют лимонный, остальные составляющие и процесс приготовления совпадают;
  • цитрусовый «Гарибальди» – только в этом варианте используется микс разных цитрусовых фрешей.

Предлагаем посмотреть видео о том, как приготовить коктейль «Гарибальди»:

«Сатана»

Если «Гарибальди» с апельсиновым соком кажется слишком мягким напитком, можно попробовать «Сатану». Способ приготовления такой же, ингредиенты похожи, разница лишь в пропорциях.

Состав:

  • 100 мл Campari.
  • 60 мл апельсинового фреша.
  • 10 мл лимонного сока.

Смешиваем ликер, апельсиновый и лимонный соки, насыпаем в стакан лед и переливаем напиток.

«Шприц»

По сравнению с оригинальным коктейлем «Апероль Шприц» на вкус более терпкий – его также называют «Черный Шприц».

Состав:

  • 60 мл игристого вина Просекко.
  • 60 мл Campari.
  • 30 мл содовой.

Готовится в большом бокале:

  1. Сначала насыпают лед, далее по очереди вливают Просекко, биттер и содовую.
  2. Аккуратно размешивают и сверху кладут оливку.

«Кампари Шприц» хорошо сочетается с сырами и колбасными изделиями.

«Игристая страсть»

Состав:

  • 60 мл Campari.
  • 60 мл шампанского.
  • 30 мл грейпфрутового фреша.

Коктейль на шампанском и грейпфрутовом соке, которые эффектно дополняют вкусы друг друга.

  1. В охлажденный хайбол налить ликер и грейпфрутовый фреш, долить шампанское и осторожно размешать, так как при этом образуется много пены. Иногда сюда добавляют пюре маракуйи.
  2. Готовый напиток украшают шпажкой, на которую нанизаны долька апельсина, веточка мяты и ягодка малины.
«Русский» с водкой

Состав: по 50 мл водки и Campari.

Простой и бюджетный коктейль «Русский Кампари» с мягким вкусом и тонкими нотками горечи.

Смешать все компоненты в шейкере и процедить. Подавать с оливками или маслинами.

Другое название коктейля – «Красный лак для ногтей».

С тоником

Состав:

  • 50 мл Campari.
  • 150 мл тоника.
  1. В хайбол насыпать лед, налить ликер, добавить «Швепперс» или другой тоник по желанию.
  2. Аккуратно размешать и украсить долькой апельсина или лайма.

Коктейль понравится любителям простых вкусов – тоник разбавляет горечь и насыщенный вкус биттера.

«Белый»

Взять для приготовления:

  • 20 мл Campari.
  • 50 мл белого сухого вина.

В бокал со льдом влить вино и ликер, при подаче украсить долькой апельсина.

«B2B» (БиТуБи)

Взять для приготовления:

  • 40 мл бехеровки.
  • 20 мл Campari.
  • 50 мл виноградного сока.
  • 100 мл содовой.

Коктейль понравится любителям биттеров, так как обладает отчетливым и ярким травяным ароматом двух аперитивов.

  1. Смешиваем все ингредиенты, кроме газировки, переливаем в бокал со льдом.
  2. Доливаем содовой и украшаем лаймом.
«Красные розы» с шампанским

Взять по 100 мл: игристого шампанского и Campari.

Подается в высоком узком бокале – по очереди наливаем в него шампанское и ликер, сверху – долька апельсина или апельсиновая цедра. Иногда напиток украшают бутоном розы.

«Адриатика»

Взять:

  • 30 мл Campari.
  • 20 мл водки.
  • 1 чайная ложка апельсинового ликера.
  • 1 чайная ложка лимонного сока.
  1. Готовится в шейкере: взбалтываем водку, апельсиновый ликер и лимонный фреш, переливаем в стакан со льдом.
  2. Добавляем биттер и аккуратно размешиваем.
  3. В качестве украшения используем карликовые апельсины – накалываем пару фруктов на шпажку.
«Торнадо»

Взять:

  • 20 мл ликера Vana Tallin («Старый Таллин»).
  • 20 мл сладкого вермута.
  • 20 мл Campari.
  • 10 мл содовой.

Все тщательно смешать и перелить в хайбол, предварительно насыпав в него лед. Украсить лимонной цедрой.

«Валентино»

Взять:

  • 60 мл ржаного виски.
  • 15 мл Campari.
  • 15 мл сладкого красного вермута.

Все компоненты взболтать в шейкере, перелить в стакан олд-фэшен и украсить цедрой цитрусовых.

«Профи»

Взять:

  • 30 мл Campari.
  • 30 мл вермута.
  • 100 мл шампанского.
  • 40 мл апельсинового фреша.

Все составляющие необходимо смешать в шейкере и аккуратно процедить в бокал со льдом. Готовый «Профи» украсить долькой апельсина.

«Мохито по-итальянски»

На традиционный мохито этот коктейль похож наличием рома и мяты.

Взять:

  • 15 мл Campari.
  • 45 мл рома.
  • 30 мл Просекко.
  • 20 мл сахарного сиропа.
  • 20 мл лимонного сока.
  • 3 веточки мяты.
  1. Мадлером раздавить мяту, чтобы она начала пускать сок.
  2. В шейкере взболтать все компоненты, кроме шампанского, получившуюся смесь процедить в бокал.
  3. Сверху долить Просекко и украсить веточкой мяты.
«Леди Диана»

Взять:

  • 30 мл джина.
  • 30 мл Campari.
  • 20 мл сока лайма.
  • 5 мл сахарного сиропа.
  1. Добавить все ингредиенты в шейкер и тщательно взболтать.
  2. Процедить в холодный бокал, сверху украсить спиралью из цедры лайма.
«Горькая Сангрия»

Это вариация на тему классической сангрии на красном вине, но с неожиданной горчинкой биттера.

Взять:

  • 400 мл красного вина.
  • 100 мл апельсинового фреша.
  • 150 мл бурбона или бренди.
  • 150 мл Campari.
  • 1 апельсин.
  • Минеральная газированная вода.
  1. В большой кувшин наливаем вино, апельсиновый сок, бурбон и ликер.
  2. Тщательно перемешиваем, добавляем апельсин, порезанный на кусочки, и ставим в холодильник, чтобы смесь охладилась.
  3. При подаче наливаем половину бокала сангрии, доливаем минералкой и подаем с долькой апельсина.

Предлагаем посмотреть видео о том, как приготовить коктейль «Горькая Сангрия»:

«Маргарита»

Взять:

  • 30 мл Campari.
  • 45 мл текилы.
  • 15 мл куантро.
  • 30 мл лаймового сока.
  1. Шейкер на треть заполнить льдом, добавить все компоненты и аккуратно взболтать.
  2. Процедить через стрейнер в бокал со льдом.
  3. Украсить ломтиком лайма.

Предлагаем посмотреть видео о том, как приготовить коктейль «Маргарита»:

«Кампаринья»

За основу взята бразильская «Кайпиринья», в которой вместо Кашасы добавляется итальянский биттер.

Взять:

  • 50 мл Campari.
  • 10 мл сахарного сиропа.
  • Половинка лайма.
  1. Лайм порезать в бокал и раздавить мадлером, добавить сироп и биттер.
  2. Насыпать лед до краев стакана и аккуратно размешать.
  3. Украсить кружочком лайма.
«Диеци Е Лоде»

Взять:

  • 15 мл Campari.
  • 75 мл джина.
  • 45 мл грейпфрутового фреша.
  1. Готовится в шейкере – наполняем его льдом на треть.
  2. Добавляем все остальное, тщательно взбалтываем.
  3. Процеживаем в хайбол со льдом.
  4. Подаем с долькой лайма сверху.
«500 (Cinquecento)»

Взять:

  • 45 мл водки.
  • 15 мл Campari.
  • 15 мл ликера «Бенедиктин» (Benedictine).
  • 25 мл грейпфрутового фреша.
  • 2 капли «Ангостура Биттер» (Angostura Bitters).
  1. В шейкер засыпаем лед и тщательно смешиваем все ингредиенты.
  2. Процеживаем готовый напиток через стрейнер, бокал при подаче украшаем спиралью из цедры грейпфрута.

Это не все напитки, которые смешивают на основе Кампари – здесь перечислены способы приготовления только самых популярных напитков, ведь их придумано несчетное количество. Практически в каждом баре можно найти локальный рецепт коктейля с оригинальным вкусом.

Campari – известный итальянский аперитив. Его разбавляют цитрусовыми фрешами и готовят на его основе коктейли. Напитки с Кампари часто подаются в начале ужина. Отличительной чертой коктейлей на его основе является терпкий вкус и яркий аромат цитрусовых. Количество рецептов с Кампари не поддается исчислению, так что каждый сможет найти вариант на свой вкус – с использованием любого крепкого алкоголя.

Как сделать коктейли с кампари в домашних условиях

«Кампари» – это ликер с горьким вкусом, который имеет насыщенный красный оттенок. Его готовят на основе фруктов и различных ароматных трав еще с XIX века, а придумал его Гаспар Кампари. Этот напиток в чистом виде не употребляют, но он входит в состав многих коктейлей. Мы сделали для вас небольшую подборку с лучшими на наш взгляд рецептами.

Рецепт коктейля «Подлесок»

Конечно, не имея специальной декоративной посуды, сложно в точности повторить оформление этого коктейля, но получить его необыкновенно пикантный вкус каждому будет по силам. В остальном можете положиться на вашу фантазию или пренебречь декором.

Что подготовить
КомпонентыКоличество
бурбон30 мл
—саке—10 мл
«Campari»30 мл
—ликер с ореховым вкусом—5 мл
сок из апельсинов30 мл
масло трюфельное3 мл
цедра апельсина1 шт.
побеги горошка3 шт.
черный шоколад5 г
кубики замороженной воды380 г
Как сделать
  1. Наполните высокий бокал льдом.
  2. В шейкере соедините 5 мл ликера и 10 мл саке.
  3. Добавьте 3 мл трюфельного масла, 30 мл «Кампари» и 30 мл бурбона.
  4. Всыпьте весь лед, который остался, и тщательно взболтайте.
  5. В подготовленный бокал налейте смесь, используя фильтр.
  6. Соедините в сифоне 30 мл фреша апельсина и 5 г шоколада и взболтайте.
  7. С помощью сифона сделайте в бокале пену.
  8. Для декора используйте цедру и побеги горошка (3 шт.).

Рецепт напитка «866»

В этом напитке используется национальный скандинавский алкоголь, который имеет 37,5-50 градусов. В принципе, это не что иное как обычная водка с пряным вкусом, поэтому вы смело можете подобрать аналог аквавита на свое усмотрение.

Что подготовить
КомпонентыКоличество
—аквавит—30 мл
«Campari»30 мл
сок грейпфрутовый30 мл
соль5 г
кубики замороженной воды120 г
крошка из льда400 г
Как сделать
  1. Из 5 г соли сделайте на низком стакане кромку.
  2. Всыпьте в него до самого верха лед (120 г).
  3. В шейкере смешайте 30 мл сока, 30 мл «Кампари» и 30 мл аквавита.
  4. Добавьте теперь 400 г крошки льда и перемешайте.
  5. Перелейте через фильтр в стакан.

Рецепт «Баттер-скотча»

Основой для этого напитка является крепленое испанское вино и скотч, а остальные ингредиенты лишь оттеняют этот необычный микс. Пикантность вкусу придает имбирь в сочетании с нежными ванильными аккордами.

Что подготовить
КомпонентыКоличество
скотч50 мл
херес5 мл
«Campari»20 мл
сироп из ванили5 мл
имбирный корень5 г
цедра апельсина1 шт.
кубики замороженной воды200 г
Как сделать
  1. Выложите на дно шейкера очищенный корень имбиря (примерно 5 г) и выдавите из него сок.
  2. Налейте 5 мл сиропа, 5 мл хереса, 20 мл «Кампари» и 50 мл бурбона.
  3. Туда же всыпьте 200 г льда и потрясите.
  4. Через фильтр перелейте состав в заранее охлажденный бокал для мартини.
  5. Цедру используйте для декора.

Рецепт микса «Выбор бармена»

Если вы любите —текилу—, то этот коктейль обязательно вам понравится, ведь его готовят на основе серебристого сорта текилы. Вкусовые оттенки этого напитка создают цитрусовые аккорды лаймового и грейпфрутового фрешей.

Что подготовить
КомпонентыКоличество
—серебристая текила—30 мл
винный аперитив20 мл
«Campari»10 мл
сироп из сахара20 мл
фреш лайма20 мл
фреш грейпфрута15 мл
куб из льда1 шт.
кубики замороженной воды200 г
Как сделать
  1. В широкий бокал для шампанского выложите куб из льда.
  2. Отдельно в шейкере смешайте 20 мл сиропа, 20 мл фреша лайма и 15 мл фреша грейпфрута.
  3. Теперь добавьте 30 мл текилы, 20 мл винного аперитива и 10 мл «Кампари».
  4. Насыпьте туда же 200 г льда и потрясите.
  5. Через фильтр влейте содержимое шейкера в бокал.
  6. Украсьте цедрой.

Рецепт микса «Глиняная сойка»

Этот удивительно красивый и романтичный на вид коктейль состоит всего лишь из трех алкогольных компонентов, поэтому сделать его очень просто. Конечно, в домашних условиях подобным декором можно и пренебречь, ведь на вкус коктейля с «Кампари» он точно не влияет.

Что подготовить
КомпонентыКоличество
джин45 мл
«Campari»20 мл
«Martini Rosso»20 мл
орхидея1 шт.
ледяной куб1 шт.
Как сделать
  1. Выложите на дно коньячницы ледяной куб.
  2. Налейте сверху 20 мл «Кампари» и 20 мл вермута.
  3. Теперь добавьте 45 мл джина и перемешайте.
  4. Сверху выложите орхидею.

Рецепт «Аделантадо»

Настойку из базилика и клубники, которую в Англии называют шрабом, можно приготовить самостоятельно, воспользовавшись рецептом в сети интернет. Что касается виноградной водки, то можно взять напиток любого производителя.

Что подготовить
КомпонентыКоличество
—виноградная водка—30 мл
херес20 мл
«Campari»20 мл
зеленый сорт базилика1 г
безалкогольная клубнично-базиликовая настойка10 мл
цедра апельсина1 шт.
кубики замороженной воды120 г
Как сделать
  1. Кубики льда (120 г) насыпьте в шейкер.
  2. Налейте сверху 10 мл настойки и 20 мл хереса.
  3. Теперь добавьте 20 мл «Кампари» и 30 мл водки.
  4. Перемешайте ложкой.
  5. Для декора возьмите цедру листья базилика.

Рецепт «Бульвардье #3»

Это одна из вариаций знаменитого коктейля, в которой за основу взят солодовый сорт виски и красный вермут. «Campari» лишь добавляет пикантный нюанс этому напитку.

Что подготовить
КомпонентыКоличество
солодовый виски45 мл
красный вермут30 мл
«Campari»30 мл
апельсиновая цедра1 шт.
кубики замороженной воды120 г
Как сделать
  1. В низкий бокал всыпьте 120 г льда.
  2. Налейте туда 30 мл «Кампари», 30 мл вермута и 45 мл виски.
  3. Перемешайте.
  4. Сверху положите кусочек цедру.

Рецепт коктейля «Любовь к Милану»

Этот микс имеет приятный освежающий мятно-цитрусовый вкус. Сам напиток слабоалкогольный, поэтому идеален в летнюю жару во второй половине дня. Кстати, скотч рекомендуем выбирать именно тот, который производят в —Хайленде—.

Что подготовить
КомпонентыКоличество
—скотч—30 мл
ароматический биттер3 мл
«Campari»30 мл
сироп из сахара15 мл
фреш лайма15 мл
сок грейпфрута45 мл
листочки мяты1 г
цедра лимона1 шт.
ледяная крошка150 г
Как сделать
  1. В «рокс» всыпьте 150 г дробленого льда.
  2. Налейте туда 15 мл лаймового фреша, 45 мл сока грейпфрута, 15 мл сиропа, 30 мл «Кампари» и 30 мл скотча.
  3. Теперь добавьте 3 мл биттера и перемешайте.
  4. Для декора возьмите цедру и веточку мяты.

Рецепт шота «Горькая пилюля»

Название этого шота говорит само за себя, но сладость сиропа из маракуйи смягчает горечь водки и биттера. В целом микс имеет приятное послевкусие, а приготовить его можно очень быстро и просто.

Что подготовить
КомпонентыКоличество
—водка—15 мл
сироп из маракуйи20 мл
«Campari»15 мл
Как сделать
  1. В стопку для шотов налейте сначала 20 мл сиропа.
  2. Затем с помощью ложки выложите поочередно 15 мл биттера и 15 мл водки.

Рецепт приготовления «Топ скуп»

В качестве основы в этом миксе служит водка, а вкусовые нюансы создают дынный ликер, ананас и лайм. Такое экзотическое сочетание понравится тем, кто любит пикантные вкусы.

Что подготовить
КомпонентыКоличество
водка30 мл
ликер из дыни10 мл
«Campari»5 мл
биттер грейпфрутовый2 мл
сок ананаса30 мл
фреш лайма10 мл
физалис5 г
кубики замороженной воды200 г
Как сделать
  1. В шейкере соедините 10 мл фреша лайма, 30 мл сока ананаса, 5 мл «Campari», 10 мл ликера и 30 мл водки.
  2. Теперь добавьте 2 мл грейпфрутового биттера и 200 г кубиков замороженной воды.
  3. Встряхните хорошенько шейкер и через ситечко перелейте в стакан полученную смесь.
  4. Украсьте физалисом.

Видео приготовления коктейлей с «Campari»

  • В этом видео вы узнаете состав коктейля «Кампари Оранж» и рецепт его приготовления.
  • Видео с демонстрацией приготовления простого итальянского аперитива «Кампари сода».

Другие похожие напитки

Этот популярный красный биттер входит в состав многих напитков, среди которых коктейли:

Самым популярным и известным во всем мире является —коктейль Негрони—, который помимо классического рецепта имеет еще три вариации:

  • «Президент Негрони»;
  • «Мсье Негрони»;
  • «Негрони и цветок».

Ждем ваших отзывов о полюбившихся коктейлях с красным биттером «Campari».

Коктейли с «Кампари»: лучшие рецепты и рекомендации

«Кампари» — это ликер багрово-красного цвета, приготовленный на основе фруктов и различных ароматических трав. Из-за пряно-горького вкуса его скорее можно отнести к «биттерам», которые, как правило, обладают очень сильным ароматом. Вероятно, поэтому их часто используют для приготовления всевозможных коктейлей. Специалисты утверждают, что существуют сотни различных рецептов таких напитков. Любой коктейль с «Кампари» – это отличный аперитив. Причем готовить их совсем не сложно.

Коктейль Americano

Самый первый коктейль с «Кампари» был создан в шестидесятых годах 19 столетия. Придумал его сам Гаспар Кампари, основатель знаменитого горького ликера. Желая как-то разбавить терпкий напиток, он решил смешать его со сладким вермутом. В результате получился ароматный продукт, которому бармен дар название «Милано-Торино». Этому есть вполне разумное объяснение. Ведь основной ингредиент напитка (биттер Campari) родом из Милана, а красный вермут – из Турина. Правда, позднее такой коктейль с «Кампари» стали называть иначе. Произошло это в годы Первой мировой войны, когда американские войска оказали неоценимую помощь итальянской армии. Местные солдаты щедро угощали союзников в барах, празднуя победу. По легенде, именно это и побудило Гаспара Кампари дать своему напитку новое имя. В благодарность за помощь своей стране он назвал коктейль «Американо». По рецептуре для него нужны следующие ингредиенты: по 30 миллилитров ликера Campari и красного вермута (например, Cinzano Rosso), а также немного содовой (по вкусу).

Технология приготовления напитка:

  1. Положить на дно бокала 4 кубика льда.
  2. По очереди залить оба компонента и перемешать их.
  3. Добавить по вкусу немного содовой. Она придаст коктейлю приятный освежающий эффект.

Для такого напитка обычно используются бокалы «олд-фешн». Для украшения сверху можно положить небольшой завиток кожуры лимона.

Коктейль Negroni

На основе «Американо» был создан еще один популярный коктейль с «Кампари». Его изобретателем считается французский генерал Паскаль-Оливье граф де Негрони. Как настоящий корсиканец, он предпочитал более крепкие напитки. Используя уже известный рецепт, граф только заменил в нем содовую на джин. А, чтобы его напиток отличался от остальных, просил украсить стакан тонкой долькой апельсина. В таком виде коктейль был назван его именем. Чтобы приготовить его в домашних условиях, понадобится: по 1/3 джина, ликера Campari и сладкого вермута.

Методика приготовления:

  1. Бокал «олд-фешн» сначала слегка охладить с помощью мелкого дробленого льда. Посуда должна быть максимально холодной.
  2. Положить в него кусковой лед.
  3. Залить все ингредиенты и хорошо их перемешать.
  4. Украсить бокал долькой апельсина.

У такого коктейля довольно оригинальный горько-пряный вкус. В нем терпкость ликера идеально сочетается с можжевеловой свежестью джина и приятной сладостью вермута. Этот напиток обладает очень хорошим расслабляющим эффектом. Поэтому его лучше пить не перед едой, а накануне веселой вечеринки.

«Поймай меня»

Сегодня практически в любом отечественном баре можно заказать смешанные напитки, созданные на основе знаменитого ликера «Кампари». Коктейли, рецепты и способы приготовления многих из них входят в официальный список Международной ассоциации барменов. Взять, к примеру, напиток с необычным названием «Поймай меня». Для его приготовления нужны следующие компоненты: 70 миллилитров розового вермута, 30 миллилитров ликера «Кампари», 60 миллилитров вишневого сиропа, 30 миллилитров сока лайма, 5 кубиков льда, 60 миллилитров тоника и кусочек лайма.

Готовится напиток следующим образом:

  1. Сначала в шейкере нужно смешать вермут с ликером и вылить их в чистый бокал.
  2. Сверху положить лед.
  3. Снова смешать в шейкере сироп, тоник и сок и вылить все это в бокал.
  4. Украсить коктейль долькой лайма.

На приготовление такого напитка уходит не более двух минут. В результате получается просто изумительный продукт с чудесным фруктовым ароматом.

Коктейль Garibaldi

Среди напитков, которые связаны с историй Италии, особое внимание стоит обратить на коктейль «Кампари Оранж». Его еще называют «Гарибальди». Ароматному напитку было дано имя знаменитого полководца Джузеппе Гарибальди, который в 19 веке возглавил войну за освобождение итальянского народа. Горечь коктейля говорит о страданиях людей, а его цвет такой же ярко красный, как и куртка великого вождя, которую он постоянно одевал во время сражения. Этот напиток легко приготовить дома, имея в наличии следующие обязательные ингредиенты: 150 миллилитров апельсинового сока, 50 миллилитров ликера Campari, 200 грамм льда в кубиках и цедра 1 апельсина (или лимона).

Для работы понадобится высокий стакан «хайбол». Но некоторые бармены предпочитают использовать «олд-фешн». Далее необходимо:

  1. Наполнить бокал льдом.
  2. Залить в него ликер.
  3. Добавить сок, не перемешивая. Жидкость должна доходить до самых краев.
  4. Украсить напиток кусочком цедры.

Оригинальное сочетание свежего сока и горького ликера действует освежающе, а также дает большой прилив энергии и сил.

Коктейль Rosie’s

Какие еще можно приготовить коктейли на основе «Кампари»? Здесь есть, где разгуляться фантазии. Взять, к примеру, коктейль «Рози». Его изобрела обычная официантка из Лос-Анджелеса по имени Роуз Смарт. Девушка решила сделать что-нибудь приятное для своей подруги по поводу ее предстоящей помолвки. Напиток сразу стал популярным и получил название своей создательницы. Приготовить его может каждый. Для этого надо иметь: 40 миллилитров «Кампари», 10 миллилитров любого апельсинового ликера, 80 миллилитров грейпфрутового сока, немного шампанского и 1 кружочек апельсина.

Готовится напиток очень быстро:

  1. Первым делом сок и оба ликера надо залить в шейкер и хорошенько встряхнуть.
  2. Вылить смесь в стаканчик для лонгдринка.
  3. Добавить немного шампанского.
  4. На край стакана повесить кружок апельсина.

Подавать такой напиток положено с трубочкой. Этот чудесный бодрящий коктейль будет настоящим украшением любой молодежной вечеринки.

Домашний бармен

Совсем не сложно приготовить всевозможные коктейли с «Кампари» в домашних условиях. Для этого надо только:

  • иметь в наличии необходимые компоненты;
  • знать их соотношение по рецептуре;
  • использовать соответствующую посуду и оборудование.

Но не у каждого в домашнем баре есть, например, шампанское или разные виды вермутов. Для таких случаев можно использовать более простые варианты. Чтобы провести приятный вечер в компании гостей, подойдет, например, коктейль «Адриатика». Для него понадобится: 30 миллилитров ликера Campari, 20 миллилитров любой водки, а также по 1 чайной ложке сока лимона и апельсинового ликера.

Технология приготовления такого напитка предельно проста:

  1. Все ингредиенты нужно хорошо перемешать. Для этого можно использовать любые подручные средства.
  2. Добавить лед.
  3. Перелить напиток в высокие бокалы.

От такого коктейля гости будут просто в восторге. Он поднимет всем настроение и станет неплохим вариантом аперитива перед застольем.

Sehen Sie Online-Videos, Teilen Sie mit Freunden

RU

  • Home
  • Trending
  • Live TV
  • Home
  • Trending
  • Live TV
  • Subscriptions

Library

  • History
  • Watch later
  • Popular Right Now
  • Liked videos
  • My playlist

Best on Clip-Share

  • Film & Animation
  • Autos & Vehicles
  • Music
  • Pets & Animals
  • Sports
  • Gaming
  • Comedy
  • Entertainment
  • Howto & Style
  • Science & Technology

 

3:23Preview: Liverpool v Atletico Madrid | UEFA Champions LeagueOptus Sport13:50Ваrcеllona vs Borussiia Dorttmund 3-1 | Highlights | UEFA Champions League 2019/2020Football Planet HD15:061994 — 2019 ALL CHAMPIONS LEAGUE FINALSRptimaoTV2:25Chelsea 4-0 Everton | Superb Chelsea Spoil Ancelotti’s Return! | Premier League HighlightsChelsea Football Club10:35Most INSANE Games of the Champions League — 2019 #2Vanemas10:03CHAMPIONS LEAGUE ROUND OF 16 STAGE, 2ND LEG PREVIEWS | ft Liverpool vs Atletico, PSG vs DortmundTalkFCB2:40The Champions (League Draw): Last 16 Match-Ups Confirmed for 2019/20B/R Football8:31Our 2nd Leg CHAMPIONS LEAGUE PREDICTIONS (Round of 16)Thogden20:29Liverpool vs Atletico l Champions League Round of 16 Preview & PredictionsRamboFYI3:57NICOLAE GUTA & DANI MOCANU — CHAMPIONS LEAGUE — #DESANTOMUSICDeSanto Music Official13:04КОРОЧЕ ГОВОРЯ, 8 МАРТА [От первого лица] | Подарок для мамыИККЕРО

Views 885KDay ago

12:27СВИДАНИЕ ПОД ВОДОЙ!**ОНА ЧУТЬ НЕ ЗАПЛАКАЛА**ЕГОРИК

Views 1. 1MDay ago

36:19ЗАЛЁТ на 1.200.000р! ПОДАРОК к 8 марта! Hyundai TucsonМаксим Шелков

Views 639KDay ago

19:40СНЯЛ ПРИВИДЕНИЕ НА КАМЕРУ в доме священников?! GhostBuster За ГРАНЬЮДима Масленников

Views 2.3M2 days ago

04:16МОЙ ТВОРЧЕСКИЙ ПУТЬDobryak

Views 832KDay ago

04:14Juventus 2-0 Inter | Ramsey and Dybala Seal HUGE Derby win! | Serie A TIMSerie A

Views 2.5M23 hours ago

09:3408.03.2020 Манчестер Юнайтед — Манчестер Сити. Обзор матчаPRO Английский футбол

Views 512KDay ago

16:10ВААААУ!!! ВЫБИЛ ЛЕГУ НА САМОМ БОЛЬШОМ В МИРЕ «АЙПАДЕ»!AuRuM TV

Views 1.3MDay ago

02:33ШАРЛОТ & MORGENSHTERN — Малышка (Love Video 2020)MORGENSHTERN

Views 2. 2MDay ago

11:45ПРОБУЕМ ДОШИРАКИ ИЗ КИТАЯ!SlivkiShow

Views 3MDay ago

16:51Polizei stürmt meine Wohnung!Stanni

Views 597KDay ago

02:55JOKER BRA — PASST MIR SO GAR NICHT (PROD. BY LUCRY)Capital Bra

Views 383K23 hours ago

12:54DIE GEILSTEN MASCHINEN mit Joey und Jana (wir machen Slush omg)Julia Beautx

Views 401KDay ago

11:52Ich teste EURE TikTok Beauty Hacks… *hilfe*Kim Lianne

Views 313KDay ago

02:14Dorfkind VS. StadtkindVarion

Views 953KDay ago

04:14Juventus 2-0 Inter | Ramsey and Dybala Seal HUGE Derby win! | Serie A TIMSerie A

Views 2.4M23 hours ago

11:19Die gestörtesten ASMR Geräusche — Mit JanaRezo ja lol ey

Views 234KDay ago

10:12Tourette beim MeditierenGewitter im Kopf — Leben mit Tourette

Views 283KDay ago

05:105 LIFEHACKS VON SLIVKI SHOWSlivkiShow DE

Views 160KDay ago

51:33Einstein und Hawking — Das Geheimnis von Zeit und Raum (2/2) | Doku | ARTEARTEde

Views 79KDay ago

15:13Love Island Parodie | Folge 18Annikazion

Views 133KDay ago

15:50tagesschau 20:00 Uhr, 08. 03.2020tagesschau

Views 302KDay ago

18:12Riesen TELEFONMAST-Wippe | KliemannslandKliemannsland

Views 167KDay ago

05:47UFC 248: Israel Adesanya & Yoel Romero Octagon InterviewsUFC — Ultimate Fighting Championship

Views 3.8MDay ago

05:30Corona.Ron Bielecki

Views 85KDay ago

02:26$€X-Bots Song — KELLY (Musikvideo)KELLY //missesvlog

Views 127KDay ago

10:46ICH WERDE KOMPLETT zur FRAU VERWANDELT mit Julia Beautx | Joey’s JungleJoey’s Jungle

Views 315KDay ago

04:52ALMAN im Reisebüro | Phil LaudePhil Laude

Views 356KDay ago

03:16LOREDANA — ANGST (prod Rymez & Miksu)LOREDANA

Views 5M3 days ago

04:39Chiara D’Amico mit «Dance Monkey» von Tones And I | DSDS 2020Deutschland sucht den Superstar

Views 380K2 days ago

04:11Frei. Wild — Schrei auf, schrei laut [Offizielles Video]Frei.Wild

Views 118KDay ago

12:39Fünf Models im Shoot-Out: Wer muss GNTM direkt verlassen? | GNTM 2020 | ProSiebenGermany’s next Topmodel

Views 191KDay ago

09:35Coronavirus: Warum hamstern die Deutschen Nudeln und KLOPAPIER? | heute-show vom 06.03.2020ZDF heute-show

Views 1.3M2 days ago

03:06LUNA DJO X SAVO PEROVIC — GRAM PO GRAM (OFFICIAL VIDEO)IDJVideos.TV

Views 537KDay ago

5 коктейлей с Кампари (Campari)

Кампари — это итальянский биттер на основе трав, фруктов и специй. Идеальный и, пожалуй, один из самых популярных, ингредиентов для приготовления коктейлей.

О некоторых из них мы расскажем вам сейчас.

Американо

Нет, это не кофе. И кофе тут нет даже.

Ингредиенты:
  • сладкий красный вермут: 30 мл;
  • Кампари: 30 мл;
  • Газировка: 100 мл;
  • Лед в кубиках: 150 грамм.
Как готовить:
  • В охлажденный бокал налить Мартини Россо
  • Добавить Кампари
  • Добавить содовую
  • Перемешать
  • Украсить долькой апельсина

Негрони

Это один из самых распространенных коктейлей в мире, известный с 1919 года. <.p>

Ингредиенты:
  • Джин: 30 мл;
  • Кампари: 30 мл;
  • Красный вермут: 30 мл;
  • Лед: 150 грамм.
Как готовить:
  • Наполнить бокал льдом
  • Влить джин, красный мартини и Кампари
  • Перемешать
  • Украсить апельсиновой цедрой

Гарибальди

Рецепт этого коктейля был создан в Милане в 1861 году, а назван он в честь известного итальянского народного героя-освободителя — Джузеппе Гарибальди.

Ингредиенты:
  • Апельсиновый сок: 140 мл;
  • Кампари: 60 мл;
  • Лед: 150 грамм.
Как готовить:
  • Наполнить бокал льдом
  • Добавить Кампари
  • Долить апельсиновый сок
  • Немного перемешать
  • Украсить долькой апельсина

B2B

Это травянистый коктейль на основе итальянского и чешского биттеров.

Ингредиенты:
  • Бехеровка : 40 мл;
  • Кампари: 20 мл;
  • Виноградный сок : 50 мл;
  • Газировка: 100 мл;
  • Лед: 100 грамм.
Как готовить:
  • Налить в бокал Бехеровку и Кампари
  • Добавить виноградный сок
  • Перемешать
  • Влить газировку
  • Украсить лаймом

Русский Campari

Очень простой коктейль, который можно приготовить за считанные секунды.

Ингредиенты:
  • Кампари: 50 мл;
  • Водка: 50 мл.
Как готовить:
  • Взболтать все ингредиенты в шейкере со льдом
  • Перелить смесь через ситечко в охлажденный бокал

На самом деле, коктейлей с Кампари существует очень и очень много. Это универсальный ликер, который идеально сочетается со многими ингредиентами. Купить Кампари вы можете в магазине WineStreet.

Как пить Кампари правильно — рецепты коктейлей

Campari считается достаточно капризным напитком. Не так-то просто угадать, с чем лучше всего мешать этот оригинальный итальянский продукт. Постараемся разобраться в этом вопросе.

Как правильно пить Кампари

Львиная доля популярности Campari приходится не только на его вкусовые особенности, но еще и на успешные рекламные кампании с участием известных звезд: Джессики Альбы, Милы Йовович, Евы Мендес и многих других. Итальянский бренд позиционирует себя, как утонченный, жаркий и страстный ликер.

Джессика Альба в рекламе Campari

Как правило, в чистом виде напиток предпочитают в качестве аперитива. Благодаря своему горьковатому привкусу, биттер прекрасно подходит для улучшения аппетита и поднятия настроения. В этом случае его предварительно охлаждают и подают уже непосредственно перед приемом пищи. Кому-то просто нравится оригинальный напиток, и они пьют его неразбавленным, только лишь с кубиками льда. Лучшей закуской считаются цитрусовые фрукты или виноград.

Охлаждать ликер необходимо, так как теплым или комнатной температуры он становится достаточно специфичным и не очень приятным на вкус.

Чтобы снизить крепость ликера и поубавить его горечи, вермут Campari принято разбавлять свежими соками:

  • апельсиновым;
  • грейпфрутовым;
  • лимонным;
  • вишневым;
  • гранатовым;
  • ананасовым.

Смешивается такое освежающее питье соотношением 1:2 (одна часть биттера и две доли сока). Душной летней порой нет ничего лучше стаканчика этого напитка с кубиками льда, позвякивающими об стекло. Молодые люди предпочитают миксовать вермут с газированными напитками, чаще всего с такими, как «спрайт» или «швепс».

Микс вермута и апельсинового сока уже давно стал признанным простым коктейлем под названием «Гарибальди». В это питье иногда добавляют листики мяты или мелиссы для придания вкусу пикантности.

Еще одним выбором, с чем пить Кампари, становятся другие алкогольные напитки:

  • мартини;
  • водка;
  • джин;
  • коньяк;
  • и другие.

Обычно смешивают в соотношении  1:1.

Рецепты коктейлей с Campari

Международная ассоциация барменов давно утвердила ликер в официальных составах популярных классических коктейлей:

«Негрони»

Негрони

Этот напиток можно назвать столкновением двух алых вермутов. Для приготовления одной порции коктейля используется 30 мл Кампари, 30 мл Мартини Rosso и 20 мл джина. Всё наливается в стакан, добавляется лед и украшается сверху апельсиновой или лимонной долькой. Пьется Негрони через тонкую соломинку.

«Белый Кампари»

Белый Кампари

Здесь раскрывается «вермутовая» сторона Campari. В мартинке вместе со льдом смешивается 20 мл Кампари и 50 мл хорошего белого вина.

«Адриатика»

Адриатика

Достаточно крепкий и терпкий коктейль. Для «Адриатики» берется 20 мл водки, одна чайная ложка апельсинового ликера и одна чайная ложка лимонного сока – всё это перемешивается в шейкере, а затем выливается в стакан со льдом. После чего добавляется 30 мл ликера: успех любой вечеринки гарантирован! Украшением можно сделать любой яркий, красиво нарезанный цитрус.

«Волна»

Мягкий и бодрящий напиток. Чтобы приготовить его смешивается 200 мл клубничного сока с мякоть, 100 мл апельсинового сока и 30 мл биттера . Незабываемые эмоции на языке накатывают буквально волной.

«Американо»

Американо

Традиционный американский бар привык к употреблению содовой воды. Поэтому ничего удивительного, что на основе европейского ликера был создан такой вполне заокеанский коктейль: 200 мл содовой воды, 20 мл биттера, 20 мл Мартини Россо.

К коктейлям на основе Campari принято подавать:

  • нарезку из свежих фруктов;
  • жареные орехи: миндаль, фундук, кешью;
  • сыр «бри».

Все решают, как пить Кампари по своему усмотрению. Всё зависит только от вашего вкуса и предпочтений.

Сыр «бри» отлично дополнить Кампари

Ликер Кампари (Campari) — рецепты коктейлей

Ликеры на травах с характерной доминантой цитрусовых являются одной из самых интересных основ для коктейлей. Одним из самых востребованных продуктов в этой категории является биттер Campari, который производится в Италии. Рецептура напитка хранится в тайне, известно лишь то, что при его создании используется не менее 60 трав.

Изюминкой биттера является горький средиземноморский апельсин, придающий изысканный цитрусовый привкус и неповторимый аромат. Кампари широко используют бармены всего мира при создании коктейля, а один из самых первых рецептов создал в 1900 году Гаспар Кампари, владелец компании по выпуску ликера, в честь американской делегации, посетившей его бар. 

Американо — напиток Джеймса Бонда

«Взболтать, но не смешивать» — эти рекомендации от Джеймса Бонда по поводу коктейля на основе мартини и водки появились далеко не сразу. В первой книге легендарной «бондианы» герой предпочитал пить коктейль «Американо», автором рецепта которого является «Кампари». Чтобы приготовить напиток, потребуются следующие ингредиенты:

  • 30 мл мартини Россо;
  • 30 мл Кампари;
  • 100 мл содовой;
  • 150 грамм льда.

Готовится в бокале, который рекомендуется предварительно охладить. В олд фешен или рокс наливают красный вермут, добавляют биттер и содовую. Быстро и тщательно перемешивают, украшают долькой апельсина и подают. 

Американо быстро завоевал популярность, но поклонники крепких коктейлей отмечали не высокий градус напитка, что казалось для них критическим недостатков. Граф Камилло Негрони предложил заменить в рецепте газировку сухим джином. Это заметно повысило градус, а обновленный «Американо» получил название «Негрони». В его составе:

  • 30 мл мартини Россо;
  • 30 мл Кампари;
  • 30 мл джина;
  • 150 грамм льда.

Готовится коктейль аналогично, но так как его внешний вид сильно напоминает «Американо», то было решено украшать бокал не долькой любимого многими фрукта, а апельсиновой цедрой. 

Популярные коктейли на основе «Кампари»

Итальянский ликер гармонично сочетается с соками, фрешами, классическими крепкими напитками и другими биттерами. Это стало причиной фантастического разнообразия коктейлей на основе Campari. Большой популярностью пользуются как простые, так и сложные рецепты. 

Яркий, поднимающий настроение коктейль «Гарибальди» любят не только в Италии. Он отличается простой рецептурой:

  • 60 мл биттера;
  • 140 мл апельсинового сока;
  • 150 грамм кубиков льда.

Для создания не нужен ни шейкер, ни стрейнер, ни другое профессиональное оборудование бармена. В бокал высыпают кубики льда, наливают ликер и сок, немного перемешивают. Подают, украсив долькой апельсина. Коктейль отлично утоляет жажду.

Поклонники травяных ликеров с удовольствием пьют коктейль под названием B2B. В нем смешивают два популярных европейских биттера – чешскую «Бехеровку» и итальянский «Кампари». Рецепт включает в себя простые и доступные ингредиенты:

  • 20 мл Campari;
  • 40 мл «Бехеровки»;
  • 50 мл виноградного сока;
  • 100 мл содовой;
  • 100 грамм льда.

Готовится коктейль непосредственно в бокале, куда насыпаются кубики льда. Первыми добавляются битеры в любом порядке. После этого необходимо долить сок и перемешать. Содовая в полученный коктейль добавляется аккуратно, после чего краешек бокала украшается долькой лайма. 

Самый простой рецепт с итальянским битером — «Русский Campari». Не сложно догадаться, что в его составе будет водка. Рекомендуется смешать в ликер и водку в шейкере, предварительно добавив в него несколько кубиков льда. Разливается коктейль в предварительно охлажденные бокалы, при этом стоит использовать в домашних условиях ситечко, чтобы избавиться от крошек льда. В этом случае напиток станет прозрачным. Коктейль отличается мягким вкусом, хорошо пьется, оставляя продолжительное послевкусие с элегантной горчинкой. У этого напитка отличное гастрономическое сочетание с оливками, которые стоит подать в качестве закуски. 

Оригинальные коктейли из Кампари

«Мохито» является одним из самых популярных коктейлей, итальянцы предложили его немного изменить и обязательно добавить немного «Кампари». В результате получился «Мохито по-итальянски» — коктейль, который имеет необычный изысканный вкус и очень нравится прекрасной половине человечества. Чтобы его приготовить самостоятельно, потребуются следующие компоненты:

  • 30 мл Просекко – итальянское игристое вино;
  • 15 мл итальянского биттера;
  • 45 мл белого рома;
  • 20 мл сока лимона;
  • 20 мл сахарного сиропа;
  • 3 веточки мяты.

Из классического рецепта присутствуют только веточки мяты, сахарный сироп и белый ром. Готовить, несмотря на большой перечень ингредиентов, не сложно. Необходимо подготовить шейкер и первыми положить в него две веточки мяты, листья которой предварительно разминают до появления сока. К мяте добавляют сахарный сироп, лимонный сок, ром и итальянский ликер. Все это тщательно перемешивается, после чего остается перелить в бокал, добавить Просекко и украсить третьей веточкой мяты. 

Оригинальной вариацией «Американо» стал коктейль «Валентино», который придумал бармен с аналогичным именем. Для повышения крепости он, в отличие от «Негрони», решил использовать не английский джин, а ржаной виски. При этом основной вкусовой оттенок должен был давать виски. Для приготовления порции «Валентино» рекомендуют использовать:

  • 60 мл ржаного виски;
  • 15 мл итальянского ликера;
  • 15 мл красного вермута.

Готовится коктейль в шейкере, где все компоненты смешиваются с несколькими кубиками льда. Подается в бокале, украшенном цедрой апельсина. 

Конкуренцию «Мохито по-итальянски» готов составить коктейль, получивший название «Игристая радость». Чтобы его приготовить, необходимы следующие компоненты:

  • 30 мл грейпфрутового сока;
  • 60 мл игристого вина;
  • 60 мл биттера.

Шампанское с ликером образуют удивительное вкусовое сочетание, которое дополняется утонченными нотками грейпфрута. Готовят в фужере для шампанского: наливают «Кампари», сок, перемешивают и доливают игристое вино. Для коктейля готовят оригинальное украшение: в дольку апельсина втыкают зубочистку, на нее нанизывают одну ягоды малины и веточку мяты. 

Биттеры прекрасно сочетаются с цитрусовыми фруктами. В этом можно убедиться, приготовив коктейль «Цитрусовый торнадо». Для этого понадобится:

  • 20 мл красного вермута;
  • 20 мл итальянского ликера Campari;
  • 20 мл ликера Старый Таллинн;
  • 150 грамм льда;
  • 10 мл сока лимона.

Чтобы приготовить коктейль, нужно взять барный шейкер, поместить в него все ингредиенты, тщательно смешать. В бокал наливать через ситечко, чтобы избавиться от частичек льда. Украшается цедрой.

Красивый коктейль из биттера и шампанского получил название «Красные розы». В его составе:

  • 100 мл брюта;
  • 100 мл «Кампари»;
  • 150 грамм льда.

Готовится в большом фужере для шампанского, куда засыпается лет, доливается биттер, а затем брют. В бокал аккуратно, с помощью ложки, опускают дольку апельсина или цедру этого цитрусового фрукта. 

Все коктейли на основе итальянского цитрусово-травяного биттера отличаются простотой и являются отличной школой для начинающих поклонников искусства барменов. Представленные рецепты из доступных ингредиентов являются идеальным поводом для покупки бутылки «Кампари» и творческого эксперимента. 

Вам может понравиться

Читайте также:

Коктейли с вермутом

Апероль или Кампари?


Смотрите также

  • Листья хрена на зиму
  • Как делать гуляш из курицы
  • Снуд детский спицами схемы вязания
  • Завтрак детям перед школой
  • Томаты сушеные как использовать
  • Что можно сделать на зиму из морковки
  • Печенье из геркулесовых хлопьев рецепт
  • Как сделать бисквит для торта
  • Пирожки с луком
  • Рецепт засолки огурцов с семенами горчицы на зиму в банках
  • Как сделать паштет из грибов

Популярнейший напиток Венеции Шприц Апероль Spritz Aperol

Кто-то называет его попросту шприцем. Кто-то на европейский манер спритцем. И то и другое верно, название сути не меняет. Шприц – это напиток на основе белого игристого вина (просекко), биттера (кампари или апероль) и газированной воды. Формально говоря, это коктейль, но я бы не стал называть шприц словом, имеющим некоторый оттенок гламура. Шприц — это напиток венецианских улочек, площадей и набережных, кале, кампо и фондаменто.

 

Спритцу почти два века, а он по-прежнему в моде. Более того, в последние годы он переживает новую волну популярности.

Своим появлением на свет напиток обязан австрийцам, хозяйничавшим в Венеции полтора века после Наполеона. Именно австрийцы начали разбавлять венецианские вина содовой водой. Злые языки утверждают: привыкшие освежаться пивом, австрийцы пытались вино приблизить по крепости к тому, к чему привыкли с гимназической скамьи. Может быть и так. В Австрии, особенно в западных регионах, в Вахау, традиционно смешивают вино с газировкой. Само название «шприц» восходит к немецкому spritzen – брызгать, разбрызгивать. Так или иначе, шприц появился на свет во времена австрийской оккупации. Такое случается в истории: завоеватели приносят не только вред, но и пользу.

 

Итальянцы не любят искусственность – ни в еде, ни в напитках. Мясо, так мясо, вино так вино. Если есть цыпленок – подавай на стол всего цыпленка, нечего на французский манер портить продукт замысловатыми соусами. Среди местного населения шприц долгое время не был популярным. Даже после того, как кто-то додумался подправлять его вкус аперитивом: кампари на основе трав и фруктов или артишоковым цинаром.

 

А вот гости Светлейшей сразу оценили приятный горьковатый вкус и освежающий эффект. Говорят, Сергей Дягилев, всерьез и надолго болевший Венецией и нашедший на Сан-Микеле свой последний приют, тепло отзывался о шприце. Шприц частенько упоминали Эрнест Хемингуэй и Френсис Скотт Фитцджеральд. А уж эти ребята  знали толк как в жизни, так и в напитках.

 

Новое дыхание шприц приобрел после 1919 года, когда братья Барбиери начали в Падуе выпуск апероля – биттера на основе цитрусовых, с пониженным содержанием алкоголя. Может, дело заключалось в меньшем количестве градусов (11 в апероле против 21 в кампари), а может, в том, что оранжевый апероль в отличие от карминно-красного кампари придавал шприцу теплый солнечный оттенок.

 

Одни утверждают, что вино, биттер и газированную воду следует смешивать в равных пропорциях. Другие — что на две части просекко нужно брать одну часть апероля, а газировки добавлять по вкусу, чуть-чуть, только чтобы освежить игристость.

Педанты настаивают: льда должно быть ровно 4 кубика. Венецианские бармены выше таких мелочей, разных там частей и пропорций: в стакан засыпают пригоршню льда, заливают до половины вином, чуть брызгают газировкой и щедрым круговым движением поливают все это аперитивом – столько, сколько влезет. Довершает композицию пол-ломтика апельсина… В стакан хорошо опустить зеленую оливку, насаженную на длинную деревянную шпажку – такой лопаткой удобно перемешивать жидкость и лед, а в подходящий момент использовать оливку на закуску.

 

В некоторых заведениях шприц подают в винном бокале. На мой взгляд, это чистой воды безобразие. Сэкономить хотят, что ли? Шприц должен быть солиден в руке и весом — тут двумя глотками не обойтись. Большой толстостенный стакан, только такая посуда подойдет для хорошего шприца! (От двух евро в скромном баре где-нибудь в Кастелло у Арсенала до семи на набережной у моста Риальто.)

 

В наш век виртуозного маркетинга и назойливого внимания к удобству потребления шприц можно купить в готовом виде и, как говорится, в удобной упаковке: хочешь в бутылке для шампанского, хочешь в демократичной баночке фасона 0,33 (полпинты). Но подумайте как следует, нужно ли вам это, по крайней мере здесь, в Венеции?

 

Реклама утверждает: шприц, в состав которого входят биттеры на основе трав и цитрусовых, не только вкусен, но и полезен. Кто бы спорил! Кто вообще станет спорить с тем, что употребление алкоголя (в умеренных дозах) способствует гармонизации духовного и физического развития человека? Уж всяко не жители Среднерусской равнины и сопредельных с ней территорий.

 

Стаканчик-другой шприца, выпитый за крохотным столиком, примостившимся на изгибе канала, возле самой воды, на тесном пятачке, с которого открывается сумасшедший по своей невероятности вид (а в Венеции сумасшедший вид открывается почти с каждой точки) – это ни в коем случае не опьянение и даже не хмель. Это кристальной чистоты бесшабашность и легкость помыслов, дерзновенность мысли и ровный жар сердца. Это всепобеждающая вера в то, что мир — рано или поздно — станет прекрасен и добр, совершенен и чист, как глаза ребенка, в нем не будет больше зависти и зла, жестокости и жлобства, тиранов и войн, дураков и плохих дорог, а если когда-нибудь и брызнут из чьих-то глаз слезы – то только слезы вдохновения и восторга.

 

Будем здоровы! За Венецию!

 

Павел Верещагин

Фотопреобразуемый флуоресцентный зонд, CaMPARI, маркирует активные нейроны свободно движущихся интактных взрослых плодовых мушек

  • Список журналов
  • Передние нейронные цепи
  • т. 14; 2020
  • PMC7227398

Передние нейронные цепи. 2020; 14: 22.

Опубликовано онлайн 2020 май 8. DOI: 10.3389/fncir.2020.00022

, 1 , 2 и 1, *

Авторская статья ЗАМЕЧАНИЯ ЗАМЕЧАНИЯ И ЗАМЕЧАНИЯ КОПИЦИАЛЬНА И СОЕДИНЕНИЯ.

Дополнительные материалы
Заявление о доступности данных

Связь нейронных схем с поведением путем картирования активных нейронов in vivo — это вызов. Как генетически кодируемые индикаторы кальция (GECI), так и промежуточные ранние гены (IEG) использовались для точного определения активных нейронов во время стимула или поведения, но имеют недостатки, такие как ограничение движения организма, требующее априорного знания активной области или с плохим временным разрешением. Модулируемый кальцием фотоактивируемый логометрический интегратор (CaMPARI) был разработан для преодоления этих пространственно-временных проблем. CaMPARI представляет собой фотоконвертируемый белок, который преобразует зеленую флуоресценцию в красную только в присутствии высокой концентрации кальция и света с длиной волны 405 нм. Это позволяет экспериментатору точно отмечать активные нейроны в определенных временных окнах. Затем можно количественно определить фотоконверсию, взяв отношение красной флуоресценции к зеленой. CaMPARI обещает возможность отслеживать активные нейроны во время определенного стимула; однако применение CaMPARI у взрослых Drosophila были ограничены фотопреобразованием во время иммобилизации мух. Здесь мы демонстрируем метод, который позволяет фотопреобразования нескольких свободно движущихся интактных взрослых мух во время стимула. Мух помещали в чашку с фильтровальной бумагой, смоченной уксусной кислотой (рН = 2) или нейтрализованной уксусной кислотой (рН = 7), и подвергали воздействию фотопреобразующего света (60 мВт) в течение 30 мин (500 мс вкл. , 200 мс выкл.). Сразу после фотопреобразования целые мухи фиксировались и визуализировались с помощью конфокальной микроскопии. Соотношение красного и зеленого было количественно определено для клубочка DC4, пучка нейронов, экспрессирующих Ir64a , ионотропный рецептор, воспринимающий кислоты в мочке усика Drosophila . Мухи, подвергшиеся воздействию уксусной кислоты, показали в 1,3 раза большую фотоконверсию, чем мухи, подвергшиеся воздействию нейтрализованной уксусной кислоты. Этот вывод был повторен с использованием более физиологического стимула яблочного уксуса. Эти результаты показывают, что CaMPARI можно использовать для маркировки нейронов у неповрежденных, свободно передвигающихся взрослых мух, а также для идентификации схем, лежащих в основе сложного поведения.

Ключевые слова: оптогенетика, CaMPARI, Drosophila melanogaster , фотоконверсия, поведение

Кальций является важным вторичным мессенджером в нейронах и оказался одним из наиболее широко используемых сигналов для отслеживания нейронной активности (Palmer and Tsien, 2006) . Большинство нейронов имеют низкую концентрацию внутриклеточного кальция, составляющую 50–100 нМ, которая возрастает в 10–100 раз при активации нейронов (Berridge et al., 2000), таким образом, активность может быть достоверно отмечена пиком концентрации кальция. Первоначально измерение внутриклеточного кальция зависело от доставки красителей или флуоресцентных индикаторов кальция. Хотя многие из этих индикаторов имеют хорошее отношение сигнал/шум и быструю кинетику (Paredes et al., 2008), они обычно полезны только в течение короткого периода после родов (Jia et al., 2011). Генетически кодируемые индикаторы кальция (GECI) на основе белков были разработаны, чтобы обеспечить многократное считывание в течение нескольких дней (Looger and Griesbeck, 2012). За последние два десятилетия GECI постоянно развивались и модифицировались для улучшения яркости (Tian et al., 2009).; Чен и др., 2013 г.; Barnett et al., 2017), кинетика (Chen et al., 2013; Sun et al., 2013), стабильность (Tian et al., 2009; Chen et al. , 2013) и чувствительность (Chen et al., 2013). ; Barnett et al., 2017), что позволяет более эффективно отслеживать изменения активности во времени в субпопуляциях нейронов и в целом мозге у различных модельных организмов.

Несмотря на широкий успех GECI в визуализации in vivo , отслеживание нейронной активности с поведением ограничено из-за необходимости фиксации головы организмов для получения изображений с высоким разрешением (Tian et al., 2009).; Sun et al., 2013), за исключением разработки минископа для грызунов и других мелких млекопитающих (Aharoni and Hoogland, 2019). Однако поле зрения часто ограничено необходимостью доставки света в мозг и может потребовать априорных знаний о конкретной области мозга, относящейся к конкретному стимулу, независимо от того, фиксируется ли голова животного под микроскопом или свободно перемещающиеся с помощью минископа (Aharoni and Hoogland, 2019; de Groot et al., 2020). Поскольку активность некоторых цепей настолько недолговечна, она может остаться незамеченной, если у экспериментатора нет конкретных знаний о том, где и когда отображать. Таким образом, GECI имеют ограниченное применение в качестве инструмента обнаружения цепей при идентификации активированных цепей у свободно ведущих себя животных. Это особенно верно в отношении непрозрачных организмов или систем с непрозрачными стадиями развития. Потенциальным решением этих проблем может быть возможность точно «помечать» или идентифицировать нейроны в течение определенного периода стимуляции, что позволяет получать подробные изображения после активности. Для этого Fosque et al. (2015) изобрели интегратор кальция, который объединил фотопереключаемый белок (mEOS) с молекулярными аспектами GCaMP, GECI, чтобы сделать фотопереключение зависимым как от кальция, так и от фиолетового света. С помощью этого нового инструмента активные нейроны, экспрессирующие этот интегратор, будут преобразовывать флуоресцентное излучение с зеленого на красное только при одновременном присутствии высокой концентрации кальция в результате нейронной активности и пользовательского фиолетового света. Этот интегратор кальция был назван фотоактивируемым логометрическим интегратором с модуляцией кальция (CaMPARI). Из-за преходящей природы кальция и определяемого пользователем фотопреобразующего света мечение с помощью CaMPARI можно строго контролировать, чтобы отслеживать нейронную активность во время определенного поведения.

До настоящего времени CaMPARI успешно применялся для изучения поведения одиночной молоди рыбок данио (Moeyaert et al., 2018; Sha et al., 2019) и личинок плодовой мухи (Patel and Cox, 2017) из-за полупрозрачной природы этих организмов. Однако использование у взрослых плодовых мушек было ограничено из-за кутикулы головы мухи. В большинстве опубликованных отчетов об использовании CaMPARI у взрослых плодовых мушек требуется, чтобы муха была зафиксирована или привязана к микроскопу с прямым освещением лазером (Bohra et al., 2018; Manjila et al., 2019).). Хотя такие эксперименты ценны, они ограничивают движение мухи и снова требуют, чтобы животное было в одиночестве, что может повлиять на то, как животное естественным образом реагирует на раздражители (Ramdya et al. , 2017). Таким образом, это основное ограничение универсальности CaMPARI для выявления схем, участвующих в естественном поведении и в крупномасштабных экспериментах с количеством мух, используемых в каждом эксперименте, что исключает огромное преимущество системы Drosophila .

Здесь мы предлагаем установку, в которой используются недорогие и часто используемые материалы, чтобы использовать существующие запасы мух CaMPARI для маркировки активации нейронов у свободно перемещающихся особей или групп мух. Это включает в себя использование стандартных чашек Петри с пассивным увлажнением и серию светодиодов с длиной волны 405 нм, которые позволяют проводить фотопреобразование CaMPARI в свободно передвигающихся интактных взрослых мухах. С помощью этой установки мы демонстрируем, что фотопреобразование определенных нейронных цепей возможно у нескольких наборов плодовых мушек одновременно. Мы предоставляем количественную фотоконверсию обонятельных клубочков, которые, как известно, активируются при воздействии кислот (Ai et al. , 2010) в качестве доказательства того, что этот метод позволяет проводить количественную значительную фотоконверсию через неповрежденную головную кутикулу свободно движущейся взрослой мухи. Поскольку этот метод можно масштабировать до любого размера группы, мы предлагаем, чтобы CaMPARI в Дрозофила легко адаптируется для крупномасштабного генетического скрининга и/или обнаружения и картирования новых цепей, которые активируются выбранным исследователем стимулом.

Преимущество этого метода заключается в фотопреобразовании CaMPARI, экспрессируемого в мозгу нескольких мух одновременно, что позволяет в полной мере использовать двигательное и исследовательское поведение мухи, включая социальное и групповое поведение. Мы предполагаем, что этот подход будет полезен при изучении экологически значимого поведения, нейрогенетических факторов и цепей, управляющих таким поведением.

Приклады для мух

UAS-CaMPARI-GAL4 . ш[*]; P{y[+mDint2] w[+mC] = UAS-CaMPARI}attP40; PBac{y[+mDint2] w[+mC] = GMR57C10-GAL4}VK00040 PBac{GMR57C10-GAL4}VK00020 (Bloomington Drosophila Stock Center, каталожный номер: 58763).

UAS-CAMPARI . ш[*]; P{y[+t7.7] w[+mC] = UAS-CaMPARI}attP40 (Bloomington Drosophila Stock Center, каталожный номер 58761).

Ir64a-GAL4 . ш[*]; P{w[+mC] = Ir64a-GAL4.A}183,8; TM2/TM6B, Tb (Блумингтон Drosophila Stock Center, каталожный номер 41732).

Ir64a РНКи . w1118; P{GD2314}v9011 (Вена Drosophila Resource Center, каталожный номер 9011).

Крестовины Fly

UAS-CAMPARI x Ir64a-GAL4 . 10 девственниц, ж[*]; P{y[+t7.7] w[+mC] = UAS-CaMPARI}attP40, скрещенный с 5 самцами w[*]; P{w[+mC] = Ir64a-GAL4.A}183,8; TM2/TM6B, Tb[1].

UAS-CaMPARI-GAL4 × Ir64a-RNAi (нокдаун Ir64a в нейронах nSyb). Десять девственниц w[*]; P{y[+mDint2] w[+mC] = UAS-CaMPARI}attP40; PBac{y[+mDint2] w[+mC] = GMR57C10-GAL4}VK00040 PBac{GMR57C10-GAL4}VK00020, скрещенный с пятью самцами w1118; P{GD2314}v9011.

Растворы

5% (об. /об.) Уксусная кислота . Пять миллилитров ледяной уксусной кислоты (уксусная кислота Fisher Chemical, серия Glacial № 185624), разбавленная до 100 мл с помощью H 2 O. Для нейтрализации уксусной кислоты нейтрализуют до pH = 7 с помощью гранул гидроксида натрия (Thermo Fisher Scientific, партия № 115786).

Яблочный уксус . Куплен в местном супермаркете. Для нейтрализованного яблочного уксуса, нейтрализованного до pH = 7 гранулами гидроксида натрия (Thermo Fisher Scientific Lot # 115786).

Фосфатно-солевой буфер (PBS) . 80 г хлорида натрия (NaCl; EMD Chemicals SX0420-1, лот № UG25BZEMS), 2 г хлорида калия (KCl; Thermo Fisher Scientific P217-500, лот № 117211), 14,4 г фосфата натрия, двухосновного безводного (Na 2 HPO 4 ; Fisher Chemical S374-500, лот № 151771), 2,4 г одноосновного фосфата калия (KH 2 PO 4 ; EMD Chemicals PX1565-1, лот № 2011061522), разбавленный до 1 л с помощью H 2, автоклавированием до получения 10-кратного раствора. 1× PBS получают путем разбавления 100 мл 10× PBS до 1 л с помощью H 2 O.

PBT (PBS + 0,1% Triton-X 100) . Сто миллилитров 10× PBS и 10 мл Triton-X 100 (Sigma-Aldrich Lot# MKBW8386V), разбавленных до 1 л с помощью H 2 O.

4% формальдегида в PBT . Два миллилитра 16% раствора формальдегида (масса/объем), не содержащего метанола (Thermo Fisher Scientific Lot # UC2742481) и 6 мл PBT.

Монтажный материал Vectashield Antifade (Vectashield, партия № ZC0829).

Оборудование для фотопреобразования

Sanworks Pulse Pal v2 (Sanders and Kepecs, 2014; можно заменить любым генератором импульсов).

     Светодиоды 405 нм (Thorlabs M405L3).

     Коллимационные ошейники (Thorlabs SM1P25-A).

     Контроллер тока (драйвер светодиодов Thorlabs T-cube LEDD1B).

     Переходная пластина для регуляторов тока (KAP101).

     Блок питания для контроллеров тока (Thorlabs KCH601).

     Консоль аналогового портативного измерителя мощности (Thorlabs PM100A).

     Стандартный фотодиодный датчик для 400–1100 нм (SC121C).

Программное обеспечение

Zeiss Zen Black 2.3.

     Фиджи (Schindelin et al., 2012).

     Graphpad Prism 8.3.0.

Прочие

Чашки Петри (35 × 10 мм; Falcon 351007).

     42 Беззольная фильтровальная бумага (диаметр 70 мм; GE Healthcare Whatman 1442-070, лот № 16946862).

     Распечатанные 10-луночные предметные стекла с диаметром лунок 6 мм из «ПТФЭ» (Электронная микроскопия наук 63434-06, лот № 171020).

     20 × 50 мм Покровные стекла № 1 1/2 (VWR 48393 194).

Процедуры

(A)
Дрозофилы Культуры, манипуляции с животными и генетические скрещивания

Примечание: Drosophila melanogaster использовали для всех описанных экспериментов, а условия культивирования использовали, как описано ниже. Одним заметным исключением из стандартных манипуляций с мухами было использование льда для анестезии взрослых особей вместо обычного увлажненного углекислого газа (CO 2 ). Это было особенно важно для взрослых мух, которых впоследствии использовали в экспериментах по фотоконверсии. Воздействие CO 2 нейротоксичен и может активировать обонятельные и кислоточувствительные нейроны, а также, возможно, вызывать стрессовую реакцию (Suh et al., 2004; Ai et al., 2010). Однако CO 2 по-прежнему используется для стандартного обслуживания мух.

  • (1)

    Культуры дрозофилы выращивали на стандартной среде из кукурузной муки и мелассы в пластиковых бутылках (Genesse, каталожный номер 32–130) при 22°C, влажности ~40% и 12 ч в темноте/12 ч — световой цикл.

  • (2)

    Генетические скрещивания были необходимы для получения некоторых представляющих интерес генотипов, например, когда CaMPARI экспрессировался в определенных областях мозга или когда в дополнение к CaMPARI экспрессировалась короткошпилечная РНК (shRNA). Как правило, 10 девственных самок через 4–6 дней после вылупления (dpe) скрещивали с пятью самцами и помещали в 22-миллиметровый пищевой флакон (Genesee, каталожный номер 32–116). Взрослых родителей выбрасывали через 4–7 дней или переносили в пузырек со свежим кормом для продолжения кладки яиц. Контроль количества самок и количества дней, в течение которых самкам разрешено откладывать яйца, гарантирует, что потомство не будет переполнено, что обеспечит максимальную согласованность доступа к питанию во время развития и размер тела и тканей взрослого человека. Взрослое потомство собирали для фотоконверсии через 14–18 дней после начала первоначального скрещивания.

  • Первичных мух UAS-CAMPARI скрещивали с мухами Ir64a-GAL4 на 4-й дпе, потомство собирали на 1-2-й дпе и выделяли в группы из пяти самок и трех самцов при 25°C.

  • Паннейрональные экспрессирующие мухи CaMPARI были собраны через 1–2 дн и изолированы группами по пять самок и трех самцов при 25°C. Поскольку этот генотип поддерживался как стабильный поголовье, не было необходимости проводить генетическое скрещивание.

  • Для получения взрослых мух, экспрессирующих CaMPARI и Ir64a-RNAi в нейронах, экспрессирующих nSyb, 10 девственных самок скрещивали с пятью самцами UAS-Ir64a-RNAi, потомство собирали через 1–2 дн и выделяли в группы по пять самок и три самцы при 25°С.

(B) Установка фотопреобразования (Продолжительность: 1 день)

Установка может быть изменена в соответствии с потребностями исследователя/эксперимента. На рисунке показана наша установка из 16 светодиодов (Thorlabs M405L3) с коллимационными ошейниками (Thorlabs SM1P25-A), отрегулированными в соответствии с площадью чашек Петри. Каждый светодиод подключен к контроллеру тока (Torlabs T-Cube LED Driver LEDD1B), где можно регулировать мощность светодиода через ток, а мощность можно измерить для каждого светодиода с помощью измерителя оптической мощности (Thorlabs PM100A) и стандартного фотодиодного датчика (SC121C). Регуляторы тока могут получать питание по отдельности, но в данном случае они питаются от источника питания (KCH601) с пластиной адаптера (KAP101). Каждый контроллер тока подключается к генератору импульсов (Sanworks Pulse Pal v2) с помощью стандартных кабелей BNC-гнездо BNC-гнездо.

Открыть в отдельном окне

Настройка фотоконверсии. Вид установки, используемой для индуцирования фотоконверсии у свободно движущихся мух. (A) Sanworks Pulse Pal v2 используется для управления циклом включения/выключения светодиода. (B) Генераторы импульсов подключены к контроллерам тока (Thor Labs M00420201). Ручки регуляторов тока используются для установки мощности светодиода. (C) Свет светодиодов с длиной волны 405 нм (Thor Labs M405L3) рассеивается с помощью коллимационных ошейников (Thor Labs SM1P25-A), установленных в соответствии с площадью посуды. (D,E) Чашки Петри готовятся с увлажненной фильтровальной бумагой и могут содержать отдельные или наборы взрослых особей Дрозофила , которая находится под светодиодами.

PulsePal можно запрограммировать на управление циклом включения/выключения светодиодов. PulsePal имеет четыре «выходных канала», которые можно запрограммировать отдельно и запускать одновременно, связывая их с одним и тем же каналом запуска.

(C) Фотоконверсия мух (продолжительность: 1 час)
  • (1)

    Подготовьте чашки Петри, в которые будут помещены мухи во время фотоконверсии. Обрежьте беззольную фильтровальную бумагу, обрезав ее до размера чашки Петри. Смочите фильтровальную бумагу пипеткой прямо на бумаге 150 мкл PBS или других растворов, которые будут использоваться в качестве стимулов. Капли должны быть распределены равномерно, чтобы вся фильтровальная бумага была увлажнена. Бумагу следует прижать к дну посуды, чтобы мухи не могли попасть в щели под бумагой. PBS можно заменить растворами, которые будут использоваться в качестве раздражителей. Здесь в качестве экспериментальных условий мы использовали 5% растворы уксусной кислоты и яблочного уксуса вместо PBS.

    Критический шаг: Необходимо ввести в блюдо раствор для контроля влажности внутри блюда. Без добавления раствора мухи могут перегреться и высохнуть, убивая их во время фотоконверсии.

  • (2)

    Поместите флаконы с мухами на лед на 20 мин. Флаконы частично погружают в ведро со льдом.

    Примечание: Определенные этапы анестезии могут вызывать нейронную активацию, как описано выше.

  • (3)

    Откалибруйте мощность светодиода, регулируя шкалу контроллера тока с помощью измерителя мощности. В этом исследовании мы использовали мощность 75 мВт/см 2 ± 0,5 мВт/см 2 .

    Примечание. Мощность светодиода может потребоваться отрегулировать для более глубоких областей мозга или нейронов с менее частыми импульсами.

  • (4)

    Настройка генератора импульсов (). Pulse Pal был запрограммирован на подачу монофазных импульсов 5 В каждые 500 мс с рабочим циклом 200 мс, пока не будет прерван вручную.

    Примечание: В нашей установке мы использовали оборудование с открытым исходным кодом, Sanworks Pulse Pal, однако можно использовать любой генератор импульсов, совместимый со светодиодами.

  • (5)

    Из флаконов с анестезированными мухами, которые были помещены на лед, поместите пять взрослых самок и трех взрослых самцов (4–6 dpe) в каждую чашку, приготовленную на шаге 1, и закройте каждую чашку крышками.

    Критический шаг: Подождите, пока мухи начнут активно двигаться самостоятельно, прежде чем переходить к следующему шагу. Это гарантирует, что они полностью оправились от анестезии.

  • (6)

    Поместите светодиоды на посуду и установите для PulsePal/генератора импульсов значение «Непрерывно». Позвольте программе продолжаться в течение 30 минут или желаемого времени.

  • (7)

    Приготовьте фиксирующие реагенты (4% формальдегид в ПБТ) и распределите аликвотами по 800 мкл в 1,5 микроцентрифужных пробирках.

  • (8)

    Завершить протокол фотопреобразования. Анестезируйте мух, доставив CO 2 в пространство между блюдом и крышкой с помощью шприца. Перенесите целых мух прямо в пробирки объемом 1,5 мл, содержащие фиксирующий раствор. Открутите пробирки с мухами в центрифуге в течение 5 мин при 13 000 об/мин. Хранить мух в фиксирующем растворе при 4°С в течение 14–18 ч.

    Примечание: Мухи должны быть защищены от света.

    Примечание: В качестве альтернативы фиксация не требуется, поскольку ткань можно визуализировать вживую или расчленить, а затем зафиксировать. CaMPARI чувствителен к фиксации, поэтому сигнал, особенно красный сигнал, скомпрометирован (Fosque et al., 2015). Имейте в виду, что скорость оборота фотоконвертированного CaMPARI, которая составляет ~ 5 ч, при выполнении живых изображений или вскрытий. Недавно было разработано антитело, которое специфически связывает красный CaMPARI, которое можно использовать для усиления сигнала (Moeyaert et al., 2018).

(D) Препарирование головного мозга и подготовка образцов тканей (продолжительность: 2 ч) стеклянная точечная пластина.

  • (2)

    Препарированный мозг промывают трижды в течение 10 мин, пипетируя по 150 мкл ПБТ в каждую лунку, содержащую ткань.

  • (3)

    Препарированный мозг промывают четыре раза в течение 5 мин, внося пипеткой по 150 мкл PBS в каждую лунку, содержащую ткань.

  • (4)

    Нанесите Vectashield Antifade Mounting Medium в каждую лунку предметного стекла в количестве, достаточном для заполнения лунки.

  • (5)

    Осторожно перенесите препарированный мозг в лунки предметного стекла. В каждой лунке должно быть не более трех мозгов.

    Критический шаг: Мозги должны быть ориентированы так, чтобы область интереса находилась ближе всего к покровному стеклу, чтобы предотвратить рассеивание света через ткани и получить изображения с более высоким разрешением.

  • (6)

    Поместите ткань мозга на предметные стекла с помощью Vectashield Antifade Mounting Medium.

    Примечание: Эта монтажная среда остается жидкой на предметном стекле, и рекомендуется герметизировать предметное стекло.

  • (E) Визуализация (продолжительность: 2–8 ч)

    Изображения были получены с использованием микроскопа Zeiss LSM 880 и программного обеспечения Zeiss Zen Black 2. 3 с использованием 20-кратного план-апохроматического (0,8 NA) объектива. Лазерные линии 488 нм и 561 нм использовались для освещения и GaAsP-детектор для визуализации. Было собрано 1024 × 1024 изображения с задержкой пикселя 1,02 мкс и глубиной 16 бит. Z-стеки были собраны на уровне 0,9Шаг 7 мкм.

    (F) Анализ изображения (продолжительность: 2–6 ч)
    • (1)

      Для каждого образца определите срезы, содержащие области интереса, используя Фиджи.

    • (2)

      Объедините срезы и сверните в одно изображение, используя проекцию средней интенсивности (AIP; ).

      Открыть в отдельном окне

      Анализ изображений мух, экспрессирующих CaMPARI. (A) Схема головы Drosophila с маркировкой лопасти усика и клубочков лопасти усика в интересующей области (ROI). Кислотно-чувствительные клубочки (DC4 и DP1 m) отмечены красным цветом. (B) Репрезентативная проекция максимальной интенсивности (MIP) головного мозга взрослой мухи, экспрессирующей CaMPARI, паннейронно подвергалась воздействию 5% уксусной кислоты при pH = 2 в течение 30 минут и визуализировалась при 20-кратном увеличении. Квадрат с белыми точками указывает на одну вздутую вправо долю антенны, демонстрирующую фотоконверсию клубочка DC4. Клубочек DM1 используется в качестве ориентира для поиска клубочка DC4. (C,D) Репрезентативные изображения в проекции средней интенсивности (AIP) мозга взрослых мух, экспрессирующих CaMPARI, в экспрессирующих Ir64a нейронах, подвергшихся воздействию 5% уксусной кислоты (AA) при pH = 2, (C) или pH = 7 (D) в течение 30 мин и изображение с 20-кратным увеличением. Область интереса была нарисована вокруг клубочков DC4 в зеленом канале (DC4), а затем скопирована и перемещена на фон (bgrd), чтобы вычесть из фона среднюю интенсивность зеленого в клубочках DC4. Та же пара областей интереса была скопирована в красный канал, чтобы получить среднюю интенсивность красного цвета за вычетом фона. Затем соотношение было получено путем деления интенсивности красного на интенсивность зеленого, как показано справа. Фотопреобразование видно в красном канале на панели 9. 0049 (B) , когда pH = 2, но не на панели (C) , когда pH = 7. Усики увеличены на панелях (E, F) , как обозначено белым пунктирным прямоугольником. (E,F) Репрезентативные изображения в проекции максимальной интенсивности (MIP) лопастей усиков взрослой мухи, экспрессирующих CaMPARI, в экспрессирующих Ir64a нейронах, подвергшихся воздействию 5% АК при pH = 2 (E) или pH = 7 (F) на 30 мин. (G) Соотношение красного и зеленого у мух, подвергшихся воздействию АК при pH = 2 и pH = 7 в течение 30 мин. Мухи, подвергшиеся воздействию АК, рН = 2 ( n = 21) имеют в 1,6 раза большую фотоконверсию по сравнению с мухами, подвергшимися воздействию АК при pH = 7 ( n = 19). ** P = 0,0064, Манн-Уитни U -тест.

    • (3)

      Используйте «инструмент многоугольника», чтобы проследить ROI в AIP в зеленом канале, как в «DC4» в .

    • (4)

      Скопируйте ROI и переместите в область за пределами изображаемого мозга, как в «bgrd» в . Эта область интереса будет использоваться для вычитания фона в зеленом канале.

    • (5)

      Скопируйте те же ROI в AIP красного канала.

    • (6)

      Используйте функцию «Измерение» для расчета средней интенсивности каждой области интереса.

    • (7)

      Вычтите фоновую флуоресценцию из каждой области интереса. Например, средняя интенсивность ROI «bgrd» вычитается из средней интенсивности ROI «DC4».

    • (8)

      Разделите флуоресценцию красного канала с вычетом фона на флуоресценцию зеленого канала с вычетом фона, чтобы определить соотношение.

    • (9)

      Повторите шаги 3–8 для любых дополнительных областей интереса в мозгу.

    • (10)

      Соотношения красного:зеленого нормализовали к соотношению изображений мух, подвергшихся воздействию растворов с pH = 7, путем группирования мух, которые подверглись фотоконверсии одновременно.

      Критический шаг: Важно сравнивать только изображения, сделанные в один и тот же день, чтобы избежать пакетного эффекта. Мощность лазера микроскопа может меняться изо дня в день и влиять на количественную оценку изображений.

    (G) Статистика

    Все данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Сравнения между двумя группами были выполнены с использованием U-критерия Манна-Уитни в Graphpad Prism 8.3.0.

    Воздействие уксусной кислоты приводит к специфической фотоконверсии клубочков DC4 у мух, экспрессирующих CaMPARI, в нейронах, экспрессирующих Ir64a мух с паннейронной экспрессией CaMPARI до 5% уксусной кислоты (АК; рН = 2). Ранее было показано, что Ir64a-экспрессирующие нейроны клубочка DC4 (8) специфически активируются кислотами (Ai et al., 2010). Взрослых интактных свободно движущихся мух подвергали воздействию 5% АК, рН = 2, в течение 30 минут, а также подвергали воздействию фотопреобразующего света (405 нм; 500 мс при включении, 200 мс при выключении). Это привело к фотоконвертированной области внутри каждой антенной доли, совместимой с клубочком DC4 (10).

    Чтобы подтвердить, что эта фотопреобразованная область специфична для чувствительных к кислоте нейронов клубочка DC4, мы ограничили экспрессию CaMPARI клубочком DC4, управляя экспрессией CaMPARI с драйвером Ir64a GAL4 (). Интактные, свободно передвигающиеся взрослые мухи подвергались воздействию 5% АК (рН = 2) или нейтрализованного 5% АК (рН = 7) в течение 30 мин при одновременном воздействии фотопреобразующего света. Изображения проекции средней интенсивности (AIP) полного мозга мухи показаны для 5% AA (pH = 2; ) и 5% AA (pH = 7; ). Как показано в зеленом канале, экспрессия CaMPARI ограничена клубочком DC4. Сигнал фотопреобразованного CaMPARI присутствует для 5% АК (pH = 2), но не при нейтрализации уксусной кислоты. Проекция максимальной интенсивности (MIP) одной антенной доли, обозначенная белым пунктиром на рисунке, показана как для 5% АК (pH = 2; ), так и для нейтрализованной АК (pH = 7; ). Эти результаты подтверждают, что фотоконверсия CaMPARI у интактных, свободно передвигающихся взрослых мух, подвергшихся воздействию уксусной кислоты, специфична для клубочков DC4.

    Фотоконверсия CaMPARI может быть определена количественно у свободно движущихся интактных взрослых мух отношение интенсивности CaMPARI в красном канале к интенсивности CaMPARI в зеленом канале. Мы количественно определили соотношение красного и зеленого на изображениях в проекции средней интенсивности (AIP) свободно движущихся интактных взрослых мух, экспрессирующих CaMPARI, в экспрессирующих Ir64a нейронах, подвергнутых воздействию 5% уксусной кислоты (АК; рН = 2; ) или нейтрализованных 5% АК (рН = 7; ). Пять групп из 3–5 мух подвергали воздействию уксусной кислоты или нейтрализованной уксусной кислоты в течение 30 минут при одновременном воздействии фотопреобразующего света (405 нм; 500 мс при включении, 200 мс при выключении). Сразу после фотоконверсии мух фиксировали в течение ночи в 4% формальдегиде в PBS + 0,1% TritonX-100. У самок мух вырезали мозг, помещали на предметные стекла и визуализировали с помощью лазерной сканирующей конфокальной микроскопии.

    Изображения AIP были созданы с помощью Фиджи с использованием Z-проекта для всех срезов, содержащих экспрессию CaMPARI. «Инструмент многоугольника» использовался для рисования области интереса (ROI) вокруг каждого клубочка в зеленом канале, как показано на («DC4»). Эти ROI были сохранены в ROI Manager на Фиджи, затем каждая ROI была скопирована и перемещена в область за пределами мозга мухи для сбора фонового измерения («bgrd») для зеленого канала. Затем все четыре из этих ROI были скопированы в красный канал. Затем отношение рассчитывалось как интенсивность «DC4» красного канала минус интенсивность «bgrd» красного канала, деленная на интенсивность «DC4» зеленого канала минус интенсивность зеленого канала «bgrd». Это привело к двум соотношениям для мозга каждой мухи: одно для правых клубочков «DC4» и второе для левых. Поскольку эти отношения всегда были сопоставимы, они были усреднены, чтобы дать единую датум для каждого мозга мухи (дополнительный рисунок S1). Каждое соотношение затем нормализовали к среднему соотношению мух, подвергшихся воздействию 5% АК (pH = 7) для каждой группы, которая была фотопреобразована и визуализирована в один и тот же день, чтобы свести к минимуму эффекты партии. Мы обнаружили, что мухи при воздействии 5% АК (pH = 2; n = 19 отдельных мух) имели 1,6-кратную фотоконверсию по сравнению с мухами, подвергшимися воздействию 5% АК (pH = 7; n = 21 особь мух) в клубочке DC4 ().

    Чтобы подтвердить, что измерения, сделанные на изображениях AIP, точно отражают каждый срез области интереса, области исследования были построены для каждого среза и усреднены вместе. Несмотря на изменение площади ROI на отдельных срезах, эти отношения существенно не отличались от соотношений, измеренных на изображениях AIP (дополнительный рисунок S2), поэтому мы продолжали использовать только изображения AIP для количественной оценки фотоконверсии. Эти результаты подтверждают, что мы можем использовать изображения AIP для количественной оценки коэффициента фотоконверсии ROI в мозгу мухи, когда CaMPARI фотоконвертируется в свободно движущейся интактной взрослой мухе.

    Фотоконверсия CaMPARI сравнительно количественно определяется у свободно движущихся интактных мух, экспрессирующих паннейрональный CaMPARI быть более полезным для количественной оценки CaMPARI, когда он экспрессируется паннейронно.

    Мы хотели подтвердить, что отношения, рассчитанные по изображениям AIP для паннейронно экспрессированного CaMPARI, будут сравнимы с отношениями, которые мы рассчитали, когда экспрессия CaMPARI была ограничена нейронами, экспрессирующими Ir64a. Синаптобревин (nSyb) представляет собой пресинаптический белок, и экспрессия CaMPARI с драйвером nSyb GAL4 позволяет экспрессировать CaMPARI во всех нейронах, экспрессирующих nSyb, не ограничивая экспрессию пресинаптическими окончаниями. Пять наборов из трех-пяти мух, экспрессирующих CaMPARI, управляемых драйвером nSyb GAL4, подвергались воздействию 5% уксусной кислоты или нейтрализованной 5% уксусной кислоты в течение 30 минут при одновременном воздействии фотопреобразующего света (405 нм; 500 мс вкл., 200 мс выкл.). ), и их мозг препарировали и визуализировали, как описано выше. Изображения проекции максимальной интенсивности (MIP) одной доли антенны показаны для мух, подвергшихся воздействию либо 5% AA (pH = 2; ), либо нейтрализованного 5% AA (pH = 7; ). Соотношения рассчитывали из изображений AIP, как описано выше, и путем идентификации сначала клубочка DM1 на медиальном крае антенной доли и отслеживания клубочка DC4, прилегающего к нему (). Мы обнаружили свободно передвигающихся интактных взрослых мух с пан-нейрональной экспрессией CaMPARI, подвергшихся воздействию 5% АК (pH = 2; n = 20 отдельных мух) имели 1,6-кратную фотоконверсию по сравнению с мухами, подвергшимися воздействию 5% АК (pH = 7; n = 20 отдельных мух) в клубочках DC4 (), такая же кратность фотоконверсии, как показано у мух, экспрессирующих CaMPARI в нейронах, экспрессирующих Ir64a. Это предполагает, что сравнимые коэффициенты фотоконверсии могут быть рассчитаны либо для подмножества нейронов, экспрессирующих CaMPARI, либо для всех нейронов, экспрессирующих CaMPARI.

    Открыть в отдельном окне

    Мухи с паннейрональной экспрессией CaMPARI имеют сопоставимую измеримую фотоконверсию у мух, подвергшихся воздействию уксусной кислоты. (A,B) Репрезентативные MIP-изображения доли усика взрослой мухи, экспрессирующей CaMPARI, в нейронах, экспрессирующих nSyb, подвергшихся воздействию 5% уксусной кислоты (АК) при pH = 2 (A) или pH = 7 (B) для 30 минут. Фотоконверсия видна в красном канале на панели (A) при pH = 2, но не на панели (B) при pH = 7. (C, D) Репрезентативные MIP-изображения доли усика взрослой мухи, экспрессирующей CaMPARI. и РНКи Ir64a в экспрессирующих nSyb нейронах, подвергшихся воздействию 5% АК при рН = 2,9.0049 (C) или pH = 7 (D) в течение 30 мин. Фотоконверсия не видна в красном канале при pH = 2 (C) или pH = 7 (D) . (E) Соотношение красного и зеленого у мух, подвергшихся воздействию АК при pH = 2 и pH = 7 в течение 30 мин. У мух, подвергшихся воздействию АК с рН = 2 ( n = 20), фотоконверсия была в 1,6 раза выше, чем у мух, подвергшихся воздействию АК с рН = 7 ( n = 20). **** P < 0,0001, тест Манна-Уитни U . (F) Соотношение красного и зеленого у мух, подвергшихся воздействию АК при pH = 2 и pH = 7 в течение 30 мин. Мухи, подвергшиеся воздействию АК, рН = 2 ( n = 14) имеют в 1,3 раза большую фотоконверсию по сравнению с мухами, подвергшимися воздействию АК pH = 7 ( n = 15). * P = 0,0151, Манн-Уитни U -критерий.

    Мы хотели оценить, как протокол фиксации влияет на коэффициент фотоконверсии, поскольку известно, что фиксация подавляет флуоресценцию красного CaMPARI. Сразу после 30-минутной фотоконверсии три набора из 4–5 мух были подвергнуты анестезии на льду, а мозг был рассечен и помещен на предметные стекла с помощью Vectashield, а затем визуализирован, как описано выше. Соотношения рассчитывались по изображениям AIP, как описано выше. Каждое соотношение затем нормализовали к среднему соотношению мух, подвергшихся воздействию 5% АК (pH = 7) для каждой группы, которая была фотопреобразована и визуализирована в один и тот же день, чтобы свести к минимуму эффекты партии. Мы обнаружили, что мухи при воздействии 5% АК (pH = 2; n = 14 отдельных мух) имели 1,4-кратную фотоконверсию по сравнению с мухами, подвергшимися воздействию 5% АК (pH = 7; n = 15 отдельных мух) в клубочке DC4 (дополнительная фигура S3). В то время как визуализация живой ткани, по-видимому, увеличивала флуоресценцию красного CaMPARI, она также увеличивала флуоресценцию зеленого CaMPARI, что приводило к уменьшению соотношения. Соотношения между этими двумя методами сопоставимы, поэтому можно использовать любой метод.

    Мы также хотели оценить количество времени фотоконверсии мозга. Помимо 30 мин, мы фотоконвертировали 5 мин или 15 мин. Соотношения рассчитывались по изображениям AIP, как описано выше. Мы обнаружили, что мухи при воздействии 5% АК (pH = 2) в течение 5 мин ( n = 23 отдельных мухи) имели 0,8-кратную фотоконверсию по сравнению с мухами, подвергшимися воздействию 5% AA (pH = 7; n = 22 отдельных мух) в клубочке DC4 (дополнительная фигура S4). У мух, подвергшихся воздействию 5% АК (pH = 2) в течение 15 мин ( n = 23 отдельных мух), наблюдалась 1,3-кратная фотоконверсия по сравнению с мухами, подвергшимися воздействию 5% АК (pH = 7; n = 20 отдельных мух). . Фотопреобразование в течение 30 минут имело самый высокий коэффициент, поэтому мы продолжали использовать это время для всех экспериментов.

    Для дальнейшего подтверждения специфичности фотоконверсии у мух, экспрессирующих паннейрональный CaMPARI, этих мух скрещивали с линией, способной экспрессировать кшРНК, направленную на мРНК Ir64a, таким образом запуская РНК-интерференцию (РНКи), чтобы вызвать нокдаун чувствительной к кислоте Рецептор Ir64a. Три группы из четырех-пяти мух подвергали воздействию 5% уксусной кислоты или нейтрализованной 5% уксусной кислоты в течение 30 минут при одновременном воздействии фотопреобразующего света (405 нм; 500 мс включено, 200 мс выключено). Затем мозг препарировали и визуализировали, как описано выше. Соотношения рассчитывались по изображениям AIP, как описано выше. Мы обнаружили, что свободно передвигающиеся интактные взрослые мухи с паннейрональной экспрессией CaMPARI и Ir64a RNAi, подвергнутые воздействию 5% АК (pH = 2; n = 14 отдельных мух; ) имели 1,3-кратную фотоконверсию по сравнению с мухами, подвергшимися воздействию 5% АК (pH = 7; n = 15 отдельных мух; ) в клубочке DC4 (). Даже при нокдауне Ir64a количество фотоконверсии у мух, подвергшихся воздействию 5% АК (pH = 2), по-прежнему значительно увеличивается по сравнению с мухами, подвергшимися воздействию нейтрализованной АК, однако количество фотоконверсии снижается на 50% по сравнению с мухами, не экспрессирующими РНКи Ir64a. Вероятно, это связано с неполным нокдауном рецептора. Тем не менее, это снижение фотоконверсии предполагает, что фотоконверсия, наблюдаемая при воздействии на мух 5% АК (pH = 2), специфична для активации нейронов, экспрессирующих рецептор Ir64a.

    Воздействие яблочного уксуса приводит к специфической фотоконверсии клубочков DC4 у мух, экспрессирующих CaMPARI

    Затем мы хотели сравнить фотоконверсию, которую мы продемонстрировали с 5% уксусной кислотой, с аналогичным физиологически значимым стимулом, яблочным уксусом, который обычно привлекательна для Drosophila melanogaster . Пять-шесть наборов из трех-пяти мух, экспрессирующих CaMPARI, управляемых драйвером синаптобревина (nSyb) GAL4 или драйвером Ir64a GAL4, подвергали воздействию яблочного уксуса (ACV) или нейтрализованного ACV в течение 30 минут при одновременном воздействии фотопреобразующего света (405 нм; 500 мс включено, 200 мс выключено), и их мозг препарировали и визуализировали, как описано выше. Изображения проекции максимальной интенсивности (MIP) одной доли антенны показаны для мух, подвергшихся воздействию либо 5% AA (pH = 2; ), либо нейтрализованного 5% AA (pH = 7; ). Соотношения рассчитывались по изображениям AIP, как описано выше. Мы обнаружили, что свободно передвигающиеся интактные взрослые мухи с паннейронной экспрессией CaMPARI, подвергшиеся воздействию ACV (pH = 2; n = 27 отдельных мух) имели 2,1-кратную фотоконверсию по сравнению с мухами, подвергшимися воздействию нейтрализованного ACV (pH = 7; n = 21 особь мух) в клубочке DC4 (). Точно так же мухи, экспрессирующие CaMPARI специфически в экспрессирующих Ir64a нейронах, подвергшихся воздействию ACV (pH = 2; n = 19 особей), имели 3,1-кратную фотоконверсию по сравнению с мухами, подвергшимися воздействию нейтрализованного ACV (pH = 7; n = 18 особей). летит; ).

    Открыть в отдельном окне

    У мух, экспрессирующих CaMPARI, наблюдается измеримая фотоконверсия при воздействии яблочного уксуса. (A,B) Репрезентативные изображения в проекции максимальной интенсивности (MIP) доли усика взрослой мухи, экспрессирующей CaMPARI, в нейронах, экспрессирующих nSyb, подвергшихся воздействию 5% яблочного уксуса (ACV) при pH = 2 (A) или pH = 7 (B) на 30 мин. Фотоконверсия присутствует в нейронах, экспрессирующих Ir64a, на панели (A) при pH = 2, однако заметной фотоконверсии не наблюдается на панели (B) при pH = 7. (C, D) Репрезентативный MIP изображения доли усика взрослой мухи, экспрессирующей CaMPARI, в экспрессирующих Ir64a нейронах, подвергшихся воздействию 5% ACV при pH = 2, (C) или pH = 7 (D) в течение 30 мин. Фотоконверсия видна в красном канале на панели (C) при pH = 2, но не на панели (D) при pH = 7. (E) 2 и рН = 7 в течение 30 мин. У мух, подвергшихся воздействию ACV pH = 2 ( n = 27), фотоконверсия была в 2,1 раза выше, чем у мух, подвергшихся воздействию ACV pH = 7 ( n = 21). **** P < 0,0001, тест Манна-Уитни U . (F) Соотношение красного и зеленого у мух, подвергшихся воздействию ACV при pH = 2 и pH = 7 в течение 30 мин. У мух, подвергшихся воздействию ACV pH = 2 ( n = 27), фотоконверсия в 3,1 раза выше, чем у мух, подвергшихся воздействию ACV pH = 7 ( n = 21). **** P < 0,0001, тест Манна-Уитни U .

    Ранее исследователи использовали промежуточно-ранние гены (IEGs) у млекопитающих, такие как Arc (Link et al., 1995; Guzowski et al., 1999) и cFos (Cole et al., 1989), в качестве косвенного показателя активности нейронов. активации, однако использование ИЭГ ограничено временным характером их экспрессии и отсутствием временного разрешения (Fields et al., 19).97). У Drosophila многие IEGs не законсервированы, и использование IEGs было ограничено оценкой экспрессии Hr38 (Fujita et al., 2013; Adhikari et al., 2019). Обонятельные клубочки ранее были картированы у свободно передвигающихся мух с использованием авторадиографии с 2-дезоксиглюкозой (Rodrigues and Buchner, 1984). Этот метод включал инъекцию мух и имел не поддающееся количественной оценке соотношение сигнал-шум, но заложил основу для последующего наблюдения с помощью генетически кодируемых индикаторов кальция (GECI), таких как GCaMP (Riemensperger et al. , 2012). GCaMP является мощным инструментом для визуализации непосредственной активации, но обычно ограничивает движение организма во время визуализации, а также ограничивает поле зрения во время визуализации. CaMPARI был разработан как решение этих ограничений, однако методы, требующие фиксации взрослой мухи под микроскопом, по-прежнему ограничивают его полезность при изучении сложного поведения взрослых особей.0037 Дрозофила .

    Мы разработали метод отслеживания активных нейронных цепей у свободно передвигающихся интактных взрослых особей дрозофилы . В то время как в предыдущих методах использовался прямой лазерный свет от микроскопов, что требовало иммобилизации мухи (Bohra et al., 2018; Manjila et al., 2019), наш метод с использованием светодиодов и чашек Петри позволяет мухам оставаться подвижными и свободно вести себя и позволяет нам, чтобы захватить активные схемы нескольких мух одновременно. Мы демонстрируем, что этот метод точно повторяет предыдущее исследование (Ai et al. , 2010), демонстрирующее, что воздействие кислот активирует Ir64a-экспрессирующие нейроны клубочка DC4 в антенной доле взрослых мух.

    Используя CaMPARI, специфически экспрессируемый в нейронах, экспрессирующих Ir64a, при воздействии на мух уксусной кислотой, мы показали, что мы можем маркировать активные нейроны у свободно движущихся взрослых мух и количественно определять фотоконверсию в клубочках DC4. Соотношение красного и зеленого у мух, подвергшихся воздействию уксусной кислоты, было значительно выше, чем у мух, подвергшихся воздействию нейтрализованной уксусной кислоты. Кроме того, мы показали, что фотопреобразование между левым и правым полушариями мозга было довольно постоянным, предполагая, что проникновение света от светодиода было равномерно распределено по обеим сторонам головы. Мы смогли повторить эти результаты с экспрессией CaMPARI на всех нейронах. Количественная оценка фотоконверсии у этих мух была эквивалентна фотоконверсии, наблюдаемой, когда экспрессия CaMPARI была ограничена нейронами, экспрессирующими Ir64a. Это указывает на то, что CaMPARI можно использовать количественно, независимо от того, ограничена ли экспрессия CaMPARi подмножествами нейронов или экспрессируется широко. Экспрессия CaMPARI ограничена только силой и специфичностью доступных драйверных линий. Способность точно маркировать активные нейроны паннейронно экспрессирующим CaMPARI позволяет предположить, что CaMPARI можно использовать для маркировки активных цепей даже без априорное знание о том, какие нейроны должны быть активны при воздействии стимула. Таким образом, наш метод позволяет использовать CaMPARI в качестве исследовательского инструмента у свободно движущихся мух для обнаружения новых частей цепи.

    Хотя наши результаты показывают перспективность CaMPARI в качестве исследовательского инструмента для свободно движущихся мух, остаются некоторые предостережения, которые могут быть решены по мере дальнейшего развития инструмента. Например, сигнал красного CaMPARI может быть относительно низким и в некоторых низкоактивных цепях может быть неотличим от фона. Два усовершенствования CaMPARI уже были сделаны для решения этих проблем: (1) улучшенная версия CaMPARI (CaMPARI2), которая улучшает яркость и контрастность красного CaMPARI; и (2) антитело, которое специфически обнаруживает красный хромофор CaMPARI, но не зеленый хромофор (Moeyaert et al., 2018). С помощью этих инструментов CaMPARI свободно диффундирует через цитоплазму, поэтому внутриклеточная информация теряется. Недавно был создан инструмент SynTagMa (Synaptic Tag for Mapping Activity) для маркировки активных синапсов путем слияния CaMPARI с синаптофизином или PSD9.5 и маркировка пресинаптических бутонов и дендритных шипиков соответственно (Perez-Alvarez et al., 2019). Этот инструмент может быть дополнительно адаптирован для более конкретной маркировки схем у взрослых особей Drosophila или любых других видов, для которых трансгенные методы позволяют создавать жизнеспособных трансгенных животных. Кроме того, объединение CaMPARI с другими инструментами оптогенетики позволит отслеживать активные цепи ниже по течению. Например, использование CsChrimson для активации определенного нейрона при одновременном воздействии на пан-нейрональный экспрессированный CaMPARI позволит экспериментатору отслеживать любые нейроны, возбуждаемые нейроном, экспрессирующим CsChrimson.

    Недавно Grover et al. опубликовали другой метод отслеживания нейронной активности свободно движущихся мух. (2020) под названием Flyception2. В этом методе используется установка с зеркальной системой гальванометра, которая позволяет одновременно отслеживать и отображать муху двумя отдельными камерами. Преимущество этой установки заключается в возможности напрямую связать активность с поведением благодаря установке с двумя камерами, но это более сложная установка, которая может быть невозможна во всех лабораториях, и по-прежнему может одновременно оценивать только одну муху. Кроме того, эти мухи требуют удаления кутикулы головы, которую необходимо заменить окном, содержащим световозвращающие бусины, прежде чем станет возможным отслеживание и визуализация, в то время как наш метод позволяет кутикуле головы оставаться неповрежденной. Однако такой метод также может хорошо работать с CaMPARI, поскольку он предназначен для логометрического количественного определения. В то время как Flyception2 позволяет отслеживать поведение при отображении нейронной активности, наш метод не позволяет отслеживать поведение, как он представлен здесь, хотя и очень открыт для модификаций. Тем не менее, наш метод может обнаруживать более широкие изменения в нейронной активности, когда мухе предъявляют стимул и возможность оценивать эти изменения с более высоким разрешением в более поздних изображениях.

    Разработка метода, позволяющего отслеживать активные схемы всего мозга свободно перемещающихся взрослых мух, может позволить использовать CaMPARI беспристрастным и исследовательским образом. Это позволяет изучать различные виды поведения от движения до сенсорной реакции на социальное взаимодействие и за его пределами.

    Наборы данных, созданные для этого исследования, доступны по запросу соответствующему автору.

    KE, MH и GB разработали исследование. К.Э. провел эксперименты и проанализировал данные. KE, MH и GB написали статью. Все авторы прочитали и отредактировали рукопись.

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Мы благодарим Bloomington Drosophila Stock Centre и Венский ресурсный центр Drosophila за их запасы. Мы благодарим Вибхути Рану за внимательное прочтение рукописи, а также Балинта Качоха и Мадху Саданандаппу за полезные комментарии по ходу работы над проектом. Мы также хотели бы поблагодарить Энн Лавануэй и Дартмутского колледжа факультета биологических наук Imaging Facility за использование оборудования и техническую помощь, а также Zdenek Svindrych из Molecular Interactions and Imaging Core за техническую помощь.

    Финансирование. Этот проект был поддержан грантами Медицинской школы Одри и Теодора Гейзелей в Дартмуте, Пионерским грантом Национального института здравоохранения 1DP1Mh210234 (Великобритания), грантом Агентства перспективных исследовательских проектов Министерства обороны США HR0011-15-1-0002 (Великобритания) и Грант Национального института общих медицинских наук GM113132 (MH).

    Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fncir.2020.00022/full#supplementary-material.

    Щелкните здесь, чтобы просмотреть файл с дополнительными данными. (1.5M, docx)

    • Адхикари П., Ороско Д., Рандхава Х., Вольф Ф. В. (2019). Индукция Mef2 непосредственно раннего гена Hr38/Nr4a прерывается с помощью Sirt1, чтобы способствовать толерантности к этанолу. Гены Мозг Поведение. 18:e12486. 10.1111/gbb.12486 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Aharoni D., Hoogland TM (2019). Схемные исследования с помощью миниатюрных микроскопов с открытым исходным кодом: прошлое, настоящее и будущее. Фронт. Клетка. Неврологи. 13:141. 10.3389/fncel.2019.00141 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Ai M., Min S., Grosjean Y., Leblanc C., Bell R., Benton R. и др.. ( 2010). Кислотное восприятие обонятельной системой дрозофилы . Природа 468, 691–695. 10.1038/nature09537 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Барнетт Л. М., Хьюз Т. Е., Дробижев М. (2017). Расшифровка молекулярного механизма, ответственного за Ca 2+ -зависимое изменение флуоресценции GCaMP6m. PLoS Один 12:e0170934. 10.1371/journal.pone.0170934 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Berridge M.J., Lipp P., Bootman M.D. (2000). Универсальность и универсальность передачи сигналов кальция. Нац. Преподобный Мол. Клеточная биол. 1, 11–21. 10.1038/35036035 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Бора А. А., Каллман Б. Р., Рейхерт Х., Виджай Рагхаван К. (2018). Идентификация одной пары интернейронов для обработки горького вкуса в мозге дрозофилы . Курс. биол. 28, 847.e3–858.e3. 10.1016/j.cub.2018.01.084 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Chen T.-W., Wardill T.J., Sun Y., Pulver S.R., Renninger S.L., Baohan A. и др. (2013). Сверхчувствительные флуоресцентные белки для визуализации активности нейронов. Природа 499, 295–300. 10.1038/nature12354 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Cole A.J., Saffen D.W., Baraban J.M., Worley P.F. (1989). Быстрое увеличение РНК-мессенджера ближайшего раннего гена в нейронах гиппокампа за счет активации синаптического рецептора NMDA. Природа 340, 474–476. 10.1038/340474a0 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • де Гроот А., ван ден Бум Б. Дж., ван Гендерен Р. М., Коппенс Дж., ван Вельдхуйзен Дж., Бос Дж. и др. (2020). NINscope, универсальный минископ для исследования цепей в нескольких регионах. электронная жизнь 9:e49987. 10.7554/eLife.49987 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Fields RD, Eshete F., Stevens B., Itoh K. (1997). Зависимая от потенциала действия регуляция экспрессии генов: временная специфичность в Ca 2+ , белки, связывающие цАМФ-чувствительный элемент, и передача сигналов митоген-активируемой протеинкиназы. Дж. Нейроски. 17, 7252–7566. 10.1523/jneurosci. 17-19-07252.1997 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Fosque B.F., Sun Y., Dana H., Yang C.-T., Ohyama T., Tadross M.R., et al.. (2015 ). Маркировка активных нейронных цепей in vivo с помощью разработанных интеграторов кальция. Наука 347, 755–760. 10.1126/science.1260922 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Фудзита Н., Нагата Ю., Нисиучи Т., Сато М., Ивами М., Кия Т. (2013). Визуализация нейронной активности в мозге насекомых с использованием консервативного раннего гена Hr38. Курс. биол. 23, 2063–2070. 10.1016/j.cub.2013.08.051 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Гровер Д., Кацуки Т., Ли Дж., Докинз Т.Дж., Гринспен Р.Дж. (2020). Визуализация активности мозга во время сложного социального поведения у дрозофилы с помощью Flyception2. Нац. коммун. 11:623. 10.1038/s41467-020-14487-7 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Гузовски Дж. Ф., Макнотон Б. Л., Барнс С. А., Уорли П. Ф. (1999). Специфическая для окружающей среды экспрессия непосредственно раннего гена Arc в ансамблях нейронов гиппокампа. Нац. Неврологи. 2, 1120–1124. 10.1038/16046 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Цзя Х., Рошфор Н.Л., Чен С., Коннерт А. (2011). двухфотонная визуализация in vivo сенсорно-вызванных дендритных сигналов кальция в корковых нейронах. Нац. протокол 6, 28–35. 10.1038/nprot.2010.169 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Link W., Konietzko U., Kauselmann G., Krug M., Schwanke B., Frey U., et al.. (1995). Соматодендритная экспрессия непосредственно раннего гена регулируется синаптической активностью. проц. Натл. акад. науч. США 92, 5734–5738. 10.1073/pnas.92.12.5734 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Лоогер Л.Л., Грисбек О. (2012). Генетически закодированные индикаторы нейронной активности. Курс. мнение Нейробиол. 22, 18–23. 10.1016/j.conb.2011.10.024 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Manjila S.B., Kuruvilla M., Ferveur J. -F., Sane S.P., Hasan G. (2019). Длительные приступы полета требуют растормаживания ГАМКергических нейронов грибовидного тела. Курс. биол. 29, 283.e5–293.e5. 10.1016/j.cub.2018.11.070 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Moeyaert B., Holt G., Madangopal R., Perez-Alvarez A., Fearey B.C., Trojanowski N.F., et al.. ( 2018). Улучшенные методы маркировки активных популяций нейронов. Нац. коммун. 9:4440. 10.1038/s41467-018-06935-2 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Палмер А. Э., Цзянь Р. Ю. (2006). Измерение передачи сигналов кальция с использованием генетически настраиваемых флуоресцентных индикаторов. Нац. протокол 1, 1057–1065. 10.1038/nprot.2006.172 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Паредес Р. М., Эцлер Дж. К., Уоттс Л. Т., Чжэн В., Лехлейтер Дж. Д. (2008). Химические индикаторы кальция. Методы 46, 143–151. 10.1016/j.ymeth.2008.09.025 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Патель А. А., Кокс Д. Н. (2017). Поведенческие и функциональные тесты для изучения механизмов обнаружения вредного холода и мультимодальной сенсорной обработки у личинок дрозофилы . био. протокол 7:e2388. 10.21769/BioProtoc.2388 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Perez-Alvarez A., Fearey B.C., O’Toole R.J., Yang W., Arganda-Carreras I., Lamothe-Molina P.J. , и другие. (2019). Визуализация стоп-кадра синаптической активности с использованием SynTagMA. bioRxiv [Препринт]. 10.1101/538041 [CrossRef] [Академия Google]
    • Рамдья П., Шнайдер Дж., Левин Дж. Д. (2017). Нейрогенетика группового поведения Drosophila melanogaster. Дж. Эксп. биол. 220, 35–41. 10.1242/jeb.141457 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Riemensperger T., Pech U., Dipt S., Fiala A. (2012). Оптическая визуализация кальция в нервной системе Drosophila melanogaster. Биохим. Биофиз. Акта 1820, 1169–1178. 10.1016/j.bbagen.2012.02.013 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Родригес В. , Бюхнер Э. (1984). [ 3 H] 2-дезоксиглюкоза картирование вызванной запахом активности нейронов в долях усиков Drosophila melanogaster. Мозг Res. 324, 374–378. 10.1016/0006-8993(84)

      -2 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Sanders J. I., Kepecs A. (2014). Недорогой программируемый генератор импульсов для физиологии и поведения. Фронт. Нейроинж. 7:43. 10.3389/fneng.2014.00043 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Schindelin J., Arganda-Carreras I., Frize E., Kaynig V., Longair M., Pietzsch T., et al .. (2012). Фиджи: платформа с открытым исходным кодом для анализа биологических изображений. Нац. Методы 9, 676–682. 10.1038/nmeth.2019 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Ша Ф., Абдельфаттах А.С., Патель Р., Шрайтер Э.Р. (2019). rsCaMPARI: стираемый маркер активности нейронов. bioRxiv [Препринт]. 10.1101/798298 [CrossRef] [Google Scholar]
    • Suh G.S.B., Wong A.M., Hergarden A.C., Wang JW, Simon A. F., Benzer S., et al.. (2004). Единственная популяция обонятельных сенсорных нейронов опосредует врожденное поведение избегания у Drosophila . Природа 431, 854–859. 10.1038/nature02980 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Sun X. R., Badura A., Pacheco D. A., Lynch L. A., Schneider E. R., Taylor M. P., et al.. (2013). Быстрые GCaMP для улучшенного отслеживания активности нейронов. Нац. коммун. 4:2170. 10.1038/ncomms3170 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Tian L., Hires S.A., Mao T., Huber D., Chiappe M.E., Chalasani S.H., et al.. (2009). Визуализация нейронной активности у червей, мух и мышей с улучшенными показателями кальция GCaMP. Нац. Методы 6, 875–881. 10.1038/нмет.1398 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Wu J. S., Luo L. (2006). Протокол вскрытия мозга Drosophila melanogaster для живой визуализации или иммуноокрашивания. Нац. протокол 1, 2110–2115. 10.1038/nprot.2006.336 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

    Статьи из Frontiers in Neural Circuits предоставлены здесь с разрешения Frontiers Media SA


    Оптически индуцированная активация кальций-зависимого гена и маркировка активных нейронов с использованием CaMPARI и Cal-Light

    Введение

    Фундаментальная цель исследований в области неврологии состоит в том, чтобы понять, что представляет собой активность нейронов: коррелирует ли эта активность с определенным сенсорным входом или с определенным поведением? Экспрессируют ли нейроны, участвующие в обучении, памяти или поведении, специфические маркеры или генетические программы, которые активируются во время фазы обучения или консолидации? Чтобы изучить, почему некоторые нейроны активны, а соседние нейроны неактивны, или почему некоторые нейроны демонстрируют генетические изменения во время обучения, консолидации или формирования памяти, требуется детальное понимание их входных данных, а также их генетических и физиологических свойств. Чтобы начать такой анализ, нам сначала нужно определить популяцию активных нейронов in vivo , на которые затем можно нацеливаться с помощью дополнительных методов (DeNardo and Luo, 2017) для дальнейшего изучения их биофизических и генетических свойств in vitro . Для достижения такого уровня понимания необходима возможность помечать и отслеживать активные нейроны и восстанавливать их для дополнительных экспериментов и анализа.

    Экспрессия немедленного раннего гена (IEG) обеспечивала средства для восстановления активных нейронов в экспериментальных парадигмах на протяжении десятилетий. ИЭГ демонстрируют низкую экспрессию, когда клетки находятся в состоянии покоя, но стимуляция может вызывать временную высокую экспрессию в течение нескольких минут (Greenberg et al., 19).86; Морган и Карран, 1986 г.; Кавасима и др., 2014 г.; Яп и Гринберг, 2018). Клетки, экспрессирующие IEG, можно отслеживать онлайн с помощью индикаторов флуоресценции или постфактум с помощью иммуноцитохимии в фиксированной ткани. Хотя экспрессия IEG оказалась полезной, стало ясно, что триггеры для транскрипции IEG включают метаболическую активность, стресс, факторы роста и высвобождение нейротрансмиттеров (Sheng and Greenberg, 1990). Таким образом, экспрессия этих генов не обязательно единообразно или тесно связана с активностью, такой как всплеск или синаптический ввод. Также были предприняты многочисленные набеги на химически индуцированную экспрессию генов (Mansuy et al., 19).98; Догбевиа и др., 2015; Каззулино и др., 2016). Хотя эти методы были успешно применены к множеству экспериментальных парадигм, другие недавние подходы являются более универсальными и более точными во времени. Эти новые подходы могут отслеживать активные нейроны in vivo и восстанавливать их для экспериментов ex vivo (Barth, 2007; Wang et al., 2019). Они основаны на оптических измерениях или фотопревращении красителей-индикаторов кальция для маркировки активности нейронов с помощью двухфотонной визуализации с последующим in vitro запись с тех же нейронов (Ko et al. , 2011), фотоактивируемый GFP для нацеливания на нейроны in vivo и in vitro (Lien and Scanziani, 2011; Peter et al., 2013) и хроническая визуализация с вирусно-экспрессированный GCaMP и флуоресцентные гранулы, которые позволяют идентифицировать набор нейронов для работы ex vivo срезов (Weiler et al., 2018). Все эти разработки указывают на необходимость разработки простых методов для отслеживания активных нейронов в течение более длительных периодов времени (в течение дней) или от одного экспериментального состояния к другому (например, от in vivo по in vitro экспериментов). Здесь мы описываем процедуры использования двух кальций-зависимых инструментов: CaMPARI и Cal-Light. Оба могут использоваться для маркировки активных нейронов, картирования цепей или оптогенетических манипуляций.

    CaMPARI (модулируемый кальцием фотоактивируемый логометрический интегратор) представляет собой индикатор кальция, который может быстро фотопреобразовываться в активных нейронах для выполнения картирования цепей (Fosque et al. , 2015; Zolnik et al., 2017; Moeyaert et al., 2018). CaMPARI хорошо работает с картированием цепей на основе каналородопсина (ChR2), поскольку свет с длиной волны 405 нм запускает как фотоконверсию CaMPARI, так и активацию ChR2-позитивных нейронов и окончаний аксонов.

    Cal-Light — еще один фотоактивируемый чувствительный к кальцию индикатор, способный запускать экспрессию различных генов в активных нейронах (Lee et al., 2017). Это свойство Cal-Light обеспечивает избирательную экспрессию генов в активных нейронах и, следовательно, может использоваться для выяснения того, является ли активность этих нейронов необходимой и/или достаточной для данного поведения при управлении экспрессией таких конструкций, как оптогенетические сайленсеры или усилители.

    Как CaMPARI, так и Cal-Light требуют освещения, совпадающего с увеличением цитозольного кальция, чтобы вызвать преобразование или активацию соответственно. Однако CaMPARI и Cal-Light работают в разных временных масштабах: CaMPARI быстро преобразуется в течение нескольких секунд (Fosque et al. , 2015; Zolnik et al., 2017), тогда как экспрессия, зависящая от Cal-Light, занимает около 2–5 дней (Lee et al. др., 2017). Преобразование CaMPARI и, в принципе, активация Cal-Light могут использоваться с активацией ChR2, поскольку CaMPARI использует свет 405 нм и свет Cal-Light 470 нм, оба из которых могут активировать ChR2. Cal-Light дает возможность затем инициировать экспрессию других конструкций, таких как флуоресцентные белки или оптогенетические активаторы/ингибиторы (например, GFP, ARChT, iChloC и т. д.) в активных нейронах.

    Механизмы действия CaMPARI

    CaMPARI представляет собой ярко-зеленый флуоресцентный белок, который посредством аллостерической модуляции хромофора превращается в ярко-красный флуоресцентный белок при освещении фиолетовым светом в условиях высокой доступности кальция (Fosque et al., 2015; Zolnik et al. и др., 2017; рис. 1). Основное преимущество CaMPARI по сравнению с другими генетически кодируемыми индикаторами кальция (GECIs, Pologruto et al. , 2004) заключается в том, что фотоконвертированные нейроны CaMPARI необратимо метятся, что позволяет визуализировать активную сеть спустя долгое время после того, как фотоконверсионный снимок активности был получен. Отмечены не только активные нейроны, но и поскольку CaMPARI является ратиометрическим интегратором, его красное/зеленое соотношение указывает на уровень их активности или, точнее, на уровень притока кальция. Это также отрицательный флуоресцентный индикатор, что означает, что он сообщает о мгновенном притоке кальция за счет снижения интенсивности флуоресценции как в непреобразованном зеленом состоянии, так и в преобразованном красном состоянии (см. Дополнительные видеофайлы 1, 2). Недостатком CaMPARI является то, что его экспрессия чувствительна к фиксации тканей с использованием растворов на основе формальдегида. Таким образом, хотя нейроны можно отслеживать в in vivo экспериментируют и следуют за ними in vitro , невозможно получить качественные изображения одних и тех же нейронов после фиксации (Zolnik et al. , 2017). Чтобы преодолеть эту проблему, были разработаны антитела против CaMPARI второго поколения, CaMPARI2, позволяющие использовать иммуноцитохимию для восстановления нейронов, которые были помечены in vivo как (Moeyaert et al., 2018). В этом исследовании, если явно не указано иное, мы использовали CaMPARI2.

    Рисунок 1 . Схематические чертежи CaMPARI и Cal-Light. (A) CaMPARI, модулируемый кальцием фотоактивируемый логометрический интегратор, представляет собой флуоресцентный белок с циклической пермутацией и сенсорными доменами кальция, который претерпевает фотопреобразование из зеленого в красный при воздействии света ~400 нм в присутствии высокого содержания Ca 2+ . Адаптировано с разрешения Fosque et al. (2015). (B) Активация Cal-Light. Когда Са 2+ увеличивается в цитозоле, это вызывает связывание М13 и кальмодулина друг с другом, позволяя TEV-C и TEV-N восстановить протеолитические функции. Однако протеаза TEV не может распознавать TEVseq в темноте, потому что TEVseq встроен в С-конец Jα-спирали AsLOV2. Синий свет вызывает конформационные изменения в Jα-спирали, обнажая TEVseq. Расщепленный tTA перемещается в ядро ​​и инициирует экспрессию генов. Адаптировано с разрешения Lee et al. (2017).

    Механизмы действия Cal-Light

    Cal-Light чувствителен к свету и зависит от кальция (Lee et al., 2017). Увеличение содержания кальция в цитозоле, обусловленное активностью, связано с транскрипцией генов в ядре (рис. 1). Чтобы это работало, активатор транскрипции, контролируемый тетрациклином (tTA), прикрепляют к клеточной мембране, а активатор транскрипции связывают с последовательностью расщепления протеазой (Tobacco Etch Virus Protease, TEVp) (TEVseq). Расщепление зависит от синего света и концентрации кальция. Увеличение уровня цитозольного кальция в присутствии синего света приводит к высвобождению tTA, который затем инициирует транскрипцию гена в ядре.

    Общее обоснование

    Представленные здесь протоколы описывают, как мы используем эти инструменты, и некоторые из наших модификаций. Лаборатории, разработавшие эти конструкции, опубликовали документы, демонстрирующие, что они работают in vivo у мышей и in vitro в культуре тканей (Fosque et al., 2015; Lee et al., 2017), а также у других модельных видов. включая Drosophila и C. elegans (Fosque et al., 2015). Здесь мы описываем следующие процедуры (рис. 2): (1) широкоугольная визуализация для фотоконверсии и фотоактивации в культуре нейронов, (2) с использованием CaMPARI и ChR2 ex vivo в острых срезах головного мозга для картирования цепей (Zolnik et al., 2017), (3) с использованием как CaMPARI, так и Cal-Light in vivo на спокойно сидящих мышах с фиксированной головой в качестве доказательства концептуальных экспериментов для мониторинга в больших масштабах. фотоконверсия и фотоактивация с помощью эпифлуоресцентной микроскопии и визуализации ex vivo , а также (4) иммуногистохимия для восстановления экспрессии CAMPARI2 в ткани, фиксированной формальдегидом.

    Рисунок 2 . Блок-схема четырех основных описанных процедур. После каждого заключительного процесса может быть выполнена конфокальная визуализация и анализ данных. Примерное количество времени, необходимое для основных шагов, указано в синих ячейках; необходимые задержки между основными шагами указаны рядом со стрелками. запись, восстановление; хаб., привыкание.

    Обоснование экспрессии конструкций CaMPARI и Cal-Light в культуре нейронов

    Ключевым требованием фотоконверсии и фотоактивации является то, что вход кальция связан с воздействием света. Однако минимальная продолжительность светового воздействия и оптимальные сроки освещения и поступления кальция до сих пор полностью не известны. Для измерения эффективности различных световых параметров оказались полезными такие препараты, как культура диссоциированных нейронов в сочетании со стимуляцией широкого поля и визуализацией живых клеток (рис. 3А, 4). Диссоциированные нейроны можно рутинно культивировать из коры и гиппокампа крысят или мышей после рождения дня (P) 0–3 и поддерживать в культуре от недель до месяцев. Хотя сетевая архитектура не сохраняется, диссоциированные нейроны образуют морфологически идентифицируемые аксоны и дендриты, устанавливают синаптические связи и запускают повторяющиеся цепочки потенциалов действия (Turko et al., 2019).). Диссоциированные нейроны культивируются в монослое, что делает их легко доступными как для оптических, так и для экспериментальных манипуляций. Эта доступность является явным преимуществом по сравнению с процедурами ex vivo и in vivo , особенно при исследовании эффективности вирусной трансфекции, экспрессии генов и эффективности световых параметров. Таким образом, диссоциированные клеточные культуры особенно хорошо подходят для характеристики экспрессии и функции генетических манипуляций, опосредованных вирусом.

    Рисунок 3 . Процедура трансфекции, преобразования и визуализации. (A) На этой схеме культивируемые нейроны обрабатывают вирусом Cal-Light. После экспрессии конструкции (обозначенной красной флуоресценцией) применяется фотостимуляция. Затем визуализация выявляет нейроны, которые были активны при получении светового стимула (т. Е. Они совместно экспрессируют GFP и, таким образом, кажутся желтыми в объединенных каналах). (B) В этом примере вирус CaMPARI вводили в кору S1; экспрессию конструкции визуализируют с помощью эпифлуоресцентного микроскопа. Большое количество нейронов экспрессирует CaMPARI через 3 недели после инъекции вируса. Слева: изображение места инъекции через черепное окно до и после фотоконверсии 405 нм. Обратите внимание на снижение соотношения зеленый/красный сразу после фотопреобразования. Справа: демонстрация фотопреобразованных нейронов в острых срезах мозга S1 (парасагиттальный, 300 мкм).

    Рисунок 4 . Экспрессия и функциональность CaMPARI и Cal-Light в культуре нейронов. (A) Широкоугольные эпифлуоресцентные изображения культуры нейрональных клеток, экспрессирующих CaMPARI. Верхний ряд, изображения до фотопреобразования, показывающие флуоресценцию исключительно в зеленом канале. Нижний ряд: изображения после фотопреобразования, демонстрирующие смешанную зеленую и красную флуоресценцию после примерно 5 минут полного освещения светом с длиной волны 395 нм. (B) Широкоугольные эпифлуоресцентные изображения культуры нейрональных клеток, экспрессирующих Cal-Light. Верхний ряд, изображения до фотоактивации, показывающие флуоресценцию в красном (tdTomato) канале. Нижний ряд: изображения после фотоактивации, демонстрирующие смешанную красную и зеленую (GFP) флуоресценцию после примерно 8–10 минут полного освещения светом с длиной волны 470 нм и через 6 дней экспрессии. Масштабные линейки, 200 мкм и 50 мкм на вставках. Изображения были получены на широкопольном эпифлуоресцентном микроскопе (Nikon Ti2) с использованием 10-кратного воздушного объектива (Plan Apo, 0,8 NA, 1000 мкм WD) и светодиода Lumencor Spectra X. Флуоресценция визуализировалась через 519/26 нм (GFP) и 642/80 нм (tdTomato) полосовые эмиссионные фильтры.

    Обоснование использования срезов мозга

    Фундаментальной проблемой всех датчиков кальция является определение причины и источника поступления кальция. Уровни цитозольного кальция повышаются, когда нейроны запускают потенциалы действия, когда синаптическая активность деполяризует нейроны или когда кальций высвобождается из внутренних запасов (Sabatini et al., 2002). Следовательно, трудно интерпретировать сигналы кальция в экспериментах, выполненных in vivo . Напротив, нейроны в срезах мозга находятся в состоянии покоя, и синаптическую активность можно легко и целенаправленно контролировать. С целью изучения эффективности методов отслеживания активности мы использовали экспериментов in vitro , чтобы установить, что фотоконверсия CaMPARI чувствительна к изменениям внутреннего кальция, вызванным синаптическим входом, т. е. фотоконверсия не зависит от потенциалов действия. Таким образом, чтобы оценить сигнал CaMPARI, необходимо было определить, происходит ли фотоконверсия CaMPARI даже при блокировании потенциалов действия. Для таких экспериментов и для картирования цепей (рис. 5) срезы мозга идеально подходят из-за контролируемых условий, которые они предлагают: потенциалы действия, синаптическую передачу и даже внутри- и внеклеточные условия можно легко регулировать с помощью ионного состава и фармакологии.

    Рисунок 5 . CaMPARI для картирования полностью оптических функциональных соединений. CaMPARI экспрессировался в S1, а ChR2-EYFP экспрессировался в коре головного мозга M1. В острых срезах мозга ex vivo фиолетовый свет (405 нм, 120 мВт см -2 ) воздействовал на кору S1, что активировало ChR2 и одновременно запускало преобразование постсинаптических нейронов, экспрессирующих CaMPARI, в слоях 2/3 и 5. Здесь конверсионные и стимулирующие световые импульсы подавались с частотой 10 Гц в течение секунды с шагом света в течение 5 с после стимула. Между каждым поездом был интервал 12 с, и это повторялось 10 раз. Слева: однофотонное изображение CaMPARI green/ChR2-EYFP при 4-кратном увеличении. После освещения фиолетовым светом в слоях 2/3 и 5 проявляется красная флуоресценция CaMPARI. Масштабная линейка, 200 мкм. Средняя и правая панели, пост-стимуляция/преобразование с 60-кратным увеличением, двухфотонные изображения красного/зеленого CaMPARI в слоях 2/3 и 5 из соответствующих срезов. Масштабная линейка, 50 мкм. Исключительно на этой фигуре был экспрессирован CaMPARI (не CaMPARI2).

    Обоснование

    in vivo Фотостимуляция и эпифлуоресцентная визуализация через черепное окно

    Основной целью этих методов является маркировка активных нейронов in vivo и восстановление активных нейронов для дальнейшего анализа. Отдельные нейроны можно отслеживать in vivo с помощью двухфотонной визуализации, в то время как фотопреобразованные области коры головного мозга можно отслеживать с помощью эпифлуоресценции. Основным преимуществом эпифлуоресценции является то, что измерения просты, они занимают мало времени, а стоимость широкопольных эпифлуоресцентных микроскопов низка по сравнению со стоимостью двухфотонных установок визуализации (Andermann et al., 2013). Основным недостатком является то, что изображения не имеют клеточного разрешения, тем не менее как экспрессию генов, индуцированную Cal-Light, так и фотоконверсию CaMPARI можно отслеживать с помощью эпифлуоресцентной визуализации через черепное окно (рис. 3B). Наконец, нейроны, которые были активны in vivo можно визуализировать ex vivo (рис. 6) и охарактеризовать их физиологию, анатомию, ламинарное распределение их аксонов и дендритов, а также их экспрессию нейрохимических маркеров. Этот автономный подход означает, что количественная оценка активности in vivo может быть выполнена более точно без необходимости поддерживать жизнь животного в течение продолжительных периодов времени.

    Рисунок 6 . Редкое выражение Cal-Light, вызванное через черепное окно у бодрствующей тихо сидящей мыши с фиксированной головой. (A) Большое количество нейронов экспрессирует Cal-Light через три недели после инъекции вируса. (A1) Нейроны от слоя 1 до слоя 4 экспрессируют GFP через шесть дней после воздействия света с длиной волны 470 нм, когда голова мыши была зафиксирована и она бодрствовала. Ореол экспрессии GFP отмечает степень распространения 470-нм света in vivo . (A2) Объединенное изображение, показывающее фотоактивированные нейроны с двойной меткой (желтые) в слоях 2–5. (A3) Увеличенное изображение одного сильно фотоактивированного нейрона в слое 3. (B) Пример нейронов коры S1, экспрессирующих Cal-Light, через три недели после инъекции вируса. (B1,B2) Изображения сделаны немного в стороне от центра инъекции, чтобы выделить несколько интенсивно экспрессирующих GFP нейронов в слоях 1–4, через 6 дней после воздействия света с длиной волны 470 нм, когда голова мыши была зафиксирована и она бодрствовала. (B3) Увеличенное изображение одного сильно фотоактивированного нейрона (ярко-желтый) и одного менее сильно фотоактивированного нейрона (бледно-желтый) в слое 2. Срезы парасагиттальные, 300 мкм. Масштабная линейка на А 100 мкм, на В 200 мкм, на вставках 50 мкм. Срезы визуализировали на конфокальном лазерном сканирующем микроскопе (Nikon A1Rsi+) с использованием 20-кратного воздушного объектива (Plan Apo, 0,8 NA, 1000 WD) и лазера с длиной волны 647 нм. Флуоресценцию отображали через полосовой эмиссионный фильтр 700/50.

    Обоснование иммуногистохимии

    Этот метод позволяет восстановить CaMPARI-экспрессирующие нейроны (включая моментальный снимок фотоконверсии) в фиксированной ткани, открывая возможность монтировать срезы и использовать их для конфокальной визуализации на более позднем этапе (рис. 7). В принципе, это можно затем использовать для идентификации и дальнейшей характеристики меченых нейронов с точки зрения морфологии и анатомической связности.

    Рисунок 7 . Экспрессия CaMPARI: эффекты фиксации и использования иммунного окрашивания для восстановления преобразованных нейронов. (A) После фиксации в 4% PFA только несколько нейронов коры S1 демонстрируют слабый сигнал красной флуоресценции, отражающий фотоконверсию CaMPARI, проведенную in vivo . (A1) Большое количество непреобразованных зеленых нейронов все еще видно. (A2) Когда используется антитело CaMPARI 4F6, нацеленное на преобразованную форму CaMPARI, оно выявляет преобразованные нейроны, а (A3) отличает их от соседних непреобразованных нейронов, как видно на объединенном изображении. Нижний ряд: увеличенное изображение областей вставки, показывающее преобразованные и непреобразованные ячейки. Срезы коронарные, 300 мкм, взяты непосредственно из в эксперименте in vitro и помещали в PFA на ночь. Кровеносные сосуды видны, потому что мозг не был перфузирован до фиксации. Масштабная линейка в A 100 мкм, на вставке 50 мкм.

    Обзор процедур

    Мы разделили процедуры на несколько модулей (рис. 2). Для каждого экспериментального препарата, от культуры ткани до работы in vivo , первым шагом как с Cal-Light, так и с CaMPARI является получение экспрессии вирусной конструкции. Затем экспрессию контролируют с помощью широкопольной эпифлуоресцентной микроскопии. Фотоконверсия или экспрессия генов запускается, когда свет воздействует на клеточную культуру, на срез мозга или через черепное окно на мозг. В случае процедур in vivo нейроны, экспрессирующие конструкции, могут быть извлечены ex vivo для записи или картирования цепей. Наконец, нейроны, экспрессирующие CaMPARI, которые были фотоконвертированы и зафиксированы в растворе на основе формальдегида (и, таким образом, потеряли свою нативную флуоресценцию), могут быть восстановлены с помощью иммуногистохимии.

    Материалы и оборудование

    Животные

    Крысы . Для культур нервных клеток мы используем крысят дикого типа (Wistar, P0-2).

    Мыши . Для картирования цепей мы используем молодых (P21–30) мышей дикого типа (C57/BL6J) любого пола. Для фотоактивации и фотоконверсии in vivo мы использовали взрослых (P40–90) мышей любого пола.

    Chemicals

    Нейронная базальная среда A (Thermofisher Scientific, 10888022)

    B27 (Thermofisher Scientific, 17504001)

    Glutamax (Thermofisher Scientific, 35050-038)

    Penicill-Strecemilin Scipemicrymin-StryciN-Scepisher (35050-038). -122)

    Поли-L-лизин (Sigma, P1399 Покрытие покровного стекла)

    Папаин (Sigma, P4762)

    Альбумин бычьей сыворотки (Sigma, A3294)

    Среда Hibernate A с низкой флуоресценцией (Brain Bits Ltd, HALF)

    3 NaCl

    3 9 (NaCl) Carl Roth, HN00.2)

    KCl (Carl Roth, HN02.2)

    NaH 2 PO 4 (моногидрат, Carl Roth, K300. 1)

    NaHCO 3 2)

    CaCl 2 (дигидрат, Carl Roth, HN04.2)

    MgCl 2 (гексагидрат, Carl Roth, HN03.1)

    D-глюкоза (Carl Roth, HN06.3)

    Холина хлорид (Sigma, C7527)

    Na-L-аскорбат (Sigma, A4034)

    Na -pyruvate (Sigma, P2256)

    KH 2 PO 4 (Carl Roth, 3904.1)

    NaOH (Carl Roth, 9356.1)

    HCl (37%, Carl Roth, 9277.2)

    Paraformaldehyde (Merck, 1.04005)

    Габазин (SR-95531 гидробромид, Tocris, 1262)

    Карбахол (карбамоилхолин хлорид, Tocris, 2810)

    Этанол (96%, Carl Roth, T171.4)

    Нормальная козья сыворотка (Gibco, 16210-072)

    Triton X-100 (Sigma, T8787)

    Глицерин (Sigma, G5516)

    DAPCO (DAPCO)

    Рот, 0718.1).

    Препараты для животных

    Кетамин (10%, Медистарт)

    Ксилазин (Ксилавет, 20 мг/мл, CP-Pharma)

    Изофлуран (Форен, Аббви)

    Бупреноркфин (Римадил, Зоэтис)

    Лидокаин (Sigma, L7757).

    Растворы

    Полная среда Neural Basal A (NBA) . Среда NBA, дополненная B27 (в 1-кратной концентрации), GlutaMAX (в 1-кратной концентрации) и пенициллином-стрептомицином (100 ЕД/мл).

    Спящий режим полного носителя . Среда Hibernate A, дополненная B27 (в 1-кратной концентрации), GlutaMAX (в 1-кратной концентрации) и пенициллином-стрептомицином (100 ЕД/мл).

    ACSF . (в мМ): 125 NaCl, 2,5 KCl, 1,25 NaH 2 PO 4 , 25 NaHCO 3 , 2 CaCl 2 , 1 MgCl 2 и 25 D-глюкоза в дистиллированной воде, рН ~7,4.

    Холин-ACSF . (в мМ): 110 хлорида холина, 2,5 KCl, 1,25 NaH 2 PO 4 , 26 NaHCO 3 , 11,6 Na-L-аскорбат, 3,1 Na-пируват, 7 MgCl 1 2 90,514 Ca и 10 D-глюкоза в дистиллированной воде, рН ~7,4.

    Стерильный PBS . (в мМ): 137 NaCl, 2,7 KCl, 10 Na 2 HPO 4 , 1,8 KH 2 PO 4 в дистиллированной воде. Отрегулируйте pH до 7,4, используя NaOH.

    Стерильный параформальдегид (4%) . Растворяют 40 г параформальдегида (ПФА) в 800 мл дистиллированной воды при 60°С. Добавьте несколько капель 1 М NaOH, пока раствор не станет прозрачным, и 100 мл 10 × PBS. Отрегулируйте рН до 7,4 с помощью 1 М HCl. Доведите до 1000 мл дистиллированной водой и простерилизуйте фильтром.

    Внимание! Формальдегид токсичен и известен как канцероген. Не вдыхать и не допускать контакта с кожей и глазами.

    Антитело и блокирующий раствор . Срезы головного мозга обрабатывают блокирующим раствором (5% нормальной козьей сыворотки (NGS), 1% Triton X-100 в 1 × PBS). Антитела инкубируют в том же растворе.

    Монтажный раствор . 80% глицерина + 2,5% DAPCO в PBS.

    Вирусы/антитела

    Вирусы

    Все вирусы были получены в лаборатории Charité Viral Core Facility, разделены на аликвоты и хранились при температуре -80°C. Используемые аликвоты вирусов (обычно аликвоты по 5 мкл) можно хранить в стандартном холодильнике при 4°C в течение нескольких месяцев. Вирусы, которые мы использовали:

    • pAAV-TM-CaM-NES-TEV-N-AsLOV2-TEVseq-tTA

    • pAAV-M13-TEV-C-P2A-TdTomato

    • pAAV-TetO-GFP

    • pAAV-Syn-CAMPARI2

    • pAAV-ChR2-h234R-EYFP

    Антитела

    • 1-е антитело, CaMPARI 4F6, изготовлено в исследовательском центре Janelia Farm Research Campus, лаборатория Шрайтера, 1:1000

    • 2-е антитело, Alexa 633, козий антимышиный A21050, 1:500

    Микроскопы

    Широкопольная эпифлуоресценция (используется для клеточных культур; Nikon Ti2)

    Эпифлуоресценция (используется для проверки экспрессии in vivo ; Nikon Stereo SMZ1270i)

    Конфокальное лазерное сканирование (Nikon A1Rsi+)

    Двухфотонное (двухфотонное лазерное сканирование Femto 2D, Femtonics Ltd, Будапешт, Венгрия).

    Хирургическое оборудование и оборудование для срезов головного мозга

    Dumont no. Пинцет для покровных стекол 5/45 (Fine Science Tools, 11251-33)

    Dumont no. 3, 4, 5, 7 щипцы разных стилей, прямые (Fine Science Tools, 11231-30, 11254-20, 11241-30, 11251-10, 11271-30)

    Стандартные щипцы (Fine Science Tools, 11000-12, различной длины и диаметра)

    Шпатель

    Тонкие ножницы (Fine Science Tools, 14060-09, 14058-09, 14090-09).

    Стоматологическая бормашина (Osada Success 40 или Foredom Micromotor, HPA917).

    Сверла (Fine Science Tools, 19007-05, 19007-07, 19007-09)

    Стерильный одноразовый шприц, 0,4 мл (Omnican, B. Braun,

    27)

    Абсорбирующие тампоны Sugi (Kettenbach Medical, 3160 Medical2 )

    Парафильм (Sigma, P7793)

    Микропипетки для ПЦР, 1–5 мкл (Drummond, 5-000-1001-X)

    Крем для ухода за глазами (Bepanthen, Bayer)

    Минеральное масло (Sigma, M3516)

    Грелка (система регулирования температуры, FHC)

    Самоадгезивный полимерный цемент (RelyX Unicem, 3M, Applicaps, 56815)

    Порошок Contemporary Ortho-jet (черный, Lang Dental, 1520BLK)

    Герметик Kwik-Cast (World Precision Instruments)

    Инжектор давления для низкая скорость и малый объем (инжектор Stoelting Quintessential Pressure, 53311)

    Съемник микропипеток для пипеток для инъекций вируса (Sutter Instrument, P-97)

    Стереотаксический аппарат для мелких животных (KOPF, 940)

    Вибратом (Leica, VT1200S)

    Осветительное оборудование

    Лазер HPTaire (лазер Maiapphire) DeepSee; Spectra-Physics/Newport)

    Светодиод 455 нм (для стимуляции in vivo ; Prizmatix, светодиодная головка UHP 455)

    Светодиод 405 нм (для стимуляции in vivo ; ThorLabs, 405FP1e) 3 900 на стимуляция in vivo ; Prizmatix, Optogenetics Fiber-500 in-vitro )

    Ртутная лампа (X-cite 200 Вт, Excelitas Technologies)

    Измеритель оптической мощности (ThorLabs, PM200 и S120VC)

    Программное обеспечение

    Для получения двухфотонного изображения: Программный пакет MES на основе Matlab (Femtonics)

    Программное обеспечение для обработки изображений (ImageJ, https://imagej. nih.gov/ij/)

    Другое

    Пробирки Eppendorf, 0,5 мл (Sigma, T891)

    Пробирки Falcon , 50 мл (Корнинг, 430921)

    Покровные стекла (круглые 12 мм; Roth, P231.1)

    Покровные стекла (круглые 3–5 мм; Warner Instruments, CS-3R-0, CS-4R, CS-5R-1)

    Стекло -bottom dishes (Eppendorf, 0030740017)

    0.2 μm filters (Carl Roth, P668.1)

    Haemocytometer (A. Hartenstein, ZK06)

    24-well cell culture plates (Corning, 353047)

    Procedures

    (A) Приготовление культур диссоциированных первичных нейрональных клеток (длительность: 3 часа)

    Примечание: Получение культур диссоциированных первичных нейрональных клеток было описано ранее (Turko et al., 2019). Все процедуры должны выполняться в стерильных условиях. Все растворы должны быть стерилизованы с использованием фильтра 0,2 мкм. Покровные стекла и инструменты для вскрытия следует стерилизовать нагреванием в течение 3 ч при температуре 185°С.

    (1) Отделите ткань кортико-гиппокампа дикого типа от крысят Wistar (послеродовые дни 0–2).

    (2) Оцените плотность клеток с помощью гемоцитометра или автоматического счетчика клеток.

    (3) Выращивайте клетки на покровных стеклах диаметром 12 мм, покрытых поли-L-лизином (покрытие в течение 1 ч; концентрация 20 мкг/мл).

    (4) Клетки в 24-луночных планшетах для культивирования клеток с плотностью 400 клеток на мкл в капле объемом 500 мкл (всего клеток на лунку: 2 × 10 5 ).

    (5) Культура клеток в среде Neural Basal A с добавлением B27 (в 1-кратной концентрации), GlutaMAX (в 1-кратной концентрации) и пенициллин-стрептомицина (100 ЕД/мл). Температура инкубатора должна быть 37°C.

    (6) Подкармливайте клетки еженедельно, удаляя 100 мкл кондиционированной среды для культивирования клеток и добавляя 200 мкл свежеприготовленной среды для культивирования клеток.

    (B) Трансфекция клеточной культуры (продолжительность: 20 мин)

    Приготовьте растворы вируса в стерильных аликвотах. Общий объем должен составлять 1 мкл на покровное стекло для трансфекции.

    (1) Перед заражением подождите 5–20 дней, пока культуры не вырастут.

    (2) Вирусные растворы:

    • Для CaMPARI приготовьте pAAV-Syn-CaMPARI2 с титром ~10 11 -10 12 ГХ/мл.

    • Для Cal-Light смешайте три компонента:

    ° pAAV-TM-CaM-NES-TEV-N-AsLOV2-TEVseq-tTA

    ° pAAV-M13-TEV-C-P2A-TdTomato

    ° pAAV -TetO-GFP

    pAAV-TetO-GFP может быть заменен вирусами, связывающими другие генетические конструкции, например, ChR2, iChloC или ArCHT с TetO. GFP экспрессируется при использовании pAAV-TetO-GFP. Соотношение конструкции TetO и двух других вирусов может варьироваться в зависимости от экспериментальных требований (см. Lee et al., 2017). Здесь мы используем смесь 1:1:2 для трех вирусов. Титры для каждой используемой нами конструкции составляли ~10 12 -10 13 ГХ/мл.

    (3) Разведите раствор вируса в 20 мкл стерильного PBS на 1 мкл вируса. Тщательно перемешайте.

    (4) Выньте планшет(ы) с лунками из инкубатора и быстро добавьте 20 мкл раствора в каждую лунку планшета с покровными стеклами, подлежащими трансфекции, а затем поместите их обратно в инкубатор.

    (C) Фотостимуляция и визуализация (продолжительность: 1–3 часа , рис. 4, дополнительные видеофайлы 1, 2)

    сочетаться с воздействием света. Для стимулирования сетевой активности в клеточных культурах клетки инкубировали с ГАМК-9.0113 Габазин, антагонист рецептора , блокирует быстрое ГАМК-опосредованное синаптическое торможение. Для дальнейшего стимулирования сетевой активности некоторые культуры также обрабатывали агонистом мускариновых рецепторов карбахолом.

    Критический шаг: После трансфекции подождите примерно 10 дней для достаточного уровня экспрессии. Если возможно, проверьте экспрессию конструкций с помощью эпифлуоресцентного микроскопа. Оптимально, культуры должны быть старше 21 дня на момент фотостимуляции, оставляя достаточно времени для созревания сети.

    (1) Разморозьте замороженные маточные растворы габазина и карбахола при комнатной температуре в течение 15 мин. Инкубируйте коническую пробирку, содержащую 8 мл полной среды гиберната А, на водяной бане (37°С) в течение 15 мин.

    (2) После инкубации пипеткой внесите 2 мл полной среды hibernate A в планшет со стеклянным дном. Перенесите 24-луночный планшет из инкубатора в ламинарный вытяжной шкаф. Используйте острые щипцы, чтобы перенести покровное стекло, содержащее клетки, с 24-луночного планшета на пластину со стеклянным дном. Используйте платиновое кольцо (или подходящую альтернативу), чтобы удерживать покровное стекло на месте. Быстро перенесите 24-луночный планшет для культивирования клеток обратно в инкубатор.

    Критический шаг: Мы рекомендуем использовать чашки со стеклянным дном для визуализации, так как они обеспечивают улучшенное оптическое качество.

    Внимание! В режиме гибернации Полная среда забуферена для уровней CO 2 окружающей среды, она не совместима с инкубаторами, загазованными 5% CO 2 .

    (3) Поместите чашку со стеклянным дном в держатель образцов микроскопа и сфокусируйтесь на клеточном слое. В зависимости от эксперимента лекарства могут быть осторожно добавлены пипеткой в ​​раствор гибернации, чтобы увеличить сетевую активность. Чтобы уменьшить торможение и генерировать повторяющиеся всплески потенциалов действия и повышенной сетевой активности, нанесите 10 мкМ габазина (конечная концентрация) на клеточные культуры. Если через 10 мин габазин не увеличивает сетевую активность (активность можно контролировать, если клетки экспрессируют CaMPARI, см. ниже), нанесите 10 мкМ карбахола (конечная концентрация), чтобы способствовать дальнейшему увеличению активности. Возьмите изображения до стимуляции в любых каналах флуоресценции, которые представляют интерес (см. следующий шаг).

    Примечание: Мы используем широкопольный микроскоп Nikon Ti2, предназначенный для визуализации живых клеток.

    (4) Получение изображения:

    • В культурах, экспрессирующих CaMPARI, сетевую активность можно отслеживать до фотоконверсии. Это возможно, потому что CaMPARI также является индикатором кальция, связанным с GCaMP3, который быстро и обратимо тускнеет при притоке кальция (Fosque et al., 2015). Таким образом, изменения яркости нейронов, экспрессирующих CaMPARI, указывают на то, что клетки и цепи активны, а затемнение флуоресценции указывает на увеличение внутриклеточного содержания Ca 9.0017 2+ концентрация. Для обнаружения активности можно использовать временную серию из 60 изображений с частотой 1 Гц. До фотопреобразования в канале 555 нм не должно быть флуоресцентного сигнала.

    • В культурах, экспрессирующих Cal-Light, изображения получают при 555 нм (для проверки экспрессии tdTomato) и при 470 нм (для проверки экспрессии GFP). В период до стимуляции, когда свет 470 нм не применялся, в зеленом (470 нм) канале не должно быть флуоресцентных нейронов.

    Примечание: Мы использовали следующие фильтры: 395/25 нм, 470/24 нм и 550/15 нм для возбуждения и 519/26 нм (GFP) и 642/80 нм (tdTomato) для излучения.

    Критический шаг: Если на культуры наносят препараты, мы рекомендуем подавать на культуру свет для фотоконверсии или фотоактивации примерно через 10 минут после нанесения препарата. Это обеспечивает достаточное время для диффузии препаратов в среду и развития их действия на нейроны.

    (5) Макросы:

    • Для CaMPARI настройте автоматический макрос-скрипт для получения изображений в световых каналах 470 и 550 нм, чередующихся со световым стимулом 395 нм (дополнительные видеофайлы 1, 2). Мы предлагаем получить серию из 60 изображений на канал, за каждым из которых следует 5-секундный импульс света 395 нм, что приводит к 5-минутной общей доставке света. Внимательно наблюдайте за конверсией и останавливайте процедуру раньше, если достигнуты желаемые уровни конверсии. Световая мощность раздражителя должна быть ~4–10 мВт·см −2 .

    • Для Cal-Light настройте автоматический макрос-скрипт, который повторно запускает световой стимул с длиной волны 470 нм (ВКЛ), за которым следует интервал темноты (ВЫКЛ). Мы предлагаем применять либо 2 с ВКЛ/8 с ВЫКЛ, либо 1 с ВКЛ/4 с ВЫКЛ в течение 40–60 мин, что приводит к 8–12 мин общей подачи света. Световая мощность раздражителя должна быть ~4-10 мВт·см -2 .

    Критический шаг: Из-за его чувствительности к фотообесцвечиванию мы рекомендуем сначала протестировать фотопреобразование CaMPARI при низкой мощности света.

    Примечание: В то время как фотоконверсия CaMPARI может быть визуализирована немедленно, фотоактивация Cal-Light занимает ~2–5 дней.

    (6) После того, как произойдет фотоконверсия или будет доставлен свет для фотоактивации экспрессии Cal-Light, перенесите покровное стекло из раствора для гибернации в хорошо заполненную культуральной средой клетки в ламинарном боксе. Верните пластину с клеточной культурой в инкубатор.

    (7) Дальнейшее обращение:

    • CaMPARI остается в преобразованной форме в течение 2–3 дней, но постепенно удаляется за счет обмена белка. Другими словами, самый надежный сигнал CaMPARI обнаруживается сразу после преобразования. Клетки, экспрессирующие CaMPARI, можно использовать для дополнительных экспериментов после того, как обмен белка устранит конверсию, т. е. красный CaMPARI будет полностью заменен новым зеленым CaMPARI.

    • Клеткам, экспрессирующим Cal-Light, требуется не менее 2–5 дней, чтобы продемонстрировать надежную экспрессию фотоактивируемой конструкции. Убедитесь, что условия инкубатора (атмосфера и температура) оптимальны в течение этого времени, и кормите по мере необходимости.

    (D) Хирургический препарат для in vivo и in vitro экспрессии Cal-Light и CaMPARI: разведение вируса, смешивание и загрузка (длительность: 30 мин)

    (Вирус) 9001 решения:

    • Cal-Light: подготовьте Cal-Light, как описано выше [в разделе (B) (2)]. Смешайте три компонента:

    pAAV-TM-CaM-NES-TEV-N-AsLOV2-TEVseq-tTA,

    pAAV-M13-TEV-C-P2A-TdTomato и

    pAAV-TetO-GFP в соотношении 1. :1:2 (титры ~10 12 -10 13 ГХ/мл)

    • CaMPARI: Подготовить pAAV-Syn-CaMPARI2 с конечным титром ~10 11 -10 12 ГХ/мл в стерильная пробирка Эппендорфа на 0,5 мл (общий объем должен составлять ~5 мкл).

    Критический шаг: Оптимальные параметры экспрессии каждого вируса должны быть определены на начальном этапе, когда тестируются различные серии разведений вируса.

    Примечание: Ручные инъекции с помощью пипеток или шприцев Hamilton могут быть эффективны для введения вирусов, но здесь мы используем моторизованный шприц Quintessential (Stoelting). Этот инъектор эффективен для контролируемой доставки небольших объемов вируса. Скорость потока и объемы (вплоть до пиколитров) можно регулировать. Инжектор крепится к стереотаксической раме, и в инжектор помещаются пипетки, предназначенные для доставки 5–10 мкл. 50–200 нл вируса вводят на 2–3 разные глубины в каждое место инъекции. Обратите внимание, что существует множество способов наполнения пипеток. Можно заполнить пипетки для инъекций минеральным маслом, а затем удалить вирус в наконечник пипетки, или изменить процесс и заполнить наконечник пипетки вирусом, а затем заполнить минеральным маслом.

    (2) Натяните стеклянные пипетки для инъекций (5 или 10 мкл) на съемник Саттера. Осторожно отрежьте вытащенные пипетки до ~ 10–20 мкм острыми ножницами под стереомикроскопом. Перед загрузкой вируса поместите каплю минерального масла на кусок стерильного парафильма.

    (3) Чтобы загрузить вирус, вставьте кончик вытянутой стеклянной микропипетки вперед в пластиковый наконечник пипетки, прикрепленный к инсулиновому шприцу. Убедитесь, что нет утечки воздуха, когда на шприц оказывается отрицательное давление. Осторожно загрузите 300–500 нл вируса из пробирки Эппендорфа в открытый конец микропипетки. После загрузки вируса отпустите давление на инсулиновом шприце. Расположите отверстие пластиковой пипетки над подготовленной каплей масла на куске парафильма. Примените отрицательное давление на шприц и загрузите ~ 500 нл минерального масла. Граница между раствором вируса и минеральным маслом должна быть видна в виде четкого контраста фаз. Осторожно удалите заполненную стеклянную микропипетку из пластикового шприца и поместите ее в инжектор, прикрепленный к стереотаксической руке. Выбросьте Parafilm в контейнер для биологически опасных отходов, а оставшийся вирусный раствор храните в холодильнике при температуре 4°C.

    Критический шаг: Убедитесь, что кончик микропипетки не поврежден и имеет правильный размер (диаметр ~10 мкм). Эту предосторожность следует соблюдать, чтобы не повредить твердую мозговую оболочку и ткани головного мозга.

    (E) Surgical preparation for in vivo and in vitro expression of Cal-Light and CaMPARI: stereotaxic injections (duration: 40 min)

    Critical step: Clean the операционную зону и хирургические инструменты 70% этанолом и дайте высохнуть. Если возможно, для предотвращения каких-либо инфекций хирургические инструменты можно автоклавировать, а стерильные упаковки можно подготовить для использования в хирургии.

    (1) Перед операцией глубоко анестезируйте мышей внутрибрюшинной инъекцией раствора кетамина/ксилазина (100/10 мг кг -1 ). Как только мыши перестанут реагировать на щипки за хвост или пальцы ног, подстригите шерсть на голове острыми ножницами или электрическим триммером. Поместите мышей в стереотаксический аппарат (Kopf Instruments Inc., Калифорния, США). Убедитесь, что ушные стержни и мундштук расположены правильно, чтобы удерживать мышей на месте на время операции.

    Внимание! Все эксперименты с животными должны иметь номер лицензии на животных и быть одобрены институциональными и/или государственными учреждениями. Эксперименты, описанные в этом протоколе, были проведены после одобрения Landesamt для Gesundheit und Soziales (LAGeSo), Берлин, Германия.

    Критический шаг: Крайне важно, чтобы мыши были хорошо анестезированы и получали правильные дозы анальгетиков.

    (2) Обеспечьте местное обезболивание, введя лидокаин (1–2%, 0,1–0,2 мл) локально под кожу головы в том месте, где должна быть сделана трепанация черепа.

    Внимание! Нанесите крем для глаз (Бепантен), чтобы предотвратить высыхание глаз.

    (3) Когда мыши полностью успокоены и правильно расположены в стереотаксической раме, убедитесь, что голова выровнена и выровнена. Для инъекций вглубь головного мозга необходимо убедиться, что Z -плоскость, передняя и задняя части черепа плоские, расположены полностью горизонтально. Плоский череп можно определить, поместив кончик микропипетки на брегму, измерив z — положение, и повторение этого измерения на лямбда. Фиксацию головы можно регулировать до тех пор, пока показания в двух точках на черепе не станут идентичными.

    (4) После того, как мех подстрижен, продезинфицируйте кожу головы с помощью 70% этанола. Аккуратно разрежьте кожу головы стерильным скальпелем и расправьте кожу пинцетом (Dumont, № 5). При необходимости промойте край раны физиологическим раствором. Удалите лишнюю жидкость с помощью впитывающих тампонов (Sugi, Kettenbach).

    (5) Определите стереотаксические координаты, установив контрольную точку «0» на брегме. Отметьте интересующую область коры (в нашем случае кора ствола, медиально-латеральная 2,5 мм, передне-задняя -2,0 мм) ручкой или осторожно лезвием скальпеля. Просверлите круговую краниотомию радиусом 1 мм вокруг знака. Применяйте осторожное и медленное сверление без полной перфорации кости. Постоянно нанося стерильный PBS на кость, можно избежать нагревания и повреждения твердой мозговой оболочки. После истончения кости путем непрерывного сверления должна быть возможность удалить перфорированный кусок кости.

    Критический шаг: Во время сверления тщательно проверяйте толщину оставшейся кости. Избегайте повреждения твердой мозговой оболочки или головного мозга путем слишком сильного давления или перегрева сверла при постоянном сверлении. Необходимо регулярное орошение физиологическим раствором или охлаждение воздухом!

    (6) Нанесите стерильный PBS на трепанацию черепа и тщательно очистите место инъекции с помощью впитывающих тампонов. Держите мозг влажным с помощью PBS.

    (7) Поместите наполненную вирусом инъекционную микропипетку в стереотаксический держатель и поместите пипетку над местом инъекции в 9Угол 0° к головному мозгу. Используйте контроллер микроинъекций, чтобы применить положительное давление и создать небольшую каплю вируса, видимую на кончике пипетки. Это необходимо для того, чтобы пипетка не засорилась и вирусный раствор можно было ввести беспрепятственно.

    (8) Опустите инъекционную микропипетку и проникните в твердую мозговую оболочку, чтобы достичь желаемой глубины (в наших экспериментах мы вводили на 0,6, 0,4, 0,2 и 0,1 мм) ниже поверхности пиальной оболочки. Как только пипетка окажется в правильном положении, вирус можно ввести под положительным давлением (100–200 нл при 15–20 нл в минуту 9). 0017-1 ).

    Критический шаг: Убедитесь, что микропипетка не засорена и твердая мозговая оболочка влажная, чтобы не повредить мозг при проникновении пипетки в мягкую мозговую оболочку.

    (9) После инъекции подождите 5 минут, прежде чем медленно удалить микропипетку из коры. Выньте пипетку из стереотаксического держателя и выбросьте в мусорное ведро для биологически опасных отходов. Тщательно очистите мозг снова стерильным PBS.

    Примечание: Если планируется картирование цепи CaMPARI [процедура (G) ], выполните еще одну инъекцию вируса с использованием ChR2 в интересующей пресинаптической области.

    (10) Введите анальгетики карпрофен (5 мг/кг) и бупренорфин (0,05–0,1 мг/кг) внутрибрюшинно, чтобы обеспечить безболезненное выздоровление животного.

    (11) Снимите мышь со стереотаксической рамы, ослабив дужки и носовую часть.

    (12) Зашейте кожу головы стерильной шовной нитью. Аккуратно поместите мышь обратно в ее домашнюю клетку, которая ставится на нагревательное устройство. Следите за мышью, пока она не проснулась.

    Критический шаг: Убедитесь, что мышь просыпается в гладких условиях. Избегайте размещения анестезированной мыши вместе с бодрствующими товарищами в одной клетке.

    Внимание! После операции за каждой мышью следует ухаживать индивидуально и в соответствии с правилами и рекомендациями. Мышей в наших экспериментах ежедневно контролировали в течение 3 дней после операции на наличие боли, дивергентного поведения в потреблении пищи и аномального социального поведения.

    (F) Острая подготовка срезов головного мозга (продолжительность: 1,5 часа)

    (1) Позвольте CaMPARI экспрессироваться в течение >14 дней после вирусной инъекции (инъекций) in vivo .

    (2) Глубоко анестезируйте мышь (постнатальный возраст > P21) изофлураном (1,5–3% в O 2 ). Удалите и разделите мозг на корональные срезы толщиной 300 мкм с помощью вибратома под холодной (~ 0 ° C) искусственной спинномозговой жидкостью на основе холина (ACSF).

    Примечание: Для срезов головного мозга и первоначальной инкубации (≤ 5 мин) использование холин-ACSF может помочь улучшить жизнеспособность срезов. Для фотопреобразования и записи используйте обычный ACSF.

    (3) Перенести каждый срез после разрезания в инкубационную камеру при 32°C на 5 мин в растворе, содержащем холин ACSF, насыщенном 95% O 2 /5% CO 2 .

    (4) Перенесите срезы в инкубационную камеру, содержащую обычный ACSF, при 32°C в течение 25 минут, а затем при комнатной температуре еще 30 минут перед использованием в экспериментах.

    Примечание: Срезы мозга, хранящиеся в ACSF, насыщенном 95% O 2 /5% CO 2 при комнатной температуре сохраняют жизнеспособность до ~6–8 часов.

    (G) Картирование цепи in vitro с помощью CaMPARI (длительность: 1–3 часа , рис. 5)

    CaMPARI можно использовать для картирования активности корковой цепи, управляемой оптогенетически определенными входными сигналами в срезах мозга (Zolnik et др., 2017). После разрезания окончания аксонов остаются функциональными и возбудимыми светом при экспрессии ChR2 (Petreanu et al., 2007; Cruikshank et al., 2010), что позволяет проводить in vivo -подобную оценку специфических входных путей. Кроме того, нейроны в острых срезах мозга обычно гиперполяризованы и минимально активны, что обеспечивает низкий фон для более надежного сигнала. В виде плоского среза срез мозга может быть равномерно освещен, что устраняет помехи из-за неравномерной интенсивности освещения. Результирующий паттерн постсинаптической активации в остром срезе головного мозга отражает функциональную связь с целевым путем. Контрольные эксперименты с теми же условиями стимуляции и освещения могут быть выполнены для измерения преобразования фона из зеленого в красный при отсутствии экспрессии ChR2 (см. рис. 4 в Zolnik et al., 2017).

    Примечание: Ряд фильтров и параметров стимуляции могут использоваться для картирования контуров с помощью ChR2 и CaMPARI. Например, эмиссионный фильтр Cy3 (~580/50 нм) включает пиковое флуоресцентное излучение красного CaMPARI (Fosque et al., 2015). Тем не менее, даже фильтр 650/50 нм работает для визуализации красного цвета CaMPARI, несмотря на очень сильно сдвинутую в красную сторону полосу излучения (Zolnik et al., 2017). Для визуализации зеленого CaMPARI идеально подходит фильтр FITC (~ 475/35 нм), подходящий для визуализации GFP или GCaMP.

    (1) Доставьте фиолетовый свет для оптогенетической стимуляции и фотоконверсии CaMPARI с помощью ртутной лампы X-cite мощностью 200 Вт (Excelitas Technologies, Миссиссауга, Онтарио, Канада) и пропускания света через полосовой фильтр 405/10 нм (Semrock, FF01-405). /10-25). В экспериментах с однофотонной визуализацией свет фотопреобразования/стимуляции доставляется объективом UPlanFL 4 × /NA 0,13.

    Измерьте интенсивность светового стимула с помощью измерителя оптической мощности Thor Labs (PM 200) и фотодиодного датчика, работающего в УФ-диапазоне (S120VC). Для экспериментов на рис. 5 мощность света составляла 120 мВт см 9 .0017 −2 при 405 нм. Этой интенсивности света достаточно для индукции конверсии и активации ChR2. Стимуляцию/конверсию и начальную флуоресцентную визуализацию проводили под однофотонным микроскопом через объектив 4×.

    Критический шаг: Перед применением протокола стимуляции необходимо получить базовые изображения как в красной, так и в зеленой волнах.

    Критический шаг: Если срезы будут использоваться для иммуноцитохимии [процедура (K) ], срезы головного мозга, полученные в режиме реального времени, должны быть отмечены перед фиксацией — это необходимо для сопоставления апостериорного изображения с иммуноокрашенным анти-CaMPARI срезом.

    Примечание : ChR2 неэффективно активируется при 405 нм (пиковая активация ~470 нм), поэтому может потребоваться более высокая интенсивность света или дополнительный свет при 470 нм, чтобы усилить возбуждение ChR2. Если для активации ChR2 использовать более сильный свет с длиной волны 405 нм, это повысит скорость преобразования CaMPARI (Zolnik et al., 2017), и, следовательно, может потребоваться корректировка продолжительности освещения.

    (2) Фотопреобразующие нейроны с 10 импульсами длительностью 15 мс, доставляемыми с частотой 10 Гц, за которыми следует световой импульс длительностью 5 с. Этот протокол, особенно 5-секундный световой импульс в конце последовательности стимулов, обеспечивает доставку фотоконверсионного света при повышении уровня кальция в постсинаптических нейронах-мишенях.

    (3) Для количественной оценки отношения красного/зеленого каждого нейрона необходимо двухфотонное изображение. Стандартная иммерсионная камера срезов головного мозга необходима для поддержания жизнеспособности срезов во время живых изображений для этих экспериментов.

    Примечание: В оптимальном случае этапы фотопреобразования и визуализации можно объединить, пропуская свет с длиной волны 405 нм через объектив, используемый в двухфотонной установке для визуализации. Тем не менее, световод, фильтр и коллиматор (Cairn Research, Faversham, UK) и линзы (Thorlabs, Newton, NJ, USA) также можно подавать на образец под углом, используя световод, фильтр и коллиматор (AC254-030-A-ML). , F = 30 мм).

    (H) Двухфотонная визуализация (длительность: 1–3 часа , рис. 5)

    (1) Используйте систему двухфотонного лазерного сканирования, оснащенную фемтосекундным импульсным лазером Chameleon Ti:Sapphire, управляемым пакетом программного обеспечения MES.

    (2) Настройте лазер на λ = 820 нм для возбуждения красной и зеленой флуоресценции CaMPARI.

    Примечание: Если у вас есть доступ к двухфотонной системе с широко перестраиваемым лазером, мы рекомендуем визуализацию зеленого цвета CaMPARI при λ = 980 нм и красного цвета CaMPARI при λ = 1040 нм.

    (3) Обнаружение флуоресценции в эпифлуоресцентном режиме с помощью иммерсионного объектива с водой (LUMPLFL 60 × /1,0 NA, Olympus, Гамбург, Германия), а также трансфлуоресценции и проходящего инфракрасного света с масляным иммерсионным конденсором (Olympus; 1,4 NA). Свет излучения можно разделить с помощью дихроичного зеркала на ~590–600 нм, а зеленый и красный сигналы отфильтрованы с использованием полосовых фильтров 525/50 и 650/50 соответственно.

    Примечание: Излучение красного CaMPARI достигает максимума при ~580 нм, поэтому фильтр, содержащий эту полосу флуоресценции, идеален, но будьте осторожны, чтобы не было просачивания от возбуждения зеленого CaMPARI.

    Критический шаг: Аккуратно обращайтесь со срезами при помещении их в камеру для записи, чтобы сохранить жизнеспособность клеток во время фотопреобразования.

    Внимание! Перед началом сбора изображений z-stack убедитесь, что срез остается в стабильном положении. Движение среза может исказить ваши изображения.

    (I) Хирургическая подготовка к экспрессии in vivo Cal-Light и CaMPARI: краниальное окно и головной постимплантат (длительность: 1–2 часа)

    (1) Выдержка >14 дней для экспрессии конструкций после операции.

    (2) Выполните шаги (1)–(4) модуля (E) .

    (3) Разрежьте скальп и соскоблите череп. Осторожно снимите фасцию и дайте черепу высохнуть на воздухе. Когда высохнет, поместите металлическую стойку для головы (наши изготавливаются на заказ, форма варьируется) на чистый и сухой череп. Затем используйте самоклеящийся полимерный цемент (RelyX Unicem, 3M ESPE), чтобы приклеить головную стойку на место.

    (4) После того, как цемент затвердеет, просверлите круговую краниотомию радиусом 3 мм вокруг места, куда ранее был введен вирус. Применяйте осторожное и медленное сверление без полной перфорации кости. Постоянно нанося стерильный PBS на кость, можно избежать нагревания и повреждения твердой мозговой оболочки. После истончения кости путем непрерывного сверления должна быть возможность удалить перфорированный кусок кости.

    Критический шаг: При сверлении внимательно следите за толщиной подлежащей кости. Избегайте повреждения твердой мозговой оболочки или головного мозга путем слишком сильного давления или непрерывного сверления и перегрева сверла и головного мозга. При необходимости промойте стерильным физиологическим раствором/PBS и удалите лишнюю жидкость абсорбирующими тампонами.

    (5) Подготовьте покровное стекло толщиной 3 мм, очистив его в 70% этаноле. Осторожно поместите покровное на ту часть мозга мыши, которая не покрыта трепанацией черепа. Используйте руку на стереотаксическом аппарате, чтобы расположить аппликатор с деревянным наконечником или зубочистку над покровным стеклом и слегка надавить, чтобы подтолкнуть покровное стекло к трепанации черепа и удерживать его на месте.

    (6) Нанесите суперклей на края покровного стекла и кости, чтобы зафиксировать покровное стекло в трепанации черепа, затем подождите, пока клей высохнет, и осторожно отсоедините деревянный наконечник от окна.

    Важный шаг: Будьте осторожны, чтобы не капнуть клеем на стекло, так как это ухудшит качество изображения.

    (7) Покройте головную стойку порошком Ortho-jet (Lang Dental, Black), чтобы заполнить все зазоры и повысить устойчивость.

    (8) Покройте стекло и область вокруг краниотомии силиконовым герметиком Kwik-Cast Sealant (WPI, World Precision Instruments).

    (9) Как только герметик затвердеет, примените анальгетики [см. процедуру (F) ], выньте мышь из стереотаксического аппарата и наблюдайте. Как только мышь проснется, поместите ее обратно в домашнюю клетку.

    (J) Фотостимуляция in vivo (длительность: 1–3 ч; рис. 3B, 6)

    Критический этап: Дайте мышам > 7 дней восстановиться из черепного окна и краниального штифта операция. Привыкайте мышей, обрабатывая и фиксируя их голову для увеличения продолжительности в несколько сеансов. Мышам можно давать вознаграждение (например, сладкое молоко), чтобы они чувствовали себя более комфортно в процессе привыкания. У мышей с фиксированной головой проверьте экспрессию конструкции и сделайте снимок с помощью эпифлуоресцентного микроскопа.

    Важный этап: Повторно наносите силикон Kwik-Cast всякий раз, когда герметик теряется или удаляется для микроскопии, чтобы избежать возможной нежелательной фотостимуляции через источники окружающего света.

    (1) Для основного сеанса фотостимуляции зафиксируйте голову мыши в установке для стимуляции и удалите герметик. Поместите кончик оптического волокна, подключенного к светодиодному источнику света, непосредственно на верхнюю часть стеклянного окна под углом 90°. Убедитесь, что световое пятно перекрывает область выражения.

    Внимание! Если мышь испытывает боль или сильный дискомфорт во время сеанса, остановите эксперимент и продлите период привыкания.

    (2) Фотостимуляция.

    • Для животных, экспрессирующих Cal-Light, настройте автоматический макроскрипт, который повторно запускает световой стимул с длиной волны 470 нм (ВКЛ), после чего следует интервал темноты (ВЫКЛ). Мы предлагаем применять либо 2 с ВКЛ/8 с ВЫКЛ, либо 1 с ВКЛ/4 с ВЫКЛ в течение 40–60 мин, что приводит к 8–12 мин общей подачи света. Световая мощность стимула должна быть ~ 20-30 мВт (измеряется на кончике оптического волокна).

    • Для CaMPARI настройте автоматический макрос, который повторно запускает световой стимул с длиной волны ~395–405 нм (ВКЛ), за которым следует интервал темноты (ВЫКЛ). Мы предлагаем применять либо 2 с ВКЛ/8 с ВЫКЛ, либо 1 с ВКЛ/4 с ВЫКЛ в течение 40–60 мин, что приводит к 8–12 мин общей подачи света. Световая мощность стимула должна быть ~ 20-30 мВт (измеряется на кончике оптического волокна).

    Внимание! Измеряйте интенсивность света на кончике волокна и используйте мощность света на поверхности < 30 мВт и внимательно следите за применением света, так как высокая мощность света может вызвать повреждение головного мозга!

    Примечание: Запускаемая Cal-Light экспрессия генов занимает 2–5 дней. Фотоконверсия CaMPARI происходит в течение нескольких секунд.

    (K) Иммуногистохимия CaMPARI (длительность: 2 дня; Рисунок 7)

    (1) После визуализации живых срезов головного мозга зафиксируйте их в фиксаторе на основе формальдегида (4%) при 4°C в течение ночи.

    Критический шаг: После фиксации формальдегидом можно сделать снимок для контроля отсутствия эндогенной экспрессии.

    Критический шаг: Будьте осторожны, чтобы не перепутать стороны среза мозга (верхняя, преобразованная и нижняя, не преобразованная сторона). Это важно для последующего анализа на конфокальном микроскопе.

    (2) Промойте срезы в забуференном фосфатом солевом растворе (PBS) и поместите в блокирующий раствор на 2 часа при комнатной температуре.

    Критический этап: Тщательно промойте срезы в PBS, чтобы убедиться, что соединения вымыты.

    (3) Инкубируйте срезы головного мозга в растворе, содержащем первичные антитела (CaMPARI 4F6, разведение 1:1000 в блокирующем растворе) при 4°C в течение ночи.

    (4) Расположите первичное антитело, промойте срезы в PBS перед инкубацией в растворе вторичного антитела (Alexa 633, козье антимышиное, Invitrogen A21050, в разведении 1:500 в блокирующем растворе) в течение 2 часов при комнатной температуре.

    (5) Удалите вторичное антитело, промойте срезы в PBS.

    (6) Поместите срезы в раствор для заливки (80% глицерин + 2,5% DAPCO в PBS) на обычное предметное и покровное стекло.

    Примечание: Иммуноокрашивание эндогенного CaMPARI в синий цвет (длина волны возбуждения 405 нм) может быть дополнено антителом Flag (Sigma F425), которое хорошо работает в культуре нейронов.

    Ожидаемые результаты

    Фотостимуляция в культуре нейронов

    После трансфекции культивируемые нейроны начинают экспрессировать CaMPARI в течение примерно 10 дней, что проявляется в виде зеленого флуоресцентного сигнала. Переходные процессы кальция в этих нейронах заметны как затемнение флуоресценции и возникают при увеличении сетевой активности (например, за счет блокирующего торможения и / или применения карбахола; см. Дополнительные видеофайлы 1, 2). Активные нейроны, экспрессирующие CaMPARI, превращаются из зеленого в красный при 39Свет 5 нм применяется во время активных состояний (дополнительные видеофайлы 1, 2 и рисунок 4).

    Культивируемые нейроны экспрессируют Cal-Light в течение примерно 10 дней, на что указывает красный флуоресцентный сигнал через экспрессию tdTomato. Когда активность сети увеличивается (например, за счет блокирования ингибирования и/или применения карбахола), активные нейроны, экспрессирующие Cal-Light, фотоактивируются и экспрессируют GFP в течение 2–5 дней после воздействия света с длиной волны 470 нм (рис. 4).

    Картирование цепей в острых срезах головного мозга

    Через две-три недели после инъекции вируса нейроны начинают экспрессировать CaMPARI. На этом этапе можно приготовить ex vivo срезов мозга, в которых нейроны, экспрессирующие зеленый цвет CaMPARI, должны быть видны как при однофотонном, так и при двухфотонном возбуждении. Эксперименты по картированию цепей с применением света 405 нм затем выявляют постсинаптические мишени аксонных волокон, экспрессирующих ChR2, посредством фотоконверсии CaMPARI из зеленого в красный (рис. 5).

    Фотостимуляция

    in vivo

    Через две-три недели после инъекции вируса нейроны начинают экспрессировать Cal-light или CaMPARI. Это выражение (зеленый CaMPARI или красный Cal-Light) видно через черепное окно с помощью эпифлуоресцентной микроскопии (рис. 3B). В этот момент применяется фотостимуляция in vivo у привыкших к неподвижной голове спокойно сидящих мышей. После фотостимуляции переход от зеленой к красной флуоресценции должен появиться в течение нескольких секунд в случае CaMPARI (рис. 3B) или дополнительная зеленая флуоресценция должна появиться через 2–5 дней в случае Cal-Light. Затем подготовка и визуализация срезов или срезов мозга покажет отдельные нейроны, которые были помечены (рис. 3B, 6).

    Иммуногистохимия

    Иммуноокрашивание восстанавливает красный сигнал CaMPARI в фотопреобразованных нейронах, который гасится после фиксации (рис. 7). После этапов иммуноокрашивания отдельные преобразованные и непреобразованные нейроны можно различить на основе их экспрессии, преобразования, ламинарной локализации и других анатомических особенностей.

    Доступность данных

    Все наборы данных, созданные для этого исследования, включены в рукопись и/или дополнительные файлы.

    Заявление об этике

    Мы выполнили все процедуры в соответствии с протоколами, одобренными Charité—Universitätsmedizin Berlin и Berlin Landesamt für Gesundheit und Soziales (LAGeSo) по уходу и использованию лабораторных животных.

    Вклад авторов

    CE, SD, PT, PP, BE, IV, ML и RS разработали исследование. CE, JL, TZ, SD и AP проводили эксперименты. CE, JL, PT и RS написали статью. Все авторы прочитали и отредактировали текст, внесли свой вклад в доработку рукописи и одобрили представленную версию.

    Финансирование

    Следующие источники финансирования поддержали этот проект: (1) Deutsche Forschungsgemeinschaft (Exc 257 NeuroCure Ph.D. Fellowship to CE; Exc 257 NeuroCure International Visiting Fellowship to PP; Грант № 2112280105 для ML; Грант № LA 3442/3-1 и грант № LA 3442/5-1 на ML), (2) Европейский исследовательский совет (ERC StG ​​311435 на PP; исследовательская и инновационная программа Horizon 2020 Европейского Союза и программа исследований и обучения Евратома на 2014–2018 гг. , по соглашению о гранте № 670118 для ML), (3) Human Brain Project (Грант ЕС 720270, HBP SGA1 и SGA2, Контекстно-зависимое мультисенсорное распознавание объектов: модель глубокой сети, ограниченная многоуровневыми многовидовыми данными для ML ), (4) Фонд Эйнштейна в Берлине.

    Заявление о конфликте интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Благодарности

    Мы хотели бы поблагодарить Александра Шилла, Яна-Эрика Оде и Даниэля Деблица из Charité Workshop за техническую помощь; Thorsten Trimbuch, Anke Schönherr и Bettina Brokowski из Viral Core Facility of the Charité (vcf.charite.de) за производство вирусов; Фридриху Йохеннингу и лаборатории Шмитца за использование двухфотонной системы Femtonics; Ян Шморанцер и лаборатория Charité AMBIO за обучение и использование широкоугольной установки для визуализации и Марти Риттер за помощь во время экспериментов по фотостимуляции клеточных культур. Мы также хотели бы поблагодарить Eric Schreiter и Hyung-Bae Kwon за комментарии к более ранней версии этой рукописи.

    Дополнительный материал

    Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www. frontiersin.org/articles/10.3389/fnsyn.2019.00016/full#supplementary-material

    Дополнительные видеофайлы 1 и 2. Фотоконверсия клеток, экспрессирующих CaMPARI, в культуре нейронов с использованием широкопольной эпифлуоресцентной визуализации. Мгновенное затухание флуоресценции указывает на события с интенсивным использованием кальция. Видео содержит 60 кадров, каждый из которых снят перед 5-секундным импульсом из 39 кадров.свет 5 нм. Зеленый и красный каналы изображения объединены. Видео 1 с объективом 10× и видео 2 с объективом 20×.

    Ссылки

    Andermann, M.L., Gilfoy, N.B., Goldey, G.J., Sachdev, R.N., Wölfel, M., McCormick, D.A., et al. (2013). Хроническая клеточная визуализация целых столбцов коры бодрствующих мышей с использованием микропризм. Нейрон 80, 900–913. doi: 10.1016/j.neuron.2013.07.052

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Барт, А.Л. (2007). Визуализация цепей и систем с использованием трансгенных репортеров нейронной активности. Курс. мнение Нейробиол. 17, 567–571. doi: 10.1016/j.conb.2007.10.003

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Каззулино А.С., Мартинес Р., Томм М.К. и Денни К.А. (2016). Улучшена специфичность маркировки следов памяти гиппокампа. Гиппокамп 26, 752–762. doi: 10.1002/hipo.22556

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Круикшанк С.Дж., Урабе Х., Нурмикко А.В. и Коннорс Б.В. (2010). Цепи прямой связи между таламусом и неокортексом, специфичные для путей, выявляемые с помощью избирательной оптической стимуляции аксонов. Нейрон 65, 230–245. doi: 10.1016/j.neuron.2009.12.025

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    ДеНардо, Л., и Луо, Л. (2017). Генетические стратегии доступа к активированным нейронам. Курс. мнение Нейробиол. 45, 121–128. doi: 10.1016/j.conb.2017.05.014

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Догбевиа Г. К., Мартикорена-Альварес Р., Баузен М., Шпренгель Р. и Хасан М. Т. (2015). Индуцируемые и комбинаторные манипуляции с генами в мозгу мышей. Фронт. Клетка. Неврологи. 9:142. doi: 10.3389/fncel.2015.00142

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Фоск Б.Ф., Сун Ю., Дана Х., Ян К.Т., Охьяма Т., Тадросс М.Р. и др. (2015). Маркировка активных нейронных цепей in vivo с помощью разработанных интеграторов кальция. Наука 347, 755–760. doi: 10.1126/science.1260922

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Гринберг, М. Э., Зифф, Э. Б., и Грин, Л. А. (1986). Стимуляция нейрональных ацетилхолиновых рецепторов вызывает быструю транскрипцию генов. Наука 234, 80–83. doi: 10.1126/science.3749894

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Кавасима Т., Окуно Х. и Бито Х. (2014). Новая эра функциональной маркировки нейронов: активно-зависимые промоторы достигли совершеннолетия. Фронт. Нейронный. Схемы 8:37. doi: 10.3389/fncir.2014.00037

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ко, Х., Хофер, С. Б., Пихлер, Б., Бьюкенен, К. А., Шёстрём, П. Дж., и Мрсик-Флогель, Т. Д. (2011). Функциональная специфика локальных синаптических связей в сетях неокортекса. Природа 473, 87–91. doi: 10.1038/nature09880

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Ли Д., Хён Дж. Х., Юнг К., Ханнан П. и Квон Х. Б. (2017). Кальций- и светочувствительный переключатель, вызывающий экспрессию генов в активированных нейронах. Нац. Биотехнолог. 35, 858–863. doi: 10.1038/nbt.3902

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Лиен А. Д. и Сканциани М. (2011). Маркировка In vivo созвездий функционально идентифицированных нейронов для целевых записей in vitro . Фронт. Нейронный. Схемы 5:16. doi: 10.3389/fncir.2011.00016

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Мансуй И. М., Уиндер Д. Г., Моаллем Т. М., Осман М., Мэйфорд М., Хокинс Р. Д. и др. (1998). Индуцируемая и обратимая экспрессия генов с помощью системы rtTA для изучения памяти. Нейрон 21, 257–265. doi: 10.1016/S0896-6273(00)80533-4

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Moeyaert, B., Holt, G., Madangopal, R., Perez-Alvarez, A., Fearey, B.C., Trojanowski, N.F., et al. (2018). Улучшенные методы маркировки активных популяций нейронов. Нац. коммун. 9:4440. doi: 10.1038/s41467-018-06935-2

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Морган, Дж. И., и Карран, Т. (1986). Роль потока ионов в контроле экспрессии c-fos. Природа 322, 552–555. doi: 10.1038/322552a0

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Питер М., Бателье Б., Фонтинья Б., Плиота П., Хаубенсак В. и Румпель С. (2013). Модели трансгенных мышей, позволяющие фотомаркировать отдельные нейроны in vivo . PLoS ONE 8:e62132. doi: 10.1371/journal.pone.0062132

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Петряну Л., Хубер Д., Собчик А. и Свобода К. (2007). Картирование цепей дальних мозолистых проекций с помощью Channelrhodopsin-2. Нац. Неврологи. 10, 663–668. doi: 10.1038/nn1891

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Пологруто Т. А., Ясуда Р. и Свобода К. (2004). Мониторинг нейронной активности и [Ca2+] с помощью генетически закодированных индикаторов Ca2+. J. Neurosci. 24, 9572–9579. doi: 10.1523/JNEUROSCI.2854-04.2004

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Сабатини Б.Л., Ортнер Т.Г. и Свобода К. (2002). Жизненный цикл ионов Ca(2+) в дендритных шипиках. Нейрон 33, 439–452. doi: 10.1016/S0896-6273(02)00573-1

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Шэн М. и Гринберг М. Э. (1990). Регуляция и функция c-fos и других непосредственных ранних генов в нервной системе. Нейрон 4, 477–485. дои: 10.1016/0896-6273(90)-P

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Турко П., Гроберман К., Брова Ф., Кобб С. и Вида И. (2019). Дифференциальная зависимость ГАМКергических и глутаматергических нейронов от глии для установления синаптической передачи. Церебр. Кора 29, 1230–1243. doi: 10.1093/cercor/bhy029

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Ван В., Ким С. К. и Тинг А. Ю. (2019). Молекулярные инструменты для визуализации и регистрации активности нейронов. Нац. хим. биол. 15, 101–110. doi: 10.1038/s41589-018-0207-0

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Вейлер С., Бауэр Дж., Хюбенер М., Бонхёффер Т., Роуз Т. и Шойсс В. (2018). Высокопроизводительные 90 809 записей in vitro 90 810 из нейронов, функционально охарактеризованных 90 809 in vivo 90 810. Нац. протокол 13, 1275–1293. doi: 10.1038/nprot.2018.026

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Яп, Э. Л., и Гринберг, М. Э. (2018). Транскрипция, связанная с активностью: преодоление разрыва между нейронной активностью и поведением. Нейрон 100, 330–348. doi: 10.1016/j.neuron.2018.10.013

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Зольник Т. А., Ша Ф., Йохеннинг Ф. В., Шрайтер Э. Р., Лугер Л. Л., Ларкум М. Э. и др. (2017). Полнооптическое картирование функциональных синаптических связей в острых срезах головного мозга с использованием интегратора кальция CaMPARI. Ж. физ. 595, 1465–1477. doi: 10.1113/JP273116

    PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Хэллоуин… вдохновляющие (и жуткие идеи коктейлей и моктейлей)

    Next Story

    из журнала «Bar and Kitchen Magazine #7»

    Следите за… вдохновляйтесь

    Жуткие блюда

    Хэллоуин — отличный шанс творить

    Приготовьте напиток Приготовьте напиток с ромом и фруктовым вкусом с ромовым и фруктовым вкусом Подавайте со вкусом Подавайте в хайболе стакан или получить хайбол или проявить творческий подход с мини-творчеством с мини-котлами Котел-скелет! Рука-скелет по желанию… рука по желанию…

    Ингредиенты

    • 50 мл «Пальцы мертвеца» • 50 мл «Пальцы мертвеца»

    Малиновый ром Малиновый ром • 60 мл клюквенного сока • 15 мл Куантро • 10 мл сока лайма • 3 ягоды клубники • Клубника для украшения

    Добавить все. ингредиенты кроме гарнира в шейкер со льдом. Встряхнуть. 2. Перелейте в стакан или казан и украсьте нарезанной клубникой.

    WITCHES’ Brew Sunrise WALKING DEAD

    Попробуйте новую версию классической текилы Sunrise с ромом из манго. Этот инстаграмный коктейль обязательно заставит людей говорить. Убедитесь, что вы разместили его фотографию, чтобы рекламировать вечеринку в честь Хэллоуина.

    Ингредиенты

    • 50 мл «Пальцы мертвеца»

    Ром с манго • 20 мл лимонного сока • 20 мл апельсинового сока • 30 мл сока манго • Конфеты Skewed Eye Ball и конфеты Skewed Eye Ball и шприц, наполненный Кампари Шприц, наполненный Кампари, для выдавливания в напиток для a для добавления в напиток для создания кровавого эффекта, для украшения

    Способ

    1. Возьмите высокий стакан и наполните его льдом. 2. Добавьте ром и соки и перемешайте. 3. Добавьте украшения и подавайте. Пусть клиенты сжимаются, как кровь, сжимаются, как кровь,

    Сами Кампари!

    Идеально подходит для детей

    Включите это в меню ваших детей на неделю Хэллоуина — как в 2019 году

    84%

    потребителей на вечеринке загружают фотографии в социальные сети, поэтому убедитесь, что ваши коктейли выглядят потрясающе!

    Источник: CGA

    HEY Y’ALL

    BERRY Fang

    Простой безалкогольный коктейль, который легко приготовить, но который выглядит увлекательно для детей.

    При желании предложите лимонад без сахара.

    Ингредиенты

    • Лимонад • Небольшая капля синего пищевого красителя • Малиновый сироп • Сладкие зубы или аналогичный для украшения

    Метод

    1. Наполните стакан хайбол кубиками льда и лимонадом. 2. Добавьте немного синего пищевого красителя и перемешайте. 3. Выдавите малиновый сироп на край стакана. 4. Проткните соломинку через конфету и добавьте в стакан.

    Украсить большим количеством сиропа.

    Tennessee Fire — это

    Jack Daniel’s с коричным ликером, который придает напитку согревающий эффект. Кроме того, сочетание апельсина и корицы пахнет невероятно.

    Ингредиенты

    • 35 мл Jack Daniel’s

    Tennessee Fire • 15 мл апельсина кюрасао • 2 дэша апельсинового биттера • 125 мл крем-соды • Долька апельсина и поджаренный зефир для украшения

    Метод

    Наполните высокий стакан. стакан с кубиками льда. с кубиками льда. 2. Добавьте Jack

    Daniel’s, кюрасао, биттер и крем-соду и аккуратно перемешайте. и осторожно перемешайте. 3. Украсьте долькой апельсина и маршмеллоу.

    «Сильнее всего продажи спиртных напитков, как правило, растут на Хэллоуин: продажи в среднем по стоимости выросли на 57% по сравнению со средним аналогичным днем ​​​​в 2018 году. Напротив, продажи пива выросли всего на 27%, что говорит о том, что ночь Хэллоуина — это событие с высокой скоростью. который лучше подходит для шотов, бомб и коктейлей, чем для лонгдринков»

    Источник: CGA

    Diablo EL

    Огненный коктейль со сладким послевкусием. Украсьте коктейль милыми клыками, глазными яблоками или змеями, чтобы придать ему устрашающий вид.

    Ингредиенты

    • 40 мл эль Jimador Reposado 40 мл el Jimador Reposado • 10 мл Chambord 10 мл Chambord • Сок 2 долек лайма Сок 2 долек лайма плюс 1 долька для гарнира плюс 1 долька для гарнира • Имбирное пиво, для доливки Имбирное пиво, для пополнения

    Наполните стакан хайбол кубиками льда.

    Добавить текилу,

    Шамбор и сок лайма. Смешивание.

    Долейте имбирным пивом и подавайте с долькой лайма.

    Метод

    1. Наполните хайбол кубиками льда. 2. Добавьте текилу,

    Chambord и сок лайма. Смешивание. 3. Долейте имбирного пива и подавайте с долькой лайма.

    КОШМАР В

    Изысканный коктейль для тех, кто любит негрони, популярный итальянский аперитив. Этот напиток на основе джина предлагает что-то менее сладкое с добавлением кофеина, чтобы предложить что-то менее сладкое с добавлением кофеина, чтобы довести клиентов до колдовского часа. Призрак перенесет клиентов в ведьмин час. Напугайте стакан мини-черепом или желейным глазным яблоком!

    Ingredients

    • 25ml Whitley Neill

    Original Handcrafted

    Dry Gin • 25ml Martini Fiero • 10ml Campari • 25ml cold brew coffee • A slice of orange, to garnish

    25ml cold brew coffee

    Method

    1. Смешать все ингредиенты в предварительно охлажденном бокале рокс со льдом. 2. Украсить долькой апельсина.

    НЕ ЗАБУДЬТЕ

    Вы также можете предложить эти коктейли на вынос или в наборах для домашнего приготовления тем клиентам, которые устраивают вечеринки дома.

    Amazon Fresh, когнитивное искажение, безопасность пищевых продуктов и кролики-шприцы — Джулия Глотц

    Привет!

    Вот моя любимая еда и напитки за последнюю неделю. Надеюсь, они вам понравятся.

    Недавно вышел последний выпуск The Pick List. На этой неделе к нам присоединилась Микаэла Хэззледин , руководитель отдела по работе с клиентами в Finnebrogue Artisan , чтобы обсудить Международный женский день в пищевой промышленности, «пеганизм» и почему Tesco продает грязную картошку, чтобы уменьшить количество пищевых отходов. Вы можете послушать здесь.

    Хороших выходных.

    Джулия

    Что привлекло мое внимание на этой неделе

    Почему Amazon Fresh может разделить центральную улицу:  Поскольку онлайн-покупки и смартфоны распространены практически повсеместно, вход в систему у дверей магазина может показаться не таким уж важным. Но для розничной торговли это важный шаг к тому, чтобы магазины стали зонами только для членов, где потребители идентифицируются лично, а данные собираются так же тщательно, как и в Интернете. Архитектура слежки капитализма прибыла на главную британскую улицу.  [New Statesman]

    Продовольственные и агротехнические компании выходят на публичные рынки:  Ранние инвесторы и венчурные капиталисты уже несколько лет вкладывают свои деньги в стартапы в сфере пищевой и агротехнологической отрасли в поисках новаторов. Но, по данным компании PitchBook, листинги фондовых бирж в отрасли выросли почти в восемь раз и превысили 31 млрд долларов в 2020 году. Высокий спрос на устойчивые инвестиции в сочетании с повальным увлечением США специализированными компаниями по приобретению компаний, которые покупают объекты, чтобы сделать их публичными, означает, что в 2021 году этот процесс, вероятно, ускорится9.0038   [FT]

    Кибератака на Molson Coors:  В отчете регулирующих органов США в четверг пивоваренный гигант заявил, что столкнулся с инцидентом кибербезопасности, который нарушил производство и распространение. Компания наняла судебно-медицинскую ИТ-фирму для расследования нарушения и предупредила о возможных задержках поставок. Компания не предоставила дополнительных сведений о кибератаке, но некоторые эксперты по безопасности называют инцидент атакой программы-вымогателя. В ноябре компания Campari Group, известный итальянский поставщик напитков, стоящий за такими брендами, как Campari, Cinzano и Appleton, подверглась атаке программы-вымогателя, которая уничтожила большую часть ее ИТ-сети.  [ZDNet]

    Услада для глаз:  Последний магазин Edeka Brehm в берлинском районе Целендорф впечатляет и показывает, что розничная торговля, основанная на опыте, по-прежнему актуальна. Статья на немецком, но картинки говорят сами за себя. [Lebensmittelzeitung]

    Как правильно совершать гибридные покупки:  Ориентировано на США и бум служб самовывоза, но с уроками, которые можно применить в более широком плане. Некоторое ожидание неизбежно. Но, говорит Майк Робинсон, который раньше руководил цифровыми операциями в Macy’s, крупной сети универмагов, время в очереди не должно быть потрачено впустую. Постоянных клиентов можно соблазнить другими предложениями, от рекламных акций до новых продуктов, точно так же, как вы могли бы взять плитку шоколада, ожидая у кассы. По словам г-на Робинсона, это «идеальное время» для привлечения покупателей.  [The Economist]

    Поддержка вертикально выращенной клубники:  Вертикальная фермерская компания Oishii привлекла 50 млн долларов на расширение своей флагманской фермы недалеко от Нью-Йорка. В отличие от большинства компаний, которые в настоящее время занимаются вертикальным земледелием, Oishii не выращивает стандартную листовую зелень и травы. Вместо этого компания выращивает клубнику, в частности, сорт Омакасе.  [The Spoon]

    Упражнения против диеты:  Новое исследование детей в Эквадоре показывает, что то, что мы едим, оказывает гораздо большее влияние на наш вес, чем физические упражнения. Углубленное исследование показало, что сельские дети, которые часами бегают, играют и собирают пищу, стройнее и активнее, чем их городские сверстники. Но они не сжигают больше калорий изо дня в день, и это удивительное открытие указывает на то, что модернизированный рацион городских детей способствует увеличению их веса. Полученные данные также поднимают провокационные вопросы о взаимосвязи физической активности и обмена веществ, а также о том, почему физические упражнения так мало помогают в снижении веса не только у детей, но и у всех нас.  [Нью-Йорк Таймс]

    Италия и Словения спорят из-за бальзамического уксуса:   На этой неделе Рим направил в Европейскую комиссию свое мнение по поводу проекта словенского закона о правилах пищевых продуктов, о котором Брюссель получил уведомление в декабре. сказать, «вырвет» из-под них рынок стоимостью 1 миллиард евро и даст толчок рынку подделок.  [Politico]

    Как когнитивные предубеждения влияют на безопасность пищевых продуктов:  Исследователи из Университета Миссури проанализировали серьезные нарушения безопасности пищевых продуктов через призму поведенческой этики и обнаружили, что неосознанные предубеждения могут усугубить вспышки болезней пищевого происхождения. «Неэтичное поведение не всегда преднамеренно; конфликты интересов и другие бессознательные мотивы могут привести к тому, что люди будут вести себя таким образом, что это способствует возникновению и распространению вспышек. […] Если мы сможем понять, что побуждает владельца магазина открываться слишком рано или производителя продуктов питания срезать углы, то мы сможем разработать более совершенную политику и правила, которые подталкивают людей в правильном направлении, не ограничивая их свободы».  [New Food Magazine]

    У траппистских пивных брендов заканчиваются монахи:   Для того, чтобы получить статус «Подлинный продукт траппистов» — который требует надбавки к цене, а также имеет историческую ценность — должны быть задействованы настоящие монахи. Ситуация в аббатстве Святого Бенедикта в Хамонт-Ашеле, Бельгия, стала настолько плохой, что в январе оно отказалось от этикетки Authentic для своего пива Achel, известного своим солодовым и фруктовым вкусом, потому что не осталось монахов, контролирующих производство.  [WSJ]

    Brain Candy

    Миссия ImPASTAble:  Новая серия подкаста Sporkful рассказывает о кулинарном писателе, выполнявшем его трехлетнюю миссию по созданию нового типа пасты и ее коммерческому производству. [Прослушать заметки]

    Тени для век Guac:  Сеть ресторанов быстрого питания Chipotle объединилась с косметическим брендом e.l.f для создания коллекции косметики, вдохновленной ингредиентами этой сети. Возьмите тени для век «гуак» и «коричневый рис», блеск для губ цвета сальсы и косметичку, похожую на чипсы из тортильи. Это часть стремления Chipotle привлечь больше потребителей поколения Z. [Глянцевый]

    Кролики с вакциной: Венгерский кондитер создал шоколадных пасхальных кроликов на тему пандемии, держащих в руках шприцы. Римоци сказал, что вакцины, изготовленные из высококачественного итальянского шоколада и обсыпанные порошком серебряного пищевого красителя, сигнализируют о том, что есть выход из пандемии коронавируса.  [Reuters]

    Увидимся на следующей неделе!

    Кексы, вдохновленные коктейлем Ширли Темпл — выпечка с посыпкой

    Хизер Бэрд Кексы

    Безалкогольный коктейль Ширли Темпл имеет репутацию очень сладкого напитка, поэтому неудивительно, что он хорошо превращается в кекс. Еще мне очень нравится взрослый коктейль Shirley Temple Black , в котором есть все ингредиенты оригинальной версии, но с шотом Калуа (или Кампари. Или темного рома, кто-то поспорит). Итак, я решила приготовить эти кексы в обоих направлениях.

    Маленькие милые бантики на капкейках — это сувениры на день рождения в виде пластиковых колец. Я думаю, они делают очаровательные топперы для кексов Ширли Темпл. Чтобы различать два вкуса кексов, я обозначил безалкогольные кексы розовым бантиком, а кексы со вкусом калуа — черным бантиком.

    .2325

    Честно говоря, я не уверен, какая версия мне нравится больше. Оба совершенно разные и вкусные. Гренадин играет огромную роль во вкусе красивой розовой глазури, которая идет на оба вида кексов. Большинство гренадин приправлено соком граната или черной смородины, поэтому вы можете ожидать фруктово-ягодный сладко-терпкий вкус. Я использовал содовую Sprite в тесте для кексов, которая придает выпечке очень тонкий аромат, который трудно уловить, но все это работает вместе , так что очень хорошо по вкусу. Если вы предпочитаете использовать имбирный эль в своих Ширли Темплс, то вы, безусловно, можете заменить имбирный эль в тесте для торта.

    Итак, эта часть процесса почему-то казалась немного ненормальной. Вы буквально даете кексам дозу гренадина из шприца! Эти ароматизирующие инъекторы обычно используются для введения маринадов в индейку на День Благодарения, но я люблю использовать их, чтобы придать капкейкам сладкий вкус в их центрах. Шприцы недорогие, и вы можете найти их в Интернете здесь. Большинство шприцев имеют металлические наконечники игл, но если вы можете найти шприц с пластиковой иглой, они отлично подходят для инъекций кексов и менее опасны при нарезке в вашем ящике для мелочей.

    Черные кексы Ширли Темпл обрабатывались таким же образом. Вместо гранаты каждый получил выстрел Калуа в центр. Это было так хорошо! Они могут быть моими любимыми из двух. Возможно. Трудно сказать наверняка, поэтому необходимо больше дегустации (подмигивание).

    Одно можно сказать наверняка, ничто не сравнится с тем, чтобы откусить один из них и обнаружить, что внутри есть нечто большее, чем просто торт. Введенные сиропы делают торт таким влажным и ароматным.

    Важное замечание: Не переполняйте кексы гренадином или калуа. Я использовала только одну чайную ложку в каждом из своих тортов. Если вы используете слишком много жидкости, она полностью пропитает дно формы для кексов, и тогда у вас на руках будет беспорядок. Или на красивой белой скатерти.

    Их действительно легко приготовить, и если у вас нет шприца для введения ароматизатора, вы можете вырезать небольшую ямку на верхушке каждого кекса и сбрызнуть сиропом ложкой.

    Когда наступит время вечеринки, я обязательно подам эти кексы вместе с их коктейльными аналогами. Я включил рецепты напитков в этот пост, если вы хотите сделать то же самое.

    Хизер Бэрд

    Этот рецепт написан исходя из того, что вы хотите приготовить кексы Ширли Темпл и Черные кексы Ширли Темпл. Если вы хотите приготовить целую партию оригинальных коктейльных кексов Ширли Темпл, просто замените Калуа на гренадин, а для всей партии кексов Ширли Темпл Блэк — наоборот. Я люблю украшать свои кексы величественной глазурью, но не всем нравится столько на одном кексе. Смело берите половину рецепта масляного крема Гренадин.

    5 Из 1 голоса

    Рецепт рецепта печати

    Время приготовления 35 мин

    Время приготовления 22 мин

    Общее время 57 мин

    Курс Десерт

    Cuisine American

    88888888888 гг. /113 г сливочного масла размягченного
  • 1 стакан/200 г сахарного песка
  • 2 яйца
  • 1 3/4 стакана/ 223 г универсальной муки
  • 1/2 ч.л. пищевой соды
  • 1/4 ч.л. ложка соли
  • 1/2 стакана/122 г сметаны
  • 1/2 стакана/4 унции. Безалкогольный напиток «Спрайт» или имбирный эль
  • 1/4 стакана гренадина
  • 1/4 стакана ликера Калуа
  • Масляный крем «Гренадин»
    • 1 фунт/452 г несоленого сливочного масла, размягченного
    • 3 2 фунта
    • 1 шт. пакетиков/ 453 г сахарной пудры
    • 3-4 ст.л. гренадина или больше по вкусу
    • Молоко или жирные сливки при необходимости
    • 15 вишен мараскино
    • Белые непареи для посыпки
    Торт
    • Разогрейте духовку до 350 градусов.

    • Застелите одну форму для кексов 12 бумажными вкладышами, а другую – тремя вкладышами. Я использовала 8 розовых вкладышей для обычных кексов Ширли Темпл и 7 черных вкладышей для кексов Ширли Темпл Блэк. Отложите.

    • В чаше стационарного миксера с насадкой-лопаткой взбейте масло и сахар до легкой и воздушной массы. Добавляйте яйца по одному, хорошо взбивая после каждого добавления. Смешайте муку, пищевую соду, разрыхлитель и соль, отложите в сторону. В средней миске смешайте 1/2 стакана содовой Sprite и 1/2 стакана сметаны (смесь будет шипеть и немного пузыриться). Поочередно добавляйте смесь муки и спрайта, начиная и заканчивая мукой.

    • Наполните бумагу для кексов 1/4 стакана теста. Выпекать 17-22 минуты. Дать кексам полностью остыть. Когда кексы остынут, наполните шприц для ароматизации примерно 1 чайной ложкой гренадина. Поместите иглу в центр кекса и нажмите на поршень, осторожно вытягивая иглу вверх и из кекса. Повторите еще с 7 кексами. Промойте шприц и повторите процесс с Калуа и оставшимися кексами. Отложите кексы в сторону, пока вы готовите глазурь.

    Сливочный крем Grenadine
    • Смешайте сливочное масло и сахарную пудру в стационарном миксере, оснащенном насадкой-венчиком. Начинайте смешивать на низкой скорости, пока смесь не станет рассыпчатой, а затем увеличьте скорость до высокой и взбивайте в течение 5 минут. Уменьшите скорость миксера до низкой и добавляйте гренадин по 1 столовой ложке за раз; добавьте больше гренадина по вкусу, если хотите. Снова взбивайте глазурь еще 5 минут, пока она не станет легкой и воздушной. Очистите миску и снова перемешайте на максимальной скорости в течение 3 минут.

    • Если вы обнаружите, что масляный крем слишком густой, вы можете добавлять молоко или жирные сливки по 1 столовой ложке за раз, пока смесь не станет однородной. Переложите глазурь в кондитерский мешок с большой закрытой звездообразной насадкой, такой как Ateco #856. Выдавите глазурь на каждый капкейк двумя большими завитками и украсьте каждый вишенкой мараскино. Посыпьте белые нонпарели.

    • Храните кексы неплотно накрытыми полиэтиленовой пленкой или в пластиковом держателе для кексов.

    Рецепт коктейля Ширли Темпл с вариациями

    Выход: 1 порция

    6 унций лимонно-лаймовая газировка, например Sprite (можно использовать имбирный эль)

    1 1/2 столовые ложки гренадин Мараскино вишня для украшения

    Налейте лимонно-лаймовую газировку в стакан Collins, наполненный льдом. Добавьте гренадин. Украсьте вишенкой и красивой соломинкой. Перемешайте напиток непосредственно перед глотком. Черный вариант Ширли Темпл: добавьте от 1 до 2 унций. Калуа и дополнительная вишня.

    Ключевое слово Гренадин масляный крем

    Пробовали этот рецепт? Расскажите, как получилось!

    Поделиться: