Loewe транскрипция: Произношение Loewe: Как произносится Loewe (язык: испанский, немецкий)

Содержание

Loewe Aura — описание аромата, отзывы и рекомендации по выбору

Бренд: «Loewe».
Аромат: «Aura».
Семейство: восточные, ориентальные, цветочные.
Пол: женский, pour femme.
Год выпуска: 1994.
Парфюмер:
Начальные ноты: дыня, бергамот, мандарин, белая фрезия, белый персик.
Ноты сердца: гардения, майская роза, пармская фиалка, ирис.
Базовые ноты: серая амбра, бобы тонка, сандал, мускус, бензоин, перуанский бальзам, ваниль.
Исполнение аромата: парфюмерная вода.
Характеристика аромата: импульсивный, проникновенный, рациональный, хрупкий, деликатный.
Для какого возраста: для молодёжи, среднего и элегантного возраста.
Знаки Зодиака: Овен, Телец, Близнецы, Рак, Лев, Дева, Весы, Скорпион, Стрелец, Козерог, Водолей, Рыбы.
Стойкость аромата: средняя.
Шлейф аромата: ярко выраженный.
Для какого времени года: зима, весна, осень.
Для какого времени суток: день, вечер.
Русская транскрипция названия: «лоу аура», «аура от лоу».

Описание Loewe Aura
Инфографика аромата
Фото рекламы духов
Духи, похожие на Aura
Другие ароматы бренда Loewe
Духи, близкие по названию
Купить аромат со скидкой в «Л’Этуаль»
Купить парфюм со скидкой в «Золотое яблоко»
Купить духи со скидкой в «Иль де Ботэ»

Ароматы со скидкой

В этой секции ведущие ритейлеры парфюмерии представляют ряд «топовых» ароматов, способных подчеркнуть вашу индивидуальность и стать удачным дополнением к современному имиджу:

Если какой-либо из парфюмов покажется вам заслуживающим внимания, вы можете получить более подробную информацию о нём и его акционной цене, пройдя по соответствующей ссылке…

Описание аромата Loewe Aura

«Aura» — аромат для женщин, выпущенный брендом «Loewe» в 1994 году. Современные классификаторы относят данную парфюмерную композицию к классам восточных, ориентальных и цветочных. Как сообщается в официальном пресс-релизе, самыми узнаваемыми оттенками этого творения парфюмера стали: в начальных нотах — белый персик, мандарин, бергамот, дыня и белая фрезия; в нотах «сердца» — гардения, майская роза, пармская фиалка и ирис; в нотах базы — бензоин, сандал, бобы тонка, ваниль, мускус, серая амбра и перуанский бальзам.

В ходе проведения независимого опроса, зарубежным изданием «Flavors & Fragrances» были собраны отзывы потребителей об аромате «Loewe Aura». Участников интервью просили дать субъективную оценку данной парфюмерной композиции по целому ряду ключевых характеристик, среди которых были первое впечатление от аромата, величина стойкости и наличие шлейфа, а так же сезонная, временная и возрастная направленность.

На основании полученных данных можно заметить, что подавляющее большинство опрошенных сходится в следующем мнении: аромат «Aura» от «Loewe» имеет нормальную стойкость, в среднем — от 3 до 6 часов, и сильный, обволакивающий шлейф. Дополнительно отмечается, что предмет обсуждения станет идеальным выбором в холодное, прохладное время года или в межсезонье для молодёжи, лиц среднего и элегантного возраста в дневное или вечернее время. Самые положительные отзывы об аромате «Loewe Aura» были получены от потребителей, принадлежащих к следующим знакам Зодиака: Овен, Телец, Близнецы, Рак, Лев, Дева, Весы, Скорпион, Стрелец, Козерог, Водолей, Рыбы.

Ароматы, похожие на Aura

Несколько ароматов, похожих на «Aura» от «Loewe» по целому ряду признаков: принадлежащих к той же группе по классификации духов, составленных теми же парфюмерами, имеющих в своём составе одну или несколько близких по звучанию нот композиции.

Другие ароматы бренда Loewe

Несколько других интересных ароматов от бренда «Loewe», которые могли бы заинтересовать вас не менее, чем композиция «Aura»: парные ароматы для противоположного пола, лимитированные издания, обновлённые версии, парфюмерия этой марки духов из других классов…

Ароматы с названиями близкими Aura

Названия нескольких парфюмерных композиций, в том числе и от других брендов и парфюмеров, которые находятся в непосредственной близости от «Aura» в перечне названий ароматов энциклопедии…

Вам могут нравиться ароматы

Вам могут понравиться ноты

Вас могут интересовать бренды

На этой странице онлайн-энциклопедии духов размещено описание аромата «Loewe Aura». Энтузиасты парфюмерного клуба «ParfumClub.org» стремятся представить вашему вниманию самые полные характеристики этого парфюма среди которых: названия семейств запахов по их классификации; начальные, средние и базовые ноты аромата; стойкость и шлейф парфюмерной композиции; имена парфюмеров и топ-моделей рекламирующих аромат; исполнение парфюма и год выпуска; гендерная и возрастная направленность; оптимальные для наиболее красивого звучания аромата сезон и время суток; рекомендации по выбору запаха с учётом астрологии; рекламные фото и видеоматериалы посвящённые «Aura» от «Loewe»; дизайн «одежды аромата» — его флакона и упаковки; самые интересные отзывы об этом парфюме от тех, кому доводилось купить «Loewe Aura» для себя или посчастливилось получить его в подарок.

Если вы можете предоставить какую-либо дополнительную информацию об аромате «Loewe Aura», пожалуйста, высылайте её на электронный адрес нашего парфюмерного клуба — [email protected]. После проверки она будет опубликована на этой странице.

Как следствие из сказанного выше: отзывы читателей о «Loewe Aura» представляют собой их частное мнение, которое может не совпадать с точкой зрения редакции «ParfumClub.org». Здесь же вы можете увидеть ссылки на магазины с предложениями купить «Loewe Aura». Следует отметить, что сообщество «ParfumClub.org» является некоммерческим проектом, не контролирует эти торговые площадки, не имеет к ним никакого отношения и, соответственно, снимает с себя ответственность за какие-либо последствия, которые могут возникнуть в связи с использованием таких Интернет-ресурсов.

Loewe 7 — описание аромата, отзывы и рекомендации по выбору

Бренд: «Loewe».
Аромат: «7».
Семейство: древесные, цветочные, мускусные.

Пол: мужской, pour homme.
Год выпуска: 2010.
Парфюмер:
Начальные ноты: яблоко, перец.
Ноты сердца: ландыш, роза, ладан, нероли.
Базовые ноты: мускус, ветивер, белый кедр.
Исполнение аромата: туалетная вода.
Характеристика аромата: соблазнительный, фантастичный, блистательный, кружевной, неоднозначный.
Для какого возраста: для молодёжи, среднего и элегантного возраста.
Знаки Зодиака: Овен, Телец, Близнецы, Рак, Лев, Дева, Весы, Скорпион, Стрелец, Козерог, Водолей, Рыбы.
Стойкость аромата: средняя.
Шлейф аромата: слабый.
Для какого времени года: весна, лето, осень.
Для какого времени суток: вторая половина дня, вечер, поздний вечер.
Русская транскрипция названия: «лоу лоу 7», «лоу 7 от лоу».
Описание Loewe 7
Инфографика аромата
Духи, похожие на 7
Другие ароматы бренда Loewe
Духи, близкие по названию
Купить аромат со скидкой в «Л’Этуаль»
Купить парфюм со скидкой в «Золотое яблоко»
Купить духи со скидкой в «Иль де Ботэ»

Ароматы со скидкой

Если какой-либо из парфюмов покажется вам заслуживающим внимания, вы можете получить более подробную информацию о нём и его акционной цене, пройдя по соответствующей ссылке. ..

Описание аромата Loewe 7

«7» — аромат для мужчин, выпущенный брендом «Loewe» в 2010 году. Современные классификаторы относят данную парфюмерную композицию к классам древесных, цветочных, мускусных. Как сообщается в официальном пресс-релизе, самыми узнаваемыми оттенками этого творения парфюмера стали: в начальных нотах — яблоко и перец; в нотах «сердца» — ландыш, роза, ладан и нероли; в нотах базы — мускус, белый кедр и ветивер.

В ходе проведения независимого опроса, зарубежным изданием «Flavors & Fragrances» были собраны отзывы потребителей об аромате «Loewe 7». Участников интервью просили дать субъективную оценку данной парфюмерной композиции по целому ряду ключевых характеристик, среди которых были первое впечатление от аромата, величина стойкости и наличие шлейфа, а так же сезонная, временная и возрастная направленность.

На основании полученных данных можно заметить, что подавляющее большинство опрошенных сходится в следующем мнении: аромат «7» от «Loewe» имеет нормальную стойкость, соответственно — от 3 до 6 часов, и небольшой, слегка приглушённый шлейф. Дополнительно отмечается, что предмет обсуждения станет идеальным выбором в прохладное, тёплое время года или в межсезонье для молодёжи, лиц среднего и элегантного возраста во второй половине дня, вечером или поздним вечером. Самые положительные отзывы об аромате «Loewe 7» были получены от потребителей, принадлежащих к следующим знакам Зодиака: Овен, Телец, Близнецы, Рак, Лев, Дева, Весы, Скорпион, Стрелец, Козерог, Водолей, Рыбы.

Ароматы, похожие на 7

Несколько ароматов, похожих на «7» от «Loewe» по целому ряду признаков: принадлежащих к той же группе по классификации духов, составленных теми же парфюмерами, имеющих в своём составе одну или несколько близких по звучанию нот композиции. ..

Другие ароматы бренда Loewe

Несколько других интересных ароматов от бренда «Loewe», которые могли бы заинтересовать вас не менее, чем композиция «7»: парные ароматы для противоположного пола, лимитированные издания, обновлённые версии, парфюмерия этой марки духов из других классов…

Ароматы с названиями близкими 7

Названия нескольких парфюмерных композиций, в том числе и от других брендов и парфюмеров, которые находятся в непосредственной близости от «7» в перечне названий ароматов энциклопедии…

Вам могут нравиться ароматы

Вам могут понравиться ноты

Вас могут интересовать бренды

На этой странице онлайн-энциклопедии духов размещено описание аромата «Loewe 7». Энтузиасты парфюмерного клуба «ParfumClub.org» стремятся представить вашему вниманию самые полные характеристики этого парфюма среди которых: названия семейств запахов по их классификации; начальные, средние и базовые ноты аромата; стойкость и шлейф парфюмерной композиции; имена парфюмеров и топ-моделей рекламирующих аромат; исполнение парфюма и год выпуска; гендерная и возрастная направленность; оптимальные для наиболее красивого звучания аромата сезон и время суток; рекомендации по выбору запаха с учётом астрологии; рекламные фото и видеоматериалы посвящённые «7» от «Loewe»; дизайн «одежды аромата» — его флакона и упаковки; самые интересные отзывы об этом парфюме от тех, кому доводилось купить «Loewe 7» для себя или посчастливилось получить его в подарок. Если вы можете предоставить какую-либо дополнительную информацию об аромате «Loewe 7», пожалуйста, высылайте её на электронный адрес нашего парфюмерного клуба — [email protected]. После проверки она будет опубликована на этой странице.

Как следствие из сказанного выше: отзывы читателей о «Loewe 7» представляют собой их частное мнение, которое может не совпадать с точкой зрения редакции «ParfumClub.org». Здесь же вы можете увидеть ссылки на магазины с предложениями купить «Loewe 7». Следует отметить, что сообщество «ParfumClub.org» является некоммерческим проектом, не контролирует эти торговые площадки, не имеет к ним никакого отношения и, соответственно, снимает с себя ответственность за какие-либо последствия, которые могут возникнуть в связи с использованием таких Интернет-ресурсов.

Loewe

Пользователи также искали:

bottega veneta,, celine,, fendi, loewe (компания) штаб — квартира: кронах дата основания: 1923 г. , берлин, берлин, bottega veneta, fendi, Loewe, louis, vuitton, bottega, louis vuitton, veneta, штаб, квартира, кронах, дата, основания, loewe, компания, celine, loewe компания штаб — квартира кронах дата основания 1923 г. берлин, loewe компания штаб — квартира кронах дата основания г берлин, производители телевизоров. loewe,

…

Tommy hilfiger транскрипция произношения. Парфюмерные бренды: произносим правильно

Вчерашними событиями навеяло тему для написания этого поста. Может кому-нибудь будет полезно и познавательно.

А правильно ли мы произносим с Вами названия брендов которые присутствуют в нашей повседневной жизни? Давайте в этой теме немного разберем правильно-неправильно, и кто вспомнит добавляйте в комментарии, или записывайте и запоминайте!

Converse

Начнем со всеми нами любимого бренда Converse — которое произошло не от английского глагола «to conv?erse», а от фамилии создателя бренда Маркуса К?oнверса, так что запомним и говорим теперь правильно: сonverse — [к?oнверс] – [?k?nv??s]

Coccinelle

Coccinelle — Коксинэль (что переводится как «божья коровка») французское слово, но заимствовано итальянцами, по-итальянски произносится кочинелле и переводится тоже как божьи коровки, только во множественном числе. Так что это является исключением и принято говорить как это делают итальянцы говоря про свою марку.

Desigual

Desigual – испанский бренд который можно встретить в наших торговых центрах. Слово это в переводе с испанского значит «не такой, как все», «не одинаковый» или «неравный», что вполне доказано оптимистичными яркими коллекциями, предназначенными для молодых парней и девушек, которые хотят выделяться из толпы. Итак, как же правильно произносить это слово desigual – дезигу? ал или десигу? ал. Лично на моей практике испанцы произносили — десигу»аль

Dsquared2

Dsquared2 — Бренд мужской и женской одежды и аксессуаров, основанный братьями-близнецами из Канады Дином и Дэном Кейтенами известен своим сотрудничеством со звездами шоу-бизнеса (не без помощи вездесущей Мадонны). Название марки исходит от первых букв имен братьев – D в квадрате. Это «дискуэед», а не «дискваред», и это вовсе не канадский бренд, а итальянский, поскольку с 1991 года марка прописана в Милане.

Loewe

Еще мои любимые испанцы Loewe — в честь основателя марки, произносим Лoэве

TOUS

Испанские мишки TOUS, здесь как пишется так и произносим — Тoус

Hublot

Hublot (Убло) — знаменитый швейцарский бренд, специализирующийся на выпуске часов люксового сегмента. Марка основана в 1980 году, в настоящее время является дочерней компанией международного холдинга Louis Vuitton Moet Hennesy (LVMH). История Создатель часов Hublot Карло Крокко (Carlo Crocco) вырос в итальянской семье часовщиков.

Guy Laroche

Guy Laroche — У англичан есть имя Guy и произносят они его «Гай», но французы зовут своих Guy «Ги». Модиста из атлантической глубинки Франции, в конце 40-х годов 20 века начавшего свою карьеру в «практичном» haute couture, а затем и в pret-a-porter звали Ги Лярош.

Philipp Plein

Одной из рядовых ошибок является произношение имени немецкого дизайнера Philipp Plein. Филипп родился в Германии, поэтому его имя нужно произносить именно на немецкий манер «Пляйн», а не на английский – «Плейн».

Louis Vuitton

Название модного дома Louis Vuitton, правильно произносить — «Луи Виттон», но никак не «Луи Вьюттон» или «Луис Виттон».

Alber Elbaz

Руководителя бренда Lanvin зовут Альбер Эльбаз (Alber Elbaz). А бренд под его руководством произносится как «Ланван». Это особенности французского произношения. Так что забудьте о «Ланвин» или «Ланвен».

Levi’s

Levi’s — Эмигрировав в Америку, баварец Леб Штраус изменил не только жизнь, но и имя. Он адаптировал его на американский манер – Ливай Стросс. Поэтому любимые джинсы должны называться «Ливайс» и никак иначе.

Marchesa

Название бренда Marchesa (бренд потрясающих кутюрных платьев ручной работы) стоит читать по итальянским правилам: «Маркеза», а не «Марчеза» по-английски, потому что компания получила свое имя в честь итальянской аристократки Маркизы Луизы Казати.

Moschino

По тем же правилам читается название бренда Moschino – «Москино»

Nike

Nike — Название компании по производству спортивной одежды и инвентаря имеет греческое происхождение, это английская версия имени древнегреческой богини победы Ники. Звучит она как «Найки». Именно так произносится название фирмы.

Hermes

Бренд Hermes правильно произносить как «Эрмес», и никак иначе. Гермесом зовут древнегреческого бога торговли и прибыли, а уж он-то точно не имеет никакого отношения к современной моде. Кроме того, название бренда часто произносят как «Эрмэ» и, казалось бы, по правилам французской транскрипции это верно. Но не стоит забывать, что в каждом правиле есть исключения. Это именно такой случай.

Azzedine Alaia

Имя французского дизайнера тунисского происхождения Azzedine Alaia, чьи наряды особенно поразили модниц в этом году, произносится как «Аззедин Алайя». Обычно в ступор вводят три гласных подряд в его фамилии, но все гораздо проще, чем кажется.

Badgley Mischka

Чудесные туфли «Баглай Мишка» – вовсе не «Баглай». Badgley Mischka – это не имя одного человека, как могло бы показаться, а фамилии основателей дизайнерского дуэта: Марка Бэджли и Джеймса Мишки. Соответственно, название бренда звучит так: «Бэджли Мишка».

Vionnet

Много вариантов произношения можно услышать и по отношению к названию Vionnet: «Вайонет» или «Вионнет». На самом деле, все просто: «Вионнэ» с ударением на «э». Именно так звучала фамилия основательницы французского Дома, легендарной Мадлен Вионне.

Elie Saab

Вспоминая следующий бренд Elie Saab, вы, наверняка, с уверенностью будете заверять, что речь снова идет о женщине. А вот и нет. Ливанский дизайнер — мужчина. Именно он создает платья небесной красоты. Ах да, правильно произносить «Эли Сааб».

Proenza Schouler

Proenza Schouler — о каком шулере идет речь? Да нет же, это новая коллекция Proenza Schouler. Американский бренд частенько называют «Шулер», хотя надо «Проэнза Скулер». Почти как школа по-английски. Уж куда приятнее мошенника.

А помните обработанные в стиле потрескавшейся краски свитшоты? Какое имя носят они? Верно, речь о футуристичном бренде Balenciaga (звучит как «Баленсиага»).

Givenchy

Дом Givenchy, который поразил нас агрессивными доберманами на сумках, следует называть «Живанши», а не на американский манер – «Дживенши».

Balmain

А вот в англоязычных странах название Balmain часто произносят неправильно — «Бальмейн», но корректно оно должно звучать как «Бальман», при этом буква «н» на конце практически не произносится. Основателя бренда звали Пьер Бальман.

Comme Des Garcons

Бренд Comme Des Garcons японский, но название его – французское, поэтому говорить следует «Ком де Гарсо? н». Без «с» в обоих случаях и с ударением на «о». Это, пожалуй, самый странный и необычный бренд, одеждой которого хотят обладать многие уличные модники.

Christian Louboutin

Конечно, мы не можем обойти стороной любимые туфли с красной подошвой! Christian Louboutin по правилам произносят как «Кристиан Лубутан». Хотя ошибиться легко. Даже в профессиональных кругах можно услышать «Лабутен»,«Лобутан» или «Лабутин». В произношении «красной подошвы» не ошибемся уж точно!

Giambattista Valli и Gianfranco Ferre

Сложные на вид имена Giambattista Valli и Gianfranco Ferre оказываются не так уж и трудны, когда дело доходит до произношения. «Жамбаттиста Валли» и «Жанфранко Ферре» соответственно. Чрезмерное обилие букв никак не затрудняет правильность прочтения.

Hedi Slimane

А вот Hedi Slimane тоже часто называют неверно. Но все проще, чем кажется: «Эди Слиман», а не «Хеди Слайман».

Burberry Prorsum

Ухитряемся мы с вами ошибаться и с Burberry Prorsum. То у нас звучит как «Барбери Прорсум», то как «Бурбери Прорсум». Но это все не та песня. «Бербери Прорсум» – поставим галочку и запомним..

Mary Katrantzou

Mary Katrantzou родилась в Греции, но творит в Британии, где ее называют «Мэри Катранзу». Этот бренд любим молодыми модницами по всему миру. Мэри так же известна своими многочисленными коллаборациями с другими модными брендами и массмаркетами.

Ну что, немаленький вышел список. Но это далеко не все имена и модные дома со сложным произношением и интересной историей. Чтобы быть в курсе и не упасть в грязь лицом в каком-нибудь модном бутике, перед походом в магазин зайдите в интернет и прочтите пару- тройку новых имен в мире моды.

Для поклонниц Louis Vuitton ролик поупражняться в произношении

Текст выборочно с fashionbookkids.ru и facelook.kz

Кто из нас, девушек, не любит похвастаться перед подругой дорогой покупкой, сделанной в дизайнерском бутике или элитном интернет-магазине? Но вот какая оказия возникает: большинство из нас не умеют произносить правильно названия всех марок или обуви, которые мы приобретаем за баснословные деньги. Желая вызвать у собеседницы восхищение, мы, наоборот, попадаем в неловкую ситуацию. Может быть, в случае с Chanel, Prada, Escada, Gucci или ошибку сделает меньшинство, но с редко встречающимися брендами со сложными названиями нелегко приходится большинству.

Давайте сегодня научимся произносить названия брендов правильно и передадим эти знания менее грамотным подругам-шопоголикам.

Alexander McQueen – с именем Александр проблем не возникает, а вот его фамилия часто произносится неправильно: нужно говорить МаккуИн вместо МаккУин.

Alexander McQueen осень-зима 2014

Azzedine Alaia – три гласных в фамилии этого дизайнера не должны вас пугать, его зовут Аззедин Алайя.

Badgley Mischka – это вовсе не имя одного человека, а фамилии основателей этого дизайнерского бренда Марка Бэджли и Джеймса Мишки.

Balmain – на англоязычный манер название этого бренда произносят как «БальмЕйн», но у него французские корни, поэтому правильно будет «БальмАн».

Bulgari – ювелирный бренд звучит как «БУлгари», а не «БАлгари».

Burberry – с этим английским брендом возникает масса разночтений, и, чтобы не запутать вас, мы не будем их перечислять: правильный вариант – «Бёрбери».

Carolina Herrera — первая буква в фамилии дизайнера оказывается немой, поэтому «КаролИна ЭрЭра».

Cartier – с ударением на последний слог правильным будет «КартьЕ».

C é line – несмотря на мнимый значок ударения над буквой Е, правильным будет ставить ударение на последний слог: «СелИн».

Chlo é – это истинно французская марка, ее название произносят на французский манер «КлоЭ», а не «ХлОе».

Chloe осень-зима 2014

Christian Louboutin – знаменитого обувщика зовут , а его обувь сокращенно называют «Лубис».

Christian Lacroix – знакомьтесь, Кристиан Лакруа, а последняя буква в его фамилии не читается.

Comme des Gar ç ons – этот японский бренд свое название произносит на французский манер, поэтому правильным будет «Ком де ГарсОн» без конечных букв С.

Dolce & Gabbana – выучить наизусть и никогда не делать ошибки, это же «ДОльче Энд ГаббАна».

Dsquared – сложное название этого итальянского бренда представляет собой игру слов, которая читается как «ДискуЭрт».

Emilio Pucci – Эмилио в данном случае именно ПУччи с ударением на первый слог, но никак не ПУси и не ПУкки.

Etro – итальянский бренд имеет ударение именно на первую букву, поэтому «Этро», а не «ЭтрО».

Herm è s – в России долгое время этот бренд именовали не иначе как «ГермЕс», хотя правильной версией с учетом французской фонетики будет более короткое название «ЭрмЭ» с ударением на последний слог.

Herv é L é ger – бандажные платья производит марка «ЭрвЭ ЛэжЭ», но точно не какой-нибудь Херв Леджер.

Herve Leger осень-зима 2014-2015

Giambattista Valli – это , а его коллега Gianfranco Ferre звучит не иначе как ЖанфрАнко ФеррЭ.

Giorgio Armani – обижать великого дизайнера не стоит, поэтому запомните, что верно его имя звучит как «ДжОрджо АрмАни».

Givenchy – не Дживенчи, не Гивенчи, а только ЖиваншИ.

Jean-Paul Gaultier – с Жаном-Полем все просто, а вот с фамилией бывают загвоздки – она звучит как «ГотьЕ».

Jimmy Choo – марка обуви и произносится как ДжИмми ЧУ.

Guess – пожалуйста, только не ГуЁс, а просто «ГЕс».

Lacoste – читается как пишется, но с ударением на букву О.

Loewe – как только не коверкают название этой испанской марки, хотя звучит она вполне просто: «ЛоЭвэ».

Louis Vuitton – не ЛуИс, а ЛуИ, и не ВьютОн, а ВюитОн. Запишите себе как шпаргалку!

Marchesa – по итальянским правилам название нужно читать как «МаркЕза», а не «МарчЕза».

Miu Miu – почти как мяукающая кошка: «МИу МИу».

Moschino – название бренда происходит от фамилии его основателя ФрАнко МоскИно.

Итак:

1. Найки

Название бренда происходит от имени богини победы Ники и в оригинале звучит «Найки».
Именно так его произносят в Соединенных Штатах.

Однако незнание данного факта с одной стороны, и правила чтения английского слова «nike» с другой стороны, привели к широкому распространению в Европе в целом и в России в частности неправильной транскрипции «Найк».

Неправильное в сущности название не только прижилось и закрепилось, но и используется в названии официального представителя компании в России.

2. Ламборгини

Итальянский производитель дорогих спортивных автомобилей называется «Ламборгини».

Согласно правилам чтения в итальянском языке, если после «g» стоит «h», то оно читается как «Г». Однако в России настолько распространено неверное произношение «Ламборджини», что даже система автопоиска Google выдает именно его.

Но если сказать Lamborghini привычным способом итальянцу, на вас посмотрят как на идиота, нанесшего серьезное оскорбление.

3. Гарньер

Раньше марка Garnier озвучивала себя по-русски как Гарнье (знак зарегистрирован в России с 1991 года) — в традиции французских марок типа Перье (Perrier) или Курвуазье (Courvoisier).

Позднее по результатам проведенных фокус групп марка отказалась от верного произношения и заменила транскрипцию на транслитерацию — полагая, что покупательницам так легче прочесть ее название.

Косметическое переименование, несмотря на медийные веса, пока не помогло: сетевой народ продолжает писать название и на старый манер, и даже полной транслитерацией: гарнье, гарньер, гарниер и даже гаранье.

Тон метаниям задает сама марка, употребляя на русском сайте три варианта нейма в одном предложении: «История марки Гарньер началась в 1904 году, когда Альфред Амур Гарнье — парикмахер, парфюмер и галантерейщик города Блуа — выпустил свой первый продукт, лосьон для волос Garnier».

А в суббрендовом нейминге вообще без Карла и Клары не разобраться: Колор Нэчралз, Дусёр Блонд Гарнье, Гарньер Бэль Колор…

4. Хёндэ

В переводе с корейского «Hyundai» означает «современность». Правильная русская транслитерация этого слова — «хёндэ» с ударением на последний слог.

В народе же корейского автопроизводителя именуют и «Хёндай», и «Хюндай», и даже «Хундай». Подобные сложности с прочтением Hyundai встречаются и в других странах.

Обратите внимание, что под американцев бренднейм слегка адаптировали.

Аналогичная путаница возникает и при произношении названий некоторых моделей автомобилей Hyundai.

Так, внедорожник Hyundai Tucson чаще всего называют Тусан, Туксан, Туксон, Таксон. А на самом деле Hyundai Tucson назван в честь североамериканского города в штате Аризона и правильно произносится как Туссан.

5. Порше

Произносится «Порше» с ударением на первый слог по имени основателя компании Фердинанда Порше.

Россияне либо путают ударный слог, либо теряют окончание, задаваясь вопросом, почему же тогда не читается конечная «e» в названии люксового внедорожника Cayenne (Порше Кайенн).

Интересная ситуация с произношением названия бренда ASUS (Aсус) в Соединенных штатах. Из уст американцев ASUS становится похож на не совсем приличное «asses».

6. Бэ-Эм-Вэ

Некоторые борцы за правильное называние всего и вся уверяют, что нужно говорить «Би-Эм-Дабл-Ю».

Не нужно — потому что «Бэ-Эм-Вэ» — это абсолютно адекватное произношение для BMW, немецкого автомобилестроителя, чье название, как известно, произошло, сократившись от Bayerische Motoren Werke. В немецком языке буквы, вошедшие в бренднейм, называются именно так, и W — это «Вэ».

7. Хеннесси

Еще одна история про любителей «аутентичности»: коньяк Hennessy во Франции называют «Энси», и поэтому мнение на тему «Нам тоже нужно называть этот коньяк правильно» становится слышно все чаще.

Но в действительности правильно так, как мы привыкли — «Хеннесси».

И связано это не с правилами французского произношения, а с фамилией основателя коньячного дома. Ричард Хеннесси был ирландцем.

8. Моэт э Шандо

Вопреки распространенному в России мнению, в имени всемирно известной марки шампанских вин при произнесении убирается не «т» в слове Moёt, а «н» в слове Chandon.

Союз «и», представленный в имени амперсандом, читается, как и положено по-французски, «э».

9. Таг Хойер

Не «хауэр», не «ауэр» и даже не «ёр» (есть и такие смелые предложения).

Часовое производство Heuer было основано в Швейцарии в 1860 году швейцарцем Эдуардом Хойером. Приставка TAG появилась у фамилии только в 1985 году, она означает Techniques d’Avant Garde, «техника авангарда».

Сама же аббревиатура — имя компании, которая владела часовым брендом на протяжении 14 лет, пока его не перекупил концерн LVMH.

10. Левис или Ливайз

Тщательные исследования выявили, что оба варианта уже давно и прочно вошли в общее употребление, и даже в США бытуют оба варианта. Люди продолжают интересоваться, спорить, доказывать, но вся доказательная база в этом случае сводится к двум моментам: носители английского языка чаще всего говорят Ливайз, потому что по правилам английского имя Levi читается как «Ливай».

Но создателя первых джинс звали Леви. Леви Штраусс был немецким евреем, при рождении получившим имя Loeb. В 18 лет он переехал из родной Баварии в Сан-Франциско, и его имя для удобства произнесения в Штатах превратилось в Леви. И если следовать грамматике английского языка, то правильней «Левис».

11. Эрмэс

Название люксового французского бренда произошло не столько от имени древнегреческого бога Гермеса, сколько от фамилии основателя.

Модный дом был создан Тьерри Эрмэсом в 1837 году. И поэтому правильней говорить не «гермес» и не «эрмэ», а «эрмэс» с ударением на последний слог.

Или «эрмэз», если ближе к английскому произношению. Кроме того, акцент над E во втором слоге предполагает прочтение буквы S на конце слова.

12. Мицубиси

Российское представительство японского автомобилестроителя Mitsubishi в своей последней кампании сделало акцент на варианте «Митсубиши».

Предпоследний звук в японском языке в действительности читается как нечто среднее между «с» и «ш», но ближе к «с», чем к «ш», поэтому подавляющее большинство японистов и переводчиков с японского языка продолжают настаивать на «Мицубиси».

И их подбрасывает от слова «суши» — там ровно тот же звук, а следовательно «суси». На этом месте подбрасывать начинает уже не японистов, а простых любителей риса и рыбы.

Та же самая принятая в 1930 году и до сих пор не отвергнутая система Поливанова довольно четко высказывается по поводу «ц» и «тс». «Тс» — это простая калька с английского языка, в алфавите которого просто нет знака для обозначения звука «ц».

А у нас есть, и поэтому правильно «Мицубиси». Следовательно вариант российского офиса дважды вызывает недоумение.

13. Зирокс

Удивительно, но на самом деле «зирокс», а не «ксерокс». В Штатах начальную букву «X» всегда читают как «З». «Зена — королева воинов» тоже, кстати, пишется «Xena».

Но в России с самого первого копировального аппарата Xerox называли именно ксероксом, и сейчас никто уже не поймет, о чем идет речь, если услышит «зирокс».

14. Дискуаэд

Dsquared — это название, которое не так-то просто прочитать, если видишь его впервые. А воспроизвести русскими буквами его правильное произношение и вовсе невозможно.

И тем не менее, российская молодежь отлично знает, что Dsquared по-русски произносится, как «Дискваер» или «Дискверд». Может, и не совсем правильно, но так уж повелось.

15. Лёвенброй

Löwenbräu (нем. Львиная пивоварня, произносится Лёвенброй, в России часто неправильно произносится как Ловенбрау) — немецкая пивоваренная компания, расположенная в Мюнхене.

16. Кларанс\

Самая распространенная версия это — «Кларинс» или «Кларин». Но ни тот, ни другой вариант не верны. «Клара(н)с» — самый верный из всех возможных вариантов.

Правда вторая «а» носовая ее нет в русском языке. Марка французская, по правилам чтения французского языка -rins читается как -r/\ns.

17. Булгари

С этим словом проблем практически нет, но есть два «но» — ударение и странная V вместо гласной.

Бренд итальянский, поэтому произносится «БулгАри», а не как многие произносят «БУлгари» или «БулгарИ».

А необычное начертание буквы «u» в логотипе всемирно известной ювелирной марки объясняется происхождением.

Итальянскую компанию основал грек, Сотириос Вулгарис, а на новогреческом его фамилия писалась именно так — Bvlgaris.

От последней буквы отказались сразу же, чтобы придать названию более итальянское звучание.

18. Самсон

Samsung в России произносят, как «Самсунг», но более правильно «САмсон», с ударением на первом слоге, что в переводе означает «три звезды».

19. Лонж’ин

Так как слово пришло с французского, то правильно говорить «лонж’ин», смягчая звук «ж».

20. Гленфиддих

В России этот бренд шотландского виски чаще всего называют Гленфиддич или Гленфиддик, хотя, как уверяет производитель, более правильным вариантом считается тот, что со звуком «х» на конце.

Не Адмэ, не Адме и не Адми. Эдми. С ударением на первый слог — по аналогии с hold me, thrill me, kiss me, kill me. Но мы не обижаемся ни на один из ваших вариантов;)

Также:

Burberry — [бёрбери]
Tissot — [тиссо’]
Hublot — [юблО]
Moschino — [Москино]
Montblanc — [мон блан]
Dior Homme — [диОр Ом].

Homme означает «мужской, мужчина» и всегда и везде читается как [Ом].

Femme означает «женский, женщина», и всегда и везде читается как [фАм].

Соответственно, названия духов «для него» — pour homme — будет читаться [пУр Ом], а «для неё» — pour femme [пУр фАм]

Чтобы походы в модные бутики и бьюти-корнеры не превратились в экзамен на безграмотность, мы составили список, как произносить названия брендов, с которыми чаще всего возникают трудности с правильным произношением.

Как правильно произносить названия модных брендов

Покупка одежды и обуви от известных брендов серьезно усложняет нам жизнь. Теперь мы не только не можем жить без любимых лодочек Christian Louboutin, но и не знаем, как правильно произнести название бренда. Не стоит пытаться самостоятельно перевести название марки на русский язык, в лучшем случае тебя просто не поймут, а в худшем – ты будешь выглядеть смешно.

Azzedine Alaïa – французский дизайнер с тунисскими корнями. Обычно трудности в произношении вызывает его фамилия с буквой латинского алфавита. Аззедин Алайя – все просто и легко.

Balenciaga – правильный ответ «Баленсиага ». Все очень просто!

Balmain – по английским правилам звучит «Бальмэйн», но бренд назван по фамилии создателя французского дизайнера Пьера Бальма, значит правильно говорить Бальман .

Chloé – Клоэ – только так, с ударением на «э». Только не говори, что ты думала «Хлое».

Christian Lacroix – правильно звучит название бренда Кристиан Лакруа с ударением на последний слог. Причем звук «р» практически не произносится, как будто ты картавишь.

Christian Louboutin – имя французского дизайнера обуви, узнаваемой по фирменной красной подошве, звучит как Кристиан Лубутан . Но даже профессионалы ошибаются, говоря: «Лабутен», «Лабутин», «Лобутан».

Givenchy – французский Дом моды, созданный дизайнером Юбера Живанши, соответственно говорить следует Живанши .

Guy Laroche – имя французского дизайнера правильно говорится Ги Ларош . Но многие порой называют «Гай».

Hermés – название бренда часто произносят Эрме. Вроде, по правилам это верно (звук «с» во французской транскрипции должен отсутствовать), но в данном случае правильно говорить Эрмес . То же самое относится к бренду Rochas – правильно звучит Роша .

Hervé Léger – французский бренд, который стал известен благодаря изобретению бандажного платья. Ранее Hervé Peugnet, но Карл Лагерфельд посоветовал дизайнеру поменять труднопроизносимую фамилию на Léger. Произносится Эрве Лэже .

Lanvin – сразу хочется сказать Ланвин, но правильно Ланван .

Louis Vuitton – правильная версия произношения названия бренда Луи Виттон , а не Луи Вьюттон или Луи Вуиттон.

Maison Martin Margiela – новичку даже с хорошими знаниями французского языка сложно правильно произнести название знаменитого французского бренда. А звучит оно на самом деле весьма просто – Мэзон Мартан Маржела .

Rochas – Роша с ударением на последний слог.

Sonia Rykiel – Соня Рикель – так зовут королеву трикотажа и основательницу одноименного Дома моды Sonia Rykiel.

Yves Saint Laurent – французский дом моды, основанный Ивом Сен-Лораном, поэтому и говорим не иначе, как Ив Сэн Лоран .

Zuhair Murad – по-русски дословно звучит Зухэйр Мурад .

Anna Sui – очень часто имя известного дизайнеры можно услышать как Анна Сью, но правильно оно звучит Энна Суи .

Badgley Mischka – можно подумать, что это имя одного человека. На самом деле название состоит из фамилий двух дизайнеров, основавших бренд – Марка Бэджли и Джеймса Мишки, и звучит не иначе, как Бэджли Мишка .

Burberry Prorsum – английская компания, узнаваемая по фирменному знаку – «клетке». Произносится Бёрбери Прорсум , но никак не «Бурбери» или «Барбери».

Carolina Herrera – венесуэльско-американский дизайнер. Обычно трудности возникают с произношением фамилии. Говорить нужно на испанский манер, то есть Каролина Эррера .

Gareth Pubh – на русском имя английского дизайнера звучит как Гарет Пью .

Coach – многие любят сумки известного бренда Coach, но не все знают, как правильно произносить название марки. Коуч – так звучит на русском название бренда, известного своими модными аксессуарами.

Levi’s – создателя знаменитых джинсов звали Леви и по всем правилам нужно говорить Левис , а не Левайс. Хотя оба варианта уже давно вошли в общее употребление. Кстати, в штатах все говорят именно «Левайс». Спорить на эту тему можно бесконечно.

Manolo Blahnik – английский бренд, специализирующийся на производстве женской обуви. На русском правильно звучит название бренда как Маноло Бланик .

Marc Jacobs – дизайнера и основателя одноименного модного бренда зовут Марк Джейкобс. Хотя некоторые умудряются произносить Марк Якобс – звучит забавно.

Marchesa – английский бренд, но название его произносится по правилам итальянского языка – Маркеза .

Mary Katrantzou – несмотря на то, что дизайнер родилась в Греции, бренд является английским. Поэтому и произносим на британский манер – Мэри Катранзу .

Monique Lhuillier – имя известного дизайнера роскошных свадебных платьев правильно произносится как Моник Люлье .

Naeem Khan – имя американского дизайнера индийского происхождения звучит Наим Кан , но точно не «Хан».

Prabal Gurung – как пишется, так и читается – Прабал Гурунг .

Proenza Schouler – никакого «Шулер», правильно говорить Проэнза Скулер . Именно так правильно произносится американский бренд.

Ralph Lauren – несмотря на то, что фамилия дизайнера французская и многие ошибочно произносят «Лоран», бренд то американский. И правильно говорить Ральф Лорен с ударением на «о».

Rodarte – Родарте .

Roksanda Ilincic – а вот название бренда Roksanda Ilincic, несмотря на то, что он английский, произносится по правилам сербской транскрипции, так как дизайнер родилась в Белграде. И звучит как Роксанда Илинчич .

Vera Wang – фамилию Wang допускается произносить как Вэнг и Вонг, но первый вариант все же предпочтительнее. Да и сама дизайнер представляется как Вера Вэнг . То же самое относится и к бренду Alexander Wang .

Бонусом приводим еще одно название популярного бренда, которое никак не уживается в головах российских модниц.

Nike – все знают бренд, как «Найк». На самом деле, правильно говорить Найки . Но первый вариант настолько прижился в России, что даже официальное представительство компании у нас звучит иначе, как «Найк».

Bvlgari – название бренда основывается на латинском алфавите, где «V» равносильна «U». Есть еще одно «но» – ударение, поэтому говорим: «БулгАри », а не как многие «БУлгари».

DSquared2 – итальянский бренд, основанный братьями-канадцами, следует произносить Дискуэрт , но никак не Дискуаред.

Ermenegildo Zegna – настоящий взрыв мозга. С первого раза произнести довольно сложно, но, потренировавшись, Эрменеджильдо Зенья произносится так же легко, как и всеми известные бренды «Шанель» и «Кристиан Диор».

Fausto Puglisi – еще один итальянский бренд, с произношением которого могут часто возникают трудности. Правильно говорить Фасту Пуизи .

Miu Miu – итальянский бренд, который произносится по правилам итальянской транскрипции – Мью Мью .

Moschino – по этим же правилам читается и этот итальянский бренд. Произносится Москино , а не Мосчино, как это звучит по-английски.

Giambattista Valli – ничего сложно – Жамбаттиста Валли .

Другие дизайнерские бренды и марки

Ann Demeulemeester – бельгийского дизайнера правильно будет называть Анн Демельмейстер и никак иначе.

Dries Van Noten – в названии этого бренда сложно допустить ошибку. Как вы уже догадались, правильно звучит Дрис Ван Нотен .

Elie Saab – ливанский дизайнер, имя которого звучит Эли Сааб , но никак не Эль Сааб.

Issey Miyake – наконец-то в наш список «труднопроизносимых названий брендов» попал и японский дизайнер. Имя легенды японской моды правильно говорить Иссей Мияке . Имя второго известного дизайнера Yohji Yamamoto из страны восходящего солнца звучит Йоджи Ямамото .

Loewe – при произношении должно получаться что-то среднее между Лоуэвэ и Лоэвэ .

Peter Pilotto – название международного бренда правильно произносится Питер Пилато , а не «Пилото», как кажется на первый взгляд.

Philipp Plein – немецкий дизайнер, поэтому имя произносится Филипп Пляйн , а не «Плейн». Тот же случай, что с Calvin Klein – ведь мы говорим Кэльвин Кляйн .

Чтобы разобраться, британский журнал i-D решил провести модный урок по безграмотности, выпустив обучающий ролик. В четырехминутном уроке вместе с показом коллекций модели озвучивают названия брендов, начиная с Azzedine Alaïa, заканчивая Zegna.

Как правильно произносить названия бьюти-брендов

Та же самая история с произношением названий косметических брендов. Например, все знают марку l’occitane , многие из нас даже ей пользуются. Но как ее только не называют: и Локитан, и Лосситане, и Лочитан. Есть даже шутка, что у названия бренда есть порядка 40 вариантов произношения, но только один является правильным – Локситан .

Kiehl’s – американский бренд, основанный Джоном Килом, поэтому и произносится так же, как читается его фамилия – Килс .

Sephora – большинство из нас произносят название правильно, единственное, ударение нужно ставить на последний слог, на «а», то есть СефорА .

Babor – название немецкого бренда также многих приводит в недоумение. Правильно читается БАбор с ударением на «а».

La Roche-Posay – название марки косметики читается по правилам французской транскрипции – Ля Рош Позэ .

Pierre Fabre – еще один представитель аптечной качественной французской косметики. Читается – Пьер Фабр .

Payot – спорим, ты даже не подозревала, что у бренда украинские корни – его основательница родилась в Одессе. Только на момент создания марки она уже была мадемуазель Пайо, поэтому и название бренда читается на французский манер – Пайо , без произношения буквы «т».

Sothys – Сатис .

La Biosthetique – Ла Биостетик .

Methode Jeanne Piaubert – похоже французская косметика стремиться завоевать любовь русских красавиц. Еще один популярный бьюти-бренд, основанный во Франции – Метод Жан Пьюбер.

Guerlain – Герлен , и никак по-другому.

Estée Lauder – Эсте Лаудер – так произносится имя основательницы и само название бренда.

La Prairie – один из лучших бьюти-брендов по производству косметики класса люкс читается как Ла Прери .

Erborian – еще один косметический бренд, который сочетает в себе традиционные методы корейской медицины и современные европейские технологии. Корейско-французская марка Erboria по-русски звучит Эрбориан .

Oribe – Орбе Каналес – известный стилист и создатель одноименной марки профессиональных средств для волос. Кстати, это один из любых стилистов Дженнифер Лопес.

Essie – марку популярных на весь мир лаков для ногтей правильно называть Эсси .

Lalique – создателя уникальных ароматов зовут Рене Лалик, поэтому и название марки произносим не иначе как Лалик .

NYX – название американской марки, состоящей из трех букв, произносится коротко и ясно – Никс .

Если ты внимательно прочитала все до конца, ты не будешь больше делать глупых ошибок в произношении названий известных брендов. Говори четко и уверенно, как будто ты всегда знала, что правильно говорить СефорА, а не СифОра или СЕфора.

15 мировых брендов, названия которых мы произносим с ошибкой

Мы уже давно привыкли к изобилию иностранных брендов, но частенько и не задумываемся о том, правильно ли произносим их названия. Но, как оказалось, если немного копнуть в историю компаний и их происхождение, то разобраться с правильным произношением проще простого.

AdMe.ru прошерстил все доступные источники, чтобы раз и навсегда разобраться в этом непростом вопросе, и расскажет, как на самом деле следует произносить названия всеми любимых брендов. А в конце статьи вас ждет бонус, который поможет найти хорошо знакомый кофе в англоговорящей стране.

1. Lanvin

Знаменитый французский модный дом, выпускающий одежду и парфюмерию, получил свое название благодаря фамилии своей создательницы Жанн-Мари Лован (Jeanne-Marie Lanvin). И хотя мы давно привыкли к «Ланвин», французы произносят название бренда совсем по-другому, немного в нос и как бы округляя, а сочетание букв «an» во французском языке дает звук «о» — получается мягкое «Лован» с ударением на последний слог.

2. Nikon

Nikon была основана в 1917 году в Японии в результате слияния компаний-производителей оптического оборудования, а спустя годы прославилась своей высококачественной фототехникой. Но далеко не все фотографы знают, что согласно правилам японского языка название бренда произносится с ударением на второй слог, с очень мягкой, почти беззвучной «н» на конце.

3. Ralph Lauren

Бренд Ralph Lauren был основан в 1966 году тогда еще молодым дизайнером Ральфом Лореном. Помните, как Рэйчел из сериала «Друзья» устроилась в этот модный дом? Все сходится, ведь штаб-квартира компании как раз расположена в Нью-Йорке. Фамилия Lauren чем-то похожа на французскую и может ввести в заблуждение, но в действительности произносится как «Лорен» с ударением на первый слог.

4. Bottega Veneta

За последние несколько лет этот итальянский модный дом превратился из мало кому известной компании в бренд, чьи вещи раскупают как горячие пирожки. В переводе с итальянского языка название переводится как «Венецианская мастерская», а ударение в слове Veneta ставится на первый слог, как и в слове Veneto, регион Венето, где и был создан бренд.

5. Honor

Молодой китайский бренд телефонов, созданный в 2013 году, получил свое название от английского слова Honor, что переводится как «Честь». А значит, и произносится название бренда в соответствии с правилами английского языка с немой буквой «H» и ударением на первый слог.

6. Guess

Английское слово Guess переводится как «Угадай». В 1981 году братья Марчиано решили создать свой бренд одежды. Один из братьев проезжал мимо рекламного щита McDonald’s, который призывал «угадать», в какой столовой был самый большой чизбургер. Слово Guess всем понравилось, бренд так и назвали. В русской транскрипции это слово читается коротко и емко — «Гес».

7. Agent Provocateur

Французский бренд изысканного белья произносится с таким же французским шиком — «Ажон Провокатор» с ударениями на последние слоги и грассирующей «р» на конце.

8. Erborian

Корейско-французский бренд, чье название в переводе с французского означает «Травы Востока», успел полюбиться многим девушкам. А что касается произношения бренда, то берем мастер-класс у соосновательницы Каталин Береньи — «Эрбориан», ударение на второй слог.

9. Narciso Rodriguez

Не зря мы в начале статьи упомянули, что важно знать и страну происхождения бренда. Судите сами: модный дом Narciso Rodriguez создан американцем кубинского происхождения с испанским именем, а значит, и его имя, и название бренда читается на испанский манер. Поэтому никакой он не Нарцисо, а Нарсисо Родригес.

10. O.P.I

Когда-то эта компания занималась производством расходных материалов для стоматологии, откуда и получила свое название Odontorium Products Inc. Но вскоре бренду удалось создать акриловый состав, который отлично подошел для маникюра. И компания полностью перешла на производство лаков для ногтей и сократила название на более подходящее и лаконичное O.P.I. В получившемся названии бренда буквы читаются по отдельности, поэтому в результате получается «Опиай».

11. Loewe

Этот старинный испанский бренд, основанный аж в 1846 году, выбрал в качестве названия не самое легкое для русскоязычного человека слово. Вариаций может быть множество, но верное произношение только одно: нечто среднее между «Лоэвэ» и «Луэвэ» с ударением на последний слог.

12. Clarisonic

Американский бренд-производитель устройств для очищения кожи пришелся по вкусу многим, но далеко не все девушки произносят название компании верно: буква «р» в середине слова не читается и в результате должно получиться «Клэасоник».

13. H&M

Крупнейшая розничная сеть по продаже одежды была основана в Стокгольме. H&M расшифровывается как Hennes & Mauritz: изначально магазин назывался просто Hennes, что в переводе со шведского означает «Её», а потом вдобавок к нему был выкуплен магазин для охотников и рыболовов под названием Mauritz Widforss. Как только не каверкают эту аббревиатуру люди со всего мира, но правильнее всего просто назвать две буквы — «Эйч энд Эм».

14. Oribe

Марку средств по уходу за волосами придумал легендарный голливудский стилист по волосам Орбе Каналес. Он, как и Нарсисо Родригес, имел кубинские корни: и хотя так и хочется произнести имя маэстро как Ориб, все-таки правильно говорить Орбе.

15. Hublot

Своим названием швейцарский бренд часов класса люкс обязан французскому слову Hublot, которое переводится как «Иллюминатор». Поэтому нет никаких сомнений, что произносится название бренда также на французский манер — «Юбло».

Бонус: Jacobs и Marc Jacobs

Давайте сравним, как произносятся, казалось бы, одинаковые бренды. Кофе Jacobs — это немецкий бренд, получивший свое название от фамилии создателя компании Иоганна Якобса. Логично, что и во всех других языках мира этот бренд будет произноситься как «Якобс» — именно такое название бренда и прижилось во многих странах, в том числе и в России. Но дело в том, что немного путаницы добавляет имя Jacob (от него, по всей видимости, и образовалась фамилия), которое в разных странах читается по-разному: так, в англоговорящих странах его произнесут как «Джейкоб», поэтому там этот бренд кофе чаще всего называют «Джейкобс».

Американский бренд одежды и парфюмерии Marc Jacobs был создан однофамильцем Иоганна Якобса, но произношение этих, казалось бы, одинаковых фамилий, отличается. Marc Jacobs читается на английский манер как Марк Джейкобс. Именно поэтому некоторые жители стран, где принято иное прочтение этого имени, ошибаются и называют его Марком Якобсом. Вот такая любопытная деталь.

Какой из приведенных примеров в статье вас удивил? Поделитесь в комментариях своими впечатлениями.

Как правильно произносить названия модных брендов

Помню, сто лет назад или около того, смотрела какую-то серию «Топ-модели по Американски». Там высокая темнокожая модель под стремительно округляющиеся глаза Тайры Бэнкс назвала Givenchy «Гивенчи». Мое fashion addicted сердечко екнуло, но потом я вспомнила про все эти нечитаемые Loewe и вечные споры вокруг Hermès и задумалась о том, как вынуждены страдать потребители, а заодно и уши посвященных из-за всех этих фонетических недоразумений.

Трудности обычно начинаются тогда, когда дом, например, испанский, а название — французское. Или все английское, а фамилия создателя — немецкая, например. Проблемы создают и правила чтения, разные для большинства языков. Вот какой нормальный человек, кроме француза, прочитает [oi] как «уа»? Впрочем, в Германии еще хуже: там [v] читается как «ф», [z] как «ц» и далее по списку. Поэтому для особо тяжелых случаев стоит иметь под рукой шпаргалку. Кстати, вот и она:

Burberry — «Бёрбери»
Balmain — «Бальман»
Cloe — «Клоэ»
Christian Louboutin — «Кристиан Лубутан». Эта сложная для русского произношения фамилия, искаженно воспетая в небезызвестной песне «на лабутэнах» с трудом поддается транскрипции. В конце что-то среднее между звуками [а] и [э]
Givenchy — «Живанши»
Dries Van Noten — «Дрис Ван Нотен»
Ermenegildo Zegna — «Эрменеджильдо Дзенья»
Elie Saab — «Эли Сааб»
Hermès — «Эрмес». Многие опускают окончание, но это не совсем верно, поскольку это не обычное слово, а фамилия основателя.
Lanvin — «Ланван»
Louis Vuitton — «Луи Виттон»
Loewe — «Лоэвэ»
Longchamp — «Лоншамп»
Marchesa — «Маркеза»
Miu Miu — «Мью Мью»
Moschino — «Москино»
Proenza Schouler — «Проэнза Скулер»
Saint Laurent — «Сэн Лоран»

Стоит отметить, что русская письменная транскрипция не передает всех оттенков: некоторых звуков в нашем языке просто нет. Но я постаралась по максимуму передать оттенки и точность воспроизведения, перешарив предварительно несколько источников, половина из которых друг другу противоречит.

Представители брендов часто беспокоятся о правильном произношении: регулярно поднимают этот вопрос на пресс-конференциях и даже нанимают актеров для озвучки (как Ermenegildo Zegna). Конечно, ничего страшного от неверно произнесенного Burberry не случится. В конце концов, всем важно, чтобы вы у них что-нибудь купили, а не чесали языком возле кассы. Но, пожалуй, правильное произношение можно отнести к элементарной вежливости. Говорите правильно!

Лоу — это… Что такое Лоу?

Лоу, Лау (англ. Law, Low, Lowe) — транскрипция англоязычных фамилий.

Лоу, Айви (англ. Ivy Law; 1889—1977), более известная как Айви Вальтеровна Литвинова — супруга М. М. Литвинова, англичанка, филолог и переводчик.
Лоу, Бернард Фрэнсис (англ. Bernard Francis Law; 1931) — американский кардинал, архипресвитер базилики Санта Мария Маджоре.
Лоу, Дэйзи (англ. Daisy Lowe; 1989) — британская фотомодель.
Лоу, Денис (англ. Denis Law; 1940) — шотландский футболист.
Лоу, Джейсон (англ. Jason Law; 1991) — английский футболист, полузащитник клуба «Блэкберн Роверс».
Лоу, Джон Филлип — американский киноактёр.
Лоу, Джордж Дейвид (англ. George David Low, 1956—2008) — американский астронавт.
Лоу, Джуд (англ. David Jude Heyworth Law; 1972) — британский кино- и театральный актёр.
Лоу, Крис (англ. Chris Lowe, 1959) — британский музыкант, участник дуэта Pet Shop Boys (совместно с Нилом Теннантом).
Лоу, Ник (англ. Nicholas Drain Lowe, 1949) — автор-исполнитель и бас-гитарист; участник Kippington Lodge, Brinsley Schwarz, Rockpile.
Лоу, Роб (англ. Rob Lowe, 1964) — американский актёр.
Лоу, Хью — известный коллекционер орхидей XIX в.
Лоу, Эвандер (англ. Evander McIvor Law, 1836—1920) — американский публицист, учитель и генерал армии Конфедерации во время Гражданской войны в Америке.
Лоу, Эдвард (англ. Edward Lowe ок.1690—ок.1724) — британский пират, действующий во времена заката «Золотого века пиратства», также известен как Нед Лау (Ned Lowe).
Лоу, Эдвард (англ. Edward Law) — британский политик и генерал-губернатор Индии в 1842—1844 годах.
Лоу, Эл (Лоуи, англ. Al Lowe, 1942) — джазовый музыкант саксофонист, геймдизайнер и программист.
Лоу, Эндрю Бонар (англ. Andrew Bonar Law; 1858—1923) — премьер министр Великобритании, состоял в партии консерваторов. Единственный премьер Великобритании родившийся за её пределами.

Китайская фамилия Лоу

娄 — 1) пустой; 2) название созвездия. Традиционное написание — 婁.

См. также

Moschino, Loewe, Givenchy и другие …

Мари Клэр поддерживает аудитория. Когда вы совершаете покупку по ссылкам на нашем сайте, мы можем получать комиссию за некоторые товары, которые вы выбираете для покупки.

Debrett’s опубликовал список названий модных лейблов, которые мы все время ошибались . ..

От Moschino до Loewe мир моды — это лингвистическое минное поле, на котором только самые прилежные из нас выйдут без косноязычия.

Неправильное название самого популярного нового лейбла — это настолько ужасный грех, что вас могут выбросить из FROW, так что слава богу, авторитету по этикету, Debrett’s, есть новое руководство, которое может нам помочь.

Они опубликовали список ведущих модных лейблов, который мы, британцы, все это время ошибались, и некоторые записи (как мы могли так ошибиться с Ральфом Лореном ?!) вызывают удивление. Мы также добавили в список еще несколько, потому что, по всей видимости, нам действительно не хватает , когда дело доходит до произношения нашего модного бренда.Показательный пример: Adidas… да, мы только что выяснили, что на самом деле Adidas можно назвать «а-ди-да». Хорошо, тогда.

1. Lanvin

Обычно ошибочно принимают за: «Lan-vin»
Но на самом деле это произносится: «Lahn-vanh»

2. Moschino

Обычно ошибочно принимают за: «Moh-shee-no»
Но на самом деле это произносится: «Mos-key-no»

3. Gieves & Hawkes

Обычно ошибочно принимают за: «Jeeves & Hawkes»
Но на самом деле это произносится: «Geeves & Hawkes»

4.Hermès

Обычно ошибочно принимают за: «Her-mez»
Но на самом деле это произносится: «Er-mess»

5. Ральф Лорен

Обычно ошибочно принимают за: «Ralph-lo-REN»
Но на самом деле это произносится: «Ralph LAUR-en»

6. Louis Vuitton

Обычно ошибочно принимают за: «Loo-ee Vi-ton»
Но на самом деле это произносится: «Loo-ee Vwee-tton»

7. Живанши

Обычно ошибочно принимают за: «Gi-von-shee»
Но на самом деле это произносится: «Zjee-von-she»

8.Соня Рикель

Обычно ошибочно принимают за: «Соня Ри-келл»
Но на самом деле это произносится: «Сьюн-йах Ри-кей-эль»

9. Balmain

Обычно ошибочно принимают за: «Bal-mein»
Но на самом деле это произносится: «Bahl-mahn»

10. Loewe

Обычно ошибочно принимают за: «Lo-wey»
Но на самом деле это произносится: «Loh-wev-eh»

А вот еще несколько, с которыми мы полностью боремся….

Miu Miu — ‘Mew Mew’
Balenciaga — ‘Bal-en-see-agar’
Mary Katrantzou — ‘Mary Kat-rant-zoo’
Rodarte — ‘Ro-dart-ay’
Saint Laurent — ‘San Laur-ont ‘
Adidas -‘ Ah-dee-dahs ‘

Итак, теперь мы знаем.С какими другими модными брендами вы боретесь? Напишите нам в Твиттере @MarieClaireUK, и мы добавим их в список.

записей Фрица Филиппа Лёве

Всплывающее окно расширенного поиска позволяет создавать / уточнять сложные запросы в одном всплывающем окне с вкладками. Из расширенного поиска вы можете создавать логические поисковые запросы и применять к поиску одну или несколько категорий фильтров.

Обратите внимание, что нет определенного порядка вкладок в расширенном поиске, и вы можете применять фильтры в любом порядке по вашему выбору.Если есть несколько вариантов для категории фильтра, например (Субъекты) отображаемые параметры и количество записей основаны на вашем запросе. Каждый раз, когда вы переключаете вкладки, доступные параметры фильтра и счетчики записей обновляются, чтобы отразить любые изменения на предыдущей вкладке.

Просмотр расширенного поиска

По мере того, как вы создаете / уточняете свой поиск во всплывающем окне расширенного поиска, вы можете просмотреть весь поиск и количество результатов, которые будут возвращены, выбрав вкладку «Обзор».Вкладка также позволяет вам изменять поиск, удаляя фильтры.

Конструктор запросов поисковых запросов

Конструктор запросов предоставляет способ поиска записей с использованием нескольких комбинаций поисковых терминов и логических операторов.

Строки запроса

Расширенные запросы, созданные с помощью конструктора запросов, состоят из строк. Каждая строка состоит из поля, оператора условия и значения. Значение указывает поиску, что искать, Поле указывает поиску, где искать, а Оператор условия сообщает поиску, должна ли запись «содержать» или «исключать» значение.

Несколько условий поиска, введенных в одно значение условия, обрабатываются поиском как разделенные логическим оператором AND.
Условия поиска обрабатываются как нечувствительные к регистру. «Дождь» — это то же самое, что «дождь».
Точные фразы можно также вводить в «Значения условий», используя кавычки «» Например. «ледяные щиты»
? Символ может использоваться для поиска по подстановочному знаку, состоящему из одного символа. Например. Организации.
Символ * может использоваться для поиска по нескольким символам с подстановочными знаками.Например. Продлить *

Примечание. Подстановочные знаки можно применять к отдельным условиям поиска, но не к фразам.

Логические операторы

Конструктор запросов поддерживает использование логических операторов «И» и «ИЛИ» между строками запроса. Операторы применяются на уровне поиска, то есть все строки запроса разделяются одним и тем же логическим значением. Изменение логического значения между двумя строками запроса изменит значение между всеми строками запроса.

Пример — построение расширенного запроса

Здесь мы шаг за шагом создадим расширенный запрос, в котором мы хотим найти все записи, которые содержат «дождь» в заголовке и «наводнение» и «погода» в описании.

Убедитесь, что вы начинаете новый поиск, удалив все предыдущие поиски.
Откройте всплывающее окно расширенного поиска и убедитесь, что вы находитесь на вкладке «Поисковые запросы». По умолчанию должны отображаться две строки запроса.
В раскрывающемся списке «Поле» в 1-й строке запроса выберите «Заголовок».
В пустом поле значения в 1-й строке запроса введите поисковый запрос «Дождь».
В раскрывающемся списке «Поле» во 2-й строке запроса выберите «Описание».
В пустом поле значения во 2-й строке запроса введите поисковый запрос «наводнение».
Нажмите кнопку «Добавить строку», чтобы добавить третью строку запроса.
В раскрывающемся списке «Поле» в третьей строке запроса выберите «Описание».
В поле пустого значения в третьей строке запроса введите поисковый запрос «погода».
Нажмите кнопку «Поиск», чтобы выполнить поиск.

Тематический фильтр

Вкладка «Тема» позволяет уточнить поиск, выбрав темы, которые использовались для описания записей данных. Предметный словарь по умолчанию в Research Data Australia, который постоянно используется поставщиками данных, — это ANZSRC Field of Research.Также доступны другие поддерживаемые тематические словари, которые можно выбрать с помощью раскрывающегося списка, отображаемого в верхней части вкладки (обратите внимание, что для их загрузки может потребоваться некоторое время).

Тематические словари отображаются в виде иерархических деревьев с возможностью просмотра. Литералы темы, отображаемые в виде зеленых ссылок, можно щелкнуть, чтобы отобразить или скрыть дочерние темы.

Предметы могут быть добавлены или удалены из вашего поиска с помощью флажка, отображаемого рядом с каждым литералом темы. Можно выбрать несколько предметов в рамках одного предметного словаря, а также из разных словарей.

Количество записей с темой будет отображаться в конце каждого предметного литерала, например, «Экономика (30)». Обратите внимание, что, поскольку отношения между записями и субъектами могут быть много-много, подсчет, отображаемый с предметами, не обязательно будет соответствовать количеству записей, возвращаемых вашим поиском. Например, вы можете увидеть 3 объекта со знаком (1) рядом с ними. Это может разрешить одну запись, содержащую всех трех субъектов. Если записей с предметным значением не существует, с литералом будет отображаться (0).

Фильтр поставщика данных

Вкладка «Поставщик данных» позволяет ограничить поиск записями, опубликованными в Research Data Australia определенными поставщиками. Количество записей, доступных от поставщиков, будет отображаться в конце каждого литерала поставщика, например «Университет Бонда (25)».

Поставщики данных могут быть добавлены или удалены из поиска с помощью флажка, отображаемого с каждым литералом поставщика данных.

Фильтр доступа

Вкладка «Доступ» позволяет ограничить поиск записями с определенными типами доступа.Записи данных в Research Data Australia делятся на один из четырех типов доступа:

Открыть: Легкодоступные и повторно используемые данные.
Условно: Данные, которые доступны и могут использоваться повторно при соблюдении определенных условий (например, требуется бесплатная регистрация)
Ограничено: Доступ к данным каким-то образом ограничен (например, доступен только определенной группе пользователей или в определенном физическом месте)
Другое: <нет значения> или <пользовательское настраиваемое значение>

Количество записей, доступных для каждого типа доступа, будет отображаться в конце литерала доступа E.g ‘Open (23)’.

Типы доступа могут быть добавлены или удалены из поиска с помощью флажка, отображаемого с каждым литералом доступа.

Лицензионный фильтр

Группа фильтров лицензий	Включены типы лицензий
Открытая лицензия : Лицензия с широкими разрешениями, которые могут включать требование указывать источник или одинаковый общий ресурс (или и то, и другое), требующее производная работа подлежит лицензированию на тех же или аналогичных условиях, что и повторно используемый материал.	CC-BY CC-BY-SA PL
Некоммерческая лицензия : Что касается Открытой лицензии, но также ограничение повторного использования только в некоммерческих целях.	CC-BY-NC CC BY-NC-SA
Непроизводная лицензия : Что касается Открытой лицензии, но также запрещает адаптацию материала, и во втором случае также ограничивается повторное использование только в некоммерческих целях.	CC BY-ND CC-BY-NC-ND
Ограничительная лицензия : Лицензия, запрещающая повторное использование материалов, если не установлены определенные ограничительные условия выполнены. Обратите внимание на лицензионные ограничения и права на контакты обладатель разрешений, выходящих за рамки условий лицензии.	AusGOAL
Без лицензии : Все права на повторное использование, передачу, публикацию или воспроизведение материала являются защищены, за исключением конкретных прав, содержащихся в Закон об авторском праве 1968 года или аналогичные законы.Свяжитесь с правообладателем для разрешение на повторное использование этого материала.	Нет лицензии
Прочие	<нет значения> или <пользовательский настраиваемый значение>

Количество записей, доступных в каждой группе фильтров лицензий, будет отображаться в конце литерала лицензии, например, «Нет лицензии (57)».

Лицензионные группы могут быть добавлены или удалены из поиска с помощью флажка, отображаемого рядом с каждым лицензионным литералом.

Фильтр периода времени

Вкладка «Период времени» позволяет ограничить поиск только записями, которые содержат информацию о временном охвате *, попадающую в определенный годовой диапазон. Фильтр реализован в виде пары текстовых полей, позволяющих ввести «С года». и «Год». Текст-заполнитель, отображаемый в текстовых полях, указывает доступный временной диапазон, в котором вы можете выполнять поиск.

Чтобы отфильтровать результаты по периоду времени: Откройте всплывающее окно расширенного поиска и убедитесь, что вы находитесь на вкладке «Период времени».Введите диапазон периода времени с помощью полей From Year и To Year. Нажмите кнопку «Поиск», чтобы выполнить поиск.

* Временное покрытие = период времени, в течение которого были собраны данные или проведены наблюдения

Примечание: Если записи в вашем поиске не содержат временной информации, на вкладке будет отображаться следующее сообщение: «Результаты поиска не содержат информации о периоде времени».

Фильтр местоположения

Вкладка «Местоположение» позволит вам отфильтровать результаты поиска только для записей, для которых описана сопоставимая информация о местоположении, которая попадает в указанный регион.

Чтобы нарисовать регион на карте:

откройте всплывающее окно расширенного поиска и убедитесь, что вы находитесь на вкладке «Местоположение».
Используйте инструменты навигации по карте в левой части карты, пока не получите требуемый вид карты.
Выберите инструмент «Ящик» ().
Щелкните карту и перетащите мышь, чтобы нарисовать прямоугольник.
Отпустите кнопку мыши, чтобы закончить. Если есть записи с информацией о местоположении, доступной для вашего выбора, для первых 15 записей будет отображаться красный маркер.
Нажмите кнопку «Поиск», чтобы выполнить поиск.

Примечание. Чтобы изменить или перерисовать область, просто выполните указанные выше действия еще раз.

Транскрипция и произношение мандаринского языка

Транскрипция и произношение китайского языка

Вопрос: «Доктор Уиллер, одна книга, которую я прочитал, заклинания Даосизм как Даосизм .Который орфография верна? «

A: «Они оба ар. «

Q: «В какую сторону я произношу это? «

A: «Где-то» между двумя ».

Часто звуки, употребляемые на других языках не совпадают в точности с теми, которые используются в английском языке.Например, на английском языке столица Китая иногда пишется как Пекин а иногда как Пекин . Оба относятся к одному и тому же городу, они это всего лишь две разные попытки «расшифровать» или «транслитерировать» мандаринский язык звучит на совместимые или сопоставимые английские. В других случаях китайские слова, такие как Ku Li (современный английский «Coolie») транслитерировать довольно легко.

Итальянский иезуит по имени Маттео Риччи основал первую крупную католическую миссию в Китае (1583-1610). Он впервые перевел мандаринский язык на римский (европейский) алфавит. С его времен лингвисты занялись примерно двумя дюжинами или более попытки или больше свести китайские звуки к легко понятным эквиваленты в западных языках. Проблема усугубляется тот факт, что оригинальные китайские тексты представляют слова с помощью несколько десятков тысяч отдельных пиктограмм.На долгое время, преобладали три системы европейской транскрипции.

Этими тремя европейскими системами являются:

используемая система Уэйда (или Уэйда-Джайлза) в Америке и Великобритании
Французская Экстем-Восточная школа используется во Франции
Система Лессинга, используемая в Германии

С 1958 года сами китайцы изо всех сил пытались создать единую фонетическую транскрипцию с использованием Система Лессинга, которую они называют hanyu pinyin fang’an («Схема китайского фонетического алфавита»).Большинство ученые обозначают его кратко как пиньинь , а поскольку 1 января 1979 г. в Китае изданы все книги на иностранных языках. использовали систему пиньинь , и сейчас ее обучают в государственных китайских школах с использованием стандартных китайских иероглифов.

Однако многие начальные научные справочники, напечатанные в Америке и Европе, по-прежнему используют книгу Уэйда-Джайлза. система: Очерки китайской цивилизации Дерка Бодде , Социологическое исследование Уильяма Хинтона Fanshen and Shenfan , Кембриджская история Китая Твитчетта и Лоу, , Джозеф Needham’s Наука и цивилизация в Китае , Fairbank и Райшауэр Китай, традиции и трансформации , Жак Герне История китайской цивилизации , Хакер Императорское прошлое Китая и Сикмана и Сопера Искусство и архитектура Китая , и многие другие.

Чтобы выяснить, как произносится слово, используя по системе Уэйда-Джайлза, следующее может служить приблизительным руководством: как я воспроизвел здесь из книги Эдгара Сноу Другая сторона реки , авторские примечания Дэвида Уингроува к его художественной литературе серия Chung Kuo и студенческий справочник на китайском языке Словарь: Введение .

ЗАПУСКАЮЩИЕ МАНДАРИНСКИЕ СОГЛАСНЫЕ:

Chi произносится как английский Гы!

Ци звучит как «Чи». Например, Ch’in в точности похож на английский chin .

Чу примерно такой же, как английский Еврей , как и в Чу Дэ («Еврей Духр»).

Ch’u произносится как chew на английском.

Цунг произносится как «дзунг»,

Ts’ung имеет вид ts в Пэтси или це-це муха

Tai звучит как английский die .

Тай звучит как английский галстук .

Пай звучит как английский купи .

Паи звучит как английский пирог .

Кунг похож на «Гунг» (как в Gung a Din ).

Кунг с апострофом k , который звучит как k в виде .

J эквивалентно r , но он невнятный, как в « rrrrun «.

H перед s , как в hsi , эквивалент претендента, но от него часто отказываются ( Sian для Hsian и т. д.)

ПУТЬ МАНДАРИНОВЫХ ГЛАВНЫХ:

Гласные в китайском языке обычно короткие или средний, не длинный и плоский. Таким образом, Tang звучит как « дон «, никогда не люблю этот американский напиток космонавты впитывают. « Тан » произносится « Ключ .»
a — как a в отец
e — как u в пробеге
eh — как e in hen
i — как гласная в см.
ih — как e в ее
o — как гласная в выглядит
оу — как гласная в идти
u — как гласная в , скоро .

Все это кажется ошеломляющим? Иметь терпение и вы это освоите! Помните чудесный аллитерационный Китайская пословица:

Чи Яо Ю Хэн Синь Тие Чу Мо Чэн Чэнь ….

Если только есть настойчивость, даже железный столб будет втиснут в игла….

Суперспирализация ДНК, связанная с транскрипцией, определяет хромосомное расположение бактериальных генов | Исследование нуклеиновых кислот

Абстрактные

В последнее десятилетие центральное значение суперспирализации ДНК в организации хромосом и глобальной генной регуляции бактерий становилось все более очевидным. С регулятором, содержащим более 2000 генов в Escherichia coli , суперспирализация ДНК является одним из наиболее влиятельных регуляторов экспрессии генов, обнаруженных до сих пор у бактерий.Однако механизм, создающий тысячи разнообразных паттернов временной экспрессии генов, координируемых с помощью суперспирализации ДНК, остается неясным. В этом исследовании мы показываем, что специфическая хромосомная структура генов модулирует локальные уровни суперспирализации ДНК на промоторах генов посредством транскрипционно-связанной суперспирализации ДНК (TCDS) в модельном организме E . coli . Наши результаты обеспечивают последовательное объяснение сильной положительной связи паттернов временной экспрессии генов соседних генов.Кроме того, с помощью сравнительной геномики мы можем предоставить доказательства того, что TCDS является движущей силой эволюции паттернов хромосомного гена у других Enterobacteriaceae. Имеющиеся в настоящее время данные о чувствительности промотора к суперспирализации доказывают, что тот же принцип применим и для эволюционной отдаленной грамположительной патогенной бактерии Streptococcus pneumoniae . Более того, наши результаты полностью согласуются с недавними исследованиями регулирующего воздействия TCDS на пары генов у эукариотов, что подтверждает широкую применимость нашего анализа.

ВВЕДЕНИЕ

В предыдущие десятилетия исследования регуляции транскрипции у бактерий и других царств были сосредоточены на ДНК-связывающих факторах транскрипции, формирующих большие регуляторные сети. Однако даже в хорошо изученном модельном организме Escherichia coli для большинства генов неизвестен какой-либо регулятор, хотя эти гены демонстрируют сложные паттерны экспрессии во время цикла роста бактерий. Остается открытым вопрос, являются ли их факторы транскрипции или сайты связывания факторов транскрипции еще не идентифицированными или существуют другие механизмы регуляторного контроля, по крайней мере, для субнабора этих генов.Было показано, что помимо классической регуляции генов, основанной на факторах транскрипции, суперспирализация ДНК важна для регуляции транскрипции у бактерий. Поскольку более половины генов чувствительны к сверхспирализации ДНК (1), это центральный регуляторный фактор (2). Считается, что суперспирализация ДНК влияет на транскрипцию множеством способов. Что наиболее важно, он поддерживает локальное раскручивание ДНК, облегчая инициацию транскрипции РНК-полимеразой (РНКП) (3). Более того, он может влиять на локальную геометрию ДНК (фазирование регуляторных сайтов и кривизну ДНК) и, таким образом, модулировать сродство связывания факторов транскрипции или олигомерное состояние инициирующей RNAP (4-6).

В E . coli , ДНК отрицательно свернута. Уровни суперспирализации ДНК находятся под жестким гомеостатическим контролем (7–9). Гомеостаз сохраняется за счет противоположной активности ДНК-гиразы и топоизомераз I и IV. Сверхспиральность свободной ДНК, кроме того, буферизуется многочисленными нуклеоид-ассоциированными белками (NAP), которые обертывают ДНК и тем самым ограничивают суперспирали ДНК (5,10,11). Хотя топоизомеразы и NAP уравновешивают уровни глобальной суперспирализации ДНК, общий уровень отрицательной сверхспиральности непрерывно снижается от экспоненциальной до стационарной фазы роста (12).Этот эффект в основном опосредован изменениями активности гиразы (13,14) и состава NAP (5,15,16). Было показано, что изменения глобальной суперспирализации ДНК имеют прямое отношение к зависимой от фазы роста регуляции генов (1,17-19). Анализ генной онтологии чувствительных к суперспирализации генов показал, что базальный анаболический и катаболический метаболизм связан с генами, требующими высокого и низкого уровней отрицательной суперспирализации ДНК, соответственно (1, 20). Было показано, что во время экспоненциальной фазы гены, близкие к началу репликации, предпочитающие высокую отрицательную суперспирализацию ДНК, демонстрировали значительно более высокие уровни экспрессии, чем в среднем для генов в этой области хромосомы, тогда как гены, предпочитающие низкие уровни отрицательной суперспирализации ДНК, демонстрировали значительно более низкие уровни экспрессии. в том же регионе.Это несоответствие экспрессии генов или генов, чувствительных к сверхспирализации, уменьшалось в направлении концевой области (21). Это можно объяснить градиентом суперспирализации ДНК вдоль оси oriC-ter (22). Гипотеза градиента была дополнительно подтверждена асимметричным распределением сайтов связывания гиразы (21), а именно высокой частотой связывания в oriC-проксимальной половине хромосомы, снижающейся к концевой области. Хотя временная экспрессия генов, чувствительных к суперспирализации, предполагает регуляцию с помощью градиента суперспирализации, их хромосомное распределение не обнаруживает очевидного паттерна.Это удивительно, поскольку, принимая во внимание градиент supercoiling, можно ожидать четкого разделения генов, предпочитающих высокую отрицательную суперспирализацию (hyp-гены) в проксимальной области oriC, и генов, предпочитающих релаксацию ДНК (rel-гены) в проксимальной области конца. Одной из гипотез, объясняющих это несоответствие, может быть дифференциация паттернов экспрессии путем помещения генов с разными предпочтениями суперспирализации в один и тот же локальный контекст суперспирализации. Например, в области, проксимальной к источнику, предполагается, что она имеет высокие уровни отрицательной суперспирализации ДНК во время экспоненциального роста, гены hyp будут проявлять высокую активность, тогда как активность гена rel будет низкой.Учитывая, что половина всех генов чувствительны к суперспирализации, это приведет к антагонистической экспрессии соседей или чередующихся островков генов с аналогичной чувствительностью к суперспирализации. Однако нет очевидного паттерна в распределении чувствительных к суперспирализации генов или антагонистического уровня экспрессии соседей. Напротив, уровни экспрессии соседних генов в целом положительно коррелируют. Согласно нашим результатам, представленным в этом исследовании, и в полном соответствии с литературой (23), экспрессия генов соседних генов (в этом исследовании: оперонов) очень похожа на протяжении всего цикла роста бактерий.Остается вопрос, как суперспирализация ДНК может координировать чувствительные к суперспирализации гены с учетом их случайного хромосомного положения? Чтобы отделить экспрессию генов, чувствительных к суперспирализации, от глобальных уровней суперспирализации ДНК, необходима модуляция локальных уровней суперспирализации. Несоответствие между суперспирализацией ДНК, обеспечиваемой глобально, и оптимумом промотора обеспечивается локально. Такие локальные корректировки уровней суперспирализации ДНК могут быть реализованы самой транскрипцией благодаря суперспирализации, генерируемой РНК-полимеразой (RNAP) во время элонгации, дублированной суперспирализацией ДНК, связанной с транскрипцией (TCDS).Основополагающий механизм был впервые описан в модели двойной суперспиральной области, предложенной Лю и Ван в 1987 г. (24). В этой модели RNAP создает зеркально-инвертированный сдвиг локальной суперспирали ДНК во время транскрипции с отрицательными суперспиралями, генерируемыми выше по течению, и положительными суперспиралями ниже по течению от перемещающейся RNAP. Сдвигу суперспирали ДНК противодействует активность топоизомеразы I, расслабляющей отрицательные суперспирали перед RNAP, и гиразы, трансформирующей положительные суперспирали ДНК в отрицательные после RNAP.Несмотря на активность топоизомеразы, оставшиеся суперспирали могут свободно диффундировать в пределах нескольких килобаз (25-27) и влиять на локальные уровни суперспирализации ДНК на проксимальных промоторах. Для отдельных промоторов у нескольких видов бактерий было показано, что TCDS влияет на транскрипцию соседних генов (28–31). Ярким примером регуляторного эффекта TCDS являются механизмы реле, впервые описанные для области ilvIH-leuO-leuABCD в Salmonella typhimurium (32), а позже также обнаруженные в E . coli (33). Это позволяет регулирующему эффекту TCDS соединять несколько килобаз на хромосоме без ослабления. Здесь оперон ilIH , расположенный выше по течению, активирует расположенный ниже промотор leuO через свой TCDS. Затем транскрипция leuO активирует оперон leuABCD через TCDS. Таким образом, сигнал TCDS усиливается на пути от ilvIH к leuABCD через LeuO, опосредуя связывание экспрессии генов удаленных генов. Однако диффузия суперспиралей ДНК ограничена временными барьерами, создающими суперспиральные домены размером около 10 т.п.н. (34).Однако размер доменов в литературе неоднороден. В более ранних экспериментах сообщалось о доменах размером до 100 кб (35,36). Считается, что эти домены зависят от закрепления ДНК в мембране посредством одновременной транскрипции, трансляции и встраивания в мембрану белков, ассоциированных с мембраной (37), активности транслоказы, например. FtsK (38) и NAP-зависимым образованием топологически замкнутых доменов ДНК. С одной стороны, эти домены могут ограничивать влияние TCDS несколькими килобазами, с другой стороны, они позволяют локальное накопление суперспирализации ДНК за счет блокированной диффузии.Но даже без таких барьеров суперспирализации транскрипция может производить достаточно TCDS для значительного изменения уровней суперспирализации (39,40). При консервативном предположении о суперспиральных доменах размером 10 т.п.н., TCDS все еще может влиять на экспрессию примерно пяти генов выше и ниже транскрибируемого гена из-за плотной упаковки генов в бактериальных геномах. Учитывая, что в среднем каждый второй ген в E. coli чувствителен к суперспирализации ДНК, необходим систематический анализ регуляции экспрессии генов с помощью TCDS.В этом исследовании мы анализируем влияние TCDS на экспрессию генов и архитектуру хромосом. Мы показываем, что сочетание ориентации генов, силы промотора и чувствительности к суперспирализации являются детерминантами локальной экспрессии генов, управляющих расположением генов на хромосоме E. coli . Кроме того, мы предоставляем доказательства того, что это обоснование сохраняется и у других бактерий.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Анализ на основе оперонов

Чтобы избежать предвзятости из-за сходства экспрессии внутри оперона и, следовательно, тривиального сочетания экспрессии генов или уровней TCDS, мы анализировали данные исключительно на уровне оперона.Для этого исследования мы объединили гены, чувствительные к суперспирализации, обнаруженные при лечении норфлоксацином wt, Δfis и Δhns (1), и назвали оперон hyp или rel, если хотя бы один ген был отнесен к этой категории в Blot et al . Ни один оперон не содержал обоих типов генов. Уровень экспрессии оперона, необходимый для модели TCDS, является средним по всем генам в опероне, принимая во внимание различный вклад длины гена. Обратите внимание, что уровни экспрессии внутри оперона были очень похожи. Усреднение не должно приводить к смещению.Для большей ясности мы используем в тексте термин «ген» вместо «оперон», хотя весь анализ проводился на уровне оперона.

TCDS модель

Для анализа хромосомных TCDS мы использовали опубликованные данные временной экспрессии генов E . coli K12 (22). В нашей модели каждая база в аннотированной кодирующей последовательности является источником положительной и отрицательной суперспирализации согласно модели Лю-Ванга. Интенсивность излучения суперспиралей зависит от уровня экспрессии гена.{-c \ frac {(d_ {g, \ vec {n} _i} + j)} {r}} \ end {формула *}
(1) TCDS T промотора каждого гена g вычислено, где n — набор соседей в диапазоне r ; знак — эффект (положительный или отрицательный), зависящий от ориентации соседа и | n _i | — длина последовательности соседа i . Формула описывает экспоненциальное затухание эффекта TCDS с расстоянием | $ d_ {g, n_i} $ | с момента его создания, для моделирования эффектов диффузии и топоизомеразы.Модель реализует спад до 1% TCDS на границе данного диапазона (константа c ) и никакого эффекта за пределами этого диапазона. Этот диапазон указан для всех результатов исследования. Кроме того, мы предполагаем, что TCDS различных соседей является аддитивным. Чтобы учесть длину гена, продуцирующего TCDS (длинный ген может уже охватывать значительную часть диапазона TCDS), мы вычисляем результирующий TCDS от каждого основания транскрипта до целевого промотора (внутренняя сумма уравнения 1) и суммируем их. .TCDS, созданный в начале транскрипции рядом с промотором, например, оказывает меньшее влияние на нижестоящий ген, чем TCDS, созданный в конце транскрипции, намного ниже и ближе к нижестоящему гену. Чтобы избежать смещения из-за неполной и сложной аннотации промоторов, мы аппроксимировали положение промотора каждого гена 5′-концом кодирующей последовательности. У бактерий UTR довольно короткие (≈100 п.н.) и однородны по длине и не должны оказывать качественного влияния на исследование.Аналогичные рассуждения справедливы для приближения длины стенограммы. Мы аппроксимировали длину мРНК надежными и хорошо задокументированными длинами кодирующих последовательностей.
Конструкция хромосомной вставки
На первом этапе мы клонировали ген устойчивости к гентамицину и производное зеленого флуоресцентного белка venus на плазмиде pUC18. Удлинение с перекрытием использовали для объединения резистентности к гентамицину и венеры. Фрагмент клонировали в pUC18 посредством рестрикции HindIII и EcoRI.Мы заменили нативную хромосомную открытую рамку считывания (ORF) tufB этой конструкцией в E . coli CSH50 с использованием гомологичной рекомбинации (система RED / ET). Штамм не показал явной недостаточности роста в применяемых экспериментальных условиях, а сигнал флуоресценции соответствовал данным транскриптомики дикого типа. На втором этапе мы клонировали mCherry ниже промотора tet. Для отбора клонировали кассету устойчивости к ампициллину.Используя гомологичную рекомбинацию, мы вставили эту конструкцию в хромосому выше любого указанного промотора tufB без нарушения любой аннотированной последовательности, включая повторы. Также вторая конструкция не показала дефектов роста в применяемых экспериментальных условиях. Паттерн активности tufBP не изменялся в неиндуцированных условиях по сравнению с конструкцией-предшественником и данными транскриптомики. Праймеры, используемые для каждого этапа клонирования, перечислены в таблице 1.
Список праймеров для хромосомных вставок
tufB Таблица 1.
Список праймеров для tufB хромосомных вставок
Праймер вперед . Праймер обратный . Шаг клонирования .
5′-CATGTTGCCTGGTTGATGTGGTGA TATCACCGATTTATCCGTGTCTTAGA GGGACAATCGATGGTGAGCAAGGGCG AGGAGC-3 ‘ 5′-GGGCATCAAATGATGCCCTTTTAGTGCG CATTGCGTCAAATGTTATCGGCAACATT ACCCTGTTATCCCTAGTTAC-3′ венера праймера с фланкирующими гомологии последовательностей tufB ORF для красного Е / Т рекомбинации
5 ‘-GTCTTCTTGCGCTAATTTTTTGCTAG GGATAACAGGGTAATTCTAGAGACGC ACACCGTGGAAAC-3’ 5′-CATGGAATTCATTACCCTGTTATCCCTA TGGACTCACAAAGAAAAAACGCCCGGTG TGCAAGACCGAGCGTTCTGAACAACCCG GGGCGGCGTTGTGACAATTTAC-3 ‘ Гентамицин ген устойчивости к праймер для удлинения перекрытия с tetP-mCherry
5′-CATGAAGCTTGTTGACACTCTATCAT TGATAGAGTTATTTTACCACTCGGAT CCAGGAGGAACAATATGGTGTCTATC ACTAAAGATCAAATCATGGTGAGCAA GGGCGAGGAG-3′ 5′-ATTACCCTGTTATCCCTAGCAAAAAATT AGCGCAAGAAGACAAAAATCACCTTGCG CTAATGCTCTGTTACAGGGTACCTTACTTG TACAGCTCGTCCATG-3 ‘ праймер tetP-mCherry для перекрытия ген устойчивости к ампициллину
5′-GGGAGGAATAATAAGAAAAAATCT CTGCCAGGAAGCTATCGTTGAAAAGC AATGTGACGAGCGGATAACAATTTCA CACAGG-3 ‘ 5′-CACTTTTTCAACATCATTGTGCTCAACA ATGCGCTCCTGCTAAACCATAATTCTTTTT ATCAGAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTT-3′ праймеров дл амплификации конструкции tetP-mCherry-ампициллина с гомологии для вставки расходящихся в верхнем течении область tufB
Праймер передний . Праймер обратный . Шаг клонирования .
5′-CATGTTGCCTGGTTGATGTGGTGA TATCACCGATTTATCCGTGTCTTAGA GGGACAATCGATGGTGAGCAAGGGCG AGGAGC-3 ‘ 5′-GGGCATCAAATGATGCCCTTTTAGTGCG CATTGCGTCAAATGTTATCGGCAACATT ACCCTGTTATCCCTAGTTAC-3′ венера праймера с фланкирующими гомологии последовательностей tufB ORF для красного Е / Т рекомбинации
5 ‘-GTCTTCTTGCGCTAATTTTTTGCTAG GGATAACAGGGTAATTCTAGAGACGC ACACCGTGGAAAC-3’ 5′-CATGGAATTCATTACCCTGTTATCCCTA TGGACTCACAAAGAAAAAACGCCCGGTG TGCAAGACCGAGCGTTCTGAACAACCCG GGGCGGCGTTGTGACAATTTAC-3 ‘ Гентамицин ген устойчивости к праймер для удлинения перекрытия с tetP-mCherry
5′-CATGAAGCTTGTTGACACTCTATCAT TGATAGAGTTATTTTACCACTCGGAT CCAGGAGGAACAATATGGTGTCTATC ACTAAAGATCAAATCATGGTGAGCAA GGGCGAGGAG-3′ 5′-ATTACCCTGTTATCCCTAGCAAAAAATT AGCGCAAGAAGACAAAAATCACCTTGCG CTAATGCTCTGTTACAGGGTACCTTACTTG TACAGCTCGTCCATG-3 ‘ праймер tetP-mCherry для перекрытия ген устойчивости к ампициллину
5′-GGGAGGAATAATAAGAAAAAATCT CTGCCAGGAAGCTATCGTTGAAAAGC AATGTGACGAGCGGATAACAATTTCA CACAGG-3 ‘ 5′-CACTTTTTCAACATCATTGTGCTCAACA ATGCGCTCCTGCTAAACCATAATTCTTTTT ATCAGAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTT-3′ праймеров дл амплификации конструкции tetP-mCherry-ампициллина с гомологии для вставки расходящихся в верхнем течении область туфБ
Таблица 1.
Список праймеров для tufB хромосомных вставок
Праймер вперед . Праймер обратный . Шаг клонирования .
5′-CATGTTGCCTGGTTGATGTGGTGA TATCACCGATTTATCCGTGTCTTAGA GGGACAATCGATGGTGAGCAAGGGCG AGGAGC-3 ‘ 5′-GGGCATCAAATGATGCCCTTTTAGTGCG CATTGCGTCAAATGTTATCGGCAACATT ACCCTGTTATCCCTAGTTAC-3′ венера праймера с фланкирующими гомологии последовательностей tufB ORF для красного Е / Т рекомбинации
5 ‘-GTCTTCTTGCGCTAATTTTTTGCTAG GGATAACAGGGTAATTCTAGAGACGC ACACCGTGGAAAC-3’ 5′-CATGGAATTCATTACCCTGTTATCCCTA TGGACTCACAAAGAAAAAACGCCCGGTG TGCAAGACCGAGCGTTCTGAACAACCCG GGGCGGCGTTGTGACAATTTAC-3 ‘ Гентамицин ген устойчивости к праймер для удлинения перекрытия с tetP-mCherry
5′-CATGAAGCTTGTTGACACTCTATCAT TGATAGAGTTATTTTACCACTCGGAT CCAGGAGGAACAATATGGTGTCTATC ACTAAAGATCAAATCATGGTGAGCAA GGGCGAGGAG-3′ 5′-ATTACCCTGTTATCCCTAGCAAAAAATT AGCGCAAGAAGACAAAAATCACCTTGCG CTAATGCTCTGTTACAGGGTACCTTACTTG TACAGCTCGTCCATG-3 ‘ праймер tetP-mCherry для перекрытия ген устойчивости к ампициллину
5′-GGGAGGAATAATAAGAAAAAATCT CTGCCAGGAAGCTATCGTTGAAAAGC AATGTGACGAGCGGATAACAATTTCA CACAGG-3 ‘ 5′-CACTTTTTCAACATCATTGTGCTCAACA ATGCGCTCCTGCTAAACCATAATTCTTTTT ATCAGAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTT-3′ праймеров дл амплификации конструкции tetP-mCherry-ампициллина с гомологии для вставки расходящихся в верхнем течении область tufB
Праймер передний . Праймер обратный . Шаг клонирования .
5′-CATGTTGCCTGGTTGATGTGGTGA TATCACCGATTTATCCGTGTCTTAGA GGGACAATCGATGGTGAGCAAGGGCG AGGAGC-3 ‘ 5′-GGGCATCAAATGATGCCCTTTTAGTGCG CATTGCGTCAAATGTTATCGGCAACATT ACCCTGTTATCCCTAGTTAC-3′ венера праймера с фланкирующими гомологии последовательностей tufB ORF для красного Е / Т рекомбинации
5 ‘-GTCTTCTTGCGCTAATTTTTTGCTAG GGATAACAGGGTAATTCTAGAGACGC ACACCGTGGAAAC-3’ 5′-CATGGAATTCATTACCCTGTTATCCCTA TGGACTCACAAAGAAAAAACGCCCGGTG TGCAAGACCGAGCGTTCTGAACAACCCG GGGCGGCGTTGTGACAATTTAC-3 ‘ Гентамицин ген устойчивости к праймер для удлинения перекрытия с tetP-mCherry
5′-CATGAAGCTTGTTGACACTCTATCAT TGATAGAGTTATTTTACCACTCGGAT CCAGGAGGAACAATATGGTGTCTATC ACTAAAGATCAAATCATGGTGAGCAA GGGCGAGGAG-3′ 5′-ATTACCCTGTTATCCCTAGCAAAAAATT AGCGCAAGAAGACAAAAATCACCTTGCG CTAATGCTCTGTTACAGGGTACCTTACTTG TACAGCTCGTCCATG-3 ‘ праймер tetP-mCherry для перекрытия ген устойчивости к ампициллину
5′-GGGAGGAATAATAAGAAAAAATCT CTGCCAGGAAGCTATCGTTGAAAAGC AATGTGACGAGCGGATAACAATTTCA CACAGG-3 ‘ 5′-CACTTTTTCAACATCATTGTGCTCAACA ATGCGCTCCTGCTAAACCATAATTCTTTTT ATCAGAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTT-3′ праймеров дл амплификации конструкции tetP-mCherry-ампициллина с гомологии для вставки расходящихся в верхнем течении область tufB
Условия эксперимента
Все измерения флуоресценции проводились в среде LB при 37 ° C с непрерывным встряхиванием с использованием ридера Tecan infinite 200 pro.Измерения проводились каждые 5 мин длительностью ∼30 с. Чтобы репрессировать хромосомный промотор tet, мы трансформировали низкокопийную плазмиду (Pcatt-TRE18), несущую tetR. Для индукции репрессированного промотора tet мы использовали ангидротетрациклин, нетоксичное производное тетрациклина. Конечные концентрации приведены на соответствующем рисунке. Активность промотора определяли по интенсивности флуоресценции mCherry и venus на флюоресцентном ридере Tecan infinite 200 pro.
Выборка экспериментальных данных
Streptococcus pneumoniae
Для доказательства общей применимости наших подходов мы исследовали имеющиеся данные по экспрессии генов другой бактерии.Для Streptococcus pneumoniae подробные данные транскриптомики лечения новобиоцином и множественных условий роста были доступны в базе данных GEO. Различные условия роста были необходимы для подтверждения стабильного отклонения TCDS на чувствительные к сверхспирализации генов, вызванного фиксированным порядком и ориентацией генов во всех условиях. Для S . pneumoniae , мы выбрали полный набор генов, чувствительных к суперспирализации, идентифицированных путем сравнения обработанных новобиоцином и необработанных клеток Феррандизом et al .2004 (19). Данные по экспрессии генов для расчетов TCDS были взяты из Yadav et al . (41) набор данных биопленки (GEO: GSM854585, GSM854586). Данные состоят из трех реплик роста планктона и биопленки.
Сравнительный подход к геномике
Чтобы исследовать сохранение эффектов TCDS, мы сосредоточили внимание на кладе Enterobacteriaceae. В этой кладе виды не особо разошлись, чтобы исследовать большой набор консервативных ортологичных генов.Ортологические группы определяли с помощью программного обеспечения proteinortho (v5.07) со стандартными настройками ( E -value = 1e-5, blastp, α = 0,5, охват = 50%) и опции синтении для разделения коортологов. Набор Enterobacteriaceae был взят из базы данных DoriC (42), причем каждый вид присутствует в наборе данных один раз. Последовательности белков и файлы аннотаций были предоставлены ftp-сайтом NCBI (ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/Bacteria/). Результирующий основной геном всех энтеробактерий, внесенных в список NCBI и DoriC, составляет более половины от E.coli (см. Дополнительный список). При ограничении основными генами было обеспечено равное количество исследуемых генов для всех видов. Из ортологичных генов мы определили триады, состоящие из целевого гена, соседей с наиболее сильным положительным и самым сильным отрицательным вкладом TCDS на уровне TCDS целевого гена. Чтобы исследовать сохранение TCDS-зависимой регуляции гена, мы выбрали триады с сильной положительной корреляцией (коэффициент Пирсона ≥0.9) или сильно отрицательной корреляцией (коэффициент Пирсона ≤ −0.9) TCDS и временной экспрессии гена-мишени и по крайней мере умеренное среднее смещение TCDS во времени (| TCDS | ≥ 0,1) целевого гена в E. coli . Кроме того, в статистику были включены только триады, в которых все три гена оставались на расстоянии 10 т.п.н. друг от друга. Это обеспечило правдоподобное воздействие TCDS на целевой ген. Для каждой триады консервативных генов мы определили частоту сохранения знака TCDS (положительный или отрицательный TCDS) целевого гена, поэтому мы проверили, остается ли качественное влияние генов на мишень таким же.Положительное влияние TCDS может быть реализовано посредством восходящего тандема или нисходящей сходящейся ориентации соседа по направлению к цели. Напротив, сосед с дивергентной ориентацией вверх или вниз по течению имеет отрицательный вклад TCDS на уровне TCDS гена-мишени. Впоследствии для каждой триады мы отдельно подсчитали количество консервативных воздействий двух других генов в триаде на целевой ген внутри энтеробактерий. Две группы положительного и отрицательного вклада TCDS в триаде были дополнительно разделены на положительное и отрицательное влияние на транскрипцию-мишень в E.coli с получением четырех групп. Тип воздействия на транскрипцию-мишень зависит от типа воздействия TCDS на ген-мишень и реакции экспрессии целевого гена на уровне TCDS (рис. 7B). Например, влияние на транскрипцию было названо положительным, если ген с положительным влиянием на целевой ген TCDS в E. coli (релаксация ДНК) будет принадлежать целевому гену, который предпочитает релаксацию, следовательно, показал положительную корреляцию TCDS и транскрипции. . Если большинство (> 50%) ортологов показали сохранение воздействия TCDS, мы считали ген консервативным для соответствующей группы, в противном случае — неконсервативным.Суммируя эти подсчеты по всем исследованным триадам генов, мы получили статистику количества консервативных эффектов TCDS на ортологичные гены у Enterobacteriaceae.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Зависимое от расстояния сходство экспрессии временных генов
Чтобы изучить глобальное влияние TCDS на экспрессию генов, мы сначала исследовали положительную корреляцию транскрипции соседних генов, описанную в литературе (23). Для прочного основания мы сопоставили кривые временной экспрессии генов, взятые на протяжении всего периода E.coli цикл роста от экспоненциальной к стационарной фазе (22). Чтобы избежать смещения из-за сходства экспрессии временных генов из-за котранскрипции, мы ограничили наш анализ оперонами E. coli . Обратите внимание, что на протяжении всего раздела результатов мы анализируем данные на уровне оперона и обращаемся к генам для удобства чтения (см. Раздел «Материалы и методы»). Для второго контроля мы разделили пары оперонов на дивергентные, конвергентные и тандемные пары оперонов, чтобы выявить смещения, вызванные неизвестными структурами оперонов или общими регуляторными сайтами.Такие смещения будут видны только в тандемных или дивергентно ориентированных оперонах. На рис. 1 представлены средние коэффициенты корреляции паттернов временной экспрессии оперонов на разных расстояниях и ориентациях. Наш анализ дает два результата. Прежде всего, корреляция экспрессии временных генов не зависит от относительной ориентации. Это исключает неизвестные единицы транскрипции или опероны как основной источник сходной генной экспрессии проксимальных генов. В этом случае этот эффект будут проявлять только тандемные пары.Более того, общие регуляторные области могут быть исключены как основной фактор в паттернах экспрессии. Здесь, в основном, дивергентные гены, которые могут иметь общую регуляторную область, будут проявлять этот эффект. Общие регуляторы, которые могли бы объяснить независимость ориентации, могут быть исключены из-за большого разброса регуляторных сайтов на хромосоме и различного способа регуляции (репрессии или активации) большинства регуляторов. Следовательно, соседние опероны с одним и тем же регулятором и одним и тем же способом регуляции встречаются редко.Остающийся принцип, который мог бы объяснить эффект, — это транскрипционная активность соседей и результирующее локальное изменение суперспирализации посредством TCDS на промоторе гена-мишени. Эта гипотеза подтверждается вторым наблюдением, а именно уменьшением сходства экспрессии с увеличением расстояния между оперонами (рис. 1), совпадающими примерно с доменами суперспирализации размером 10 kb.
Рисунок 1.
Пространственно разрешенная корреляция экспрессии временных генов. Светло-серые столбцы представляют собой среднюю корреляцию Пирсона временной экспрессии всех пар оперонов с соответствующей ориентацией.Черная контрольная полоса указывает среднюю корреляцию случайно переназначенных пар генов из одного и того же пула. По оси абсцисс указано количество оперонов между парой исследуемых оперонов от 0 для прямого соседства до 4. Для корреляции экспрессии оперона были выбраны паттерны экспрессии ближайших генов пар. Панели ( A, — C ) изображают пары с расходящейся, конвергентной и тандемной ориентацией оперонов соответственно. Панели ( D — F ) отображают соотношение количества положительных и отрицательных корреляций, включенных в средние значения корреляции A – C.Для значений корреляции указаны планки погрешностей (SEM).
Рисунок 1.
Пространственно разрешенная корреляция экспрессии временных генов. Светло-серые столбцы представляют собой среднюю корреляцию Пирсона временной экспрессии всех пар оперонов с соответствующей ориентацией. Черная контрольная полоса указывает среднюю корреляцию случайно переназначенных пар генов из одного и того же пула. По оси абсцисс указано количество оперонов между парой исследуемых оперонов от 0 для прямого соседства до 4.Для корреляции экспрессии оперона были выбраны паттерны экспрессии ближайших генов пар. Панели ( A, — C ) изображают пары с расходящейся, конвергентной и тандемной ориентацией оперонов соответственно. Панели ( D — F ) отображают соотношение количества положительных и отрицательных корреляций, включенных в средние значения корреляции A – C. Для значений корреляции указаны планки погрешностей (SEM).
Чувствительность к суперспирализации определяет ориентацию соседних генов
Направленная доставка промоторов с суперспирализацией ДНК через TCDS нетривиальна.Согласно модели двойных суперспиральных доменов Лю и Ванга (24,43), транскрипционная активность генерирует отрицательную суперспирализацию перед транскрибируемым геном и положительную суперспирализацию вниз по течению. Если TCDS играет решающую роль в модуляции локальной суперспирализации ДНК, ориентация и расположение генов будут определяющими для оптимальной поставки чувствительных к суперспирализации промоторов с TCDS. Поэтому мы исследовали относительную ориентацию прямых соседей чувствительных к суперспирализации генов и обнаружили, что гены hyp были обогащены дивергентно ориентированными прямыми соседями с небольшими межгенными регионами, тогда как гены rel были обогащены расположениями с близкими конвергентными прямыми соседями (Рисунок 3).Непосредственная близость расходящихся соседей для генов hyp и близких конвергентных соседей для генов rel указывает на эффективное использование положительных и отрицательных TCDS генами, чувствительными к суперспирализации. В оставшейся части текста термин «целевой ген» будет использоваться для описания исследуемого гена, получающего TCDS, не имея в виду какой-либо конкретный класс генов. Наши первые результаты о сходстве экспрессии генов показали связь косвенных соседей. Поэтому мы расширили исследование относительной ориентации на непрямых соседей, подсчитав количество генов, направленных в сторону и от целевого гена в пределах диапазона суперспиральных доменов размером 10 т.п.н.Гены, указывающие на целевой ген, обеспечивают положительный TCDS промотору, тогда как гены, направленные от интересующего гена, обеспечивают отрицательный TCDS. Мы обнаружили повышенную частоту генов, указывающих в сторону от генов hyp, и преимущественную ориентацию соседей, указывающих на гены rel (рис. 4). Это открытие предполагает, что TCDS используется как регуляторный механизм, действующий через кооперативные эффекты пространственного расположения и ориентации генов.
Рисунок 2.
Различие TCDS в генах, чувствительных к высокой отрицательной суперспирализации (hyp) и релаксации ДНК (rel) в Escherichia coli . По оси z отложен z-показатель разницы медианы TCDS в генах hyp и rel (medianTCDS (hyp) -medianTCDS (rel)). z-значения основаны на смещении TCDS между генами hyp и rel по сравнению с смещением для случайных наборов генов. Z-оценка закодирована по цвету и высоте. Z-оценка больше 2 или меньше -2, указывающая на значительное отклонение от случайности, обозначается красным и синим цветом соответственно.Следовательно, синий цвет указывает на значительно более отрицательный TCDS у промоторов, предпочитающих сильную отрицательную суперспирализацию, чем у промоторов, предпочитающих релаксацию. Противоположное верно для красного цвета. Ось времени показывает 43 различных временных шага, охватывающих от инокуляции (0) по экспоненциальной фазе (≤120) до стационарной фазы (≥360). Ось TCDS показывает параметр затухания TCDS математической модели. Чем длиннее диапазон TCDS, тем медленнее затухание с расстоянием. В указанном диапазоне TCDS достигает 1% от своей начальной силы.Синяя щель имеет размер ~ 15 т.п.н. и имеет минимальное значение (наибольшее значение) около 10 т.п.н.
Рисунок 2.
Различия TCDS в генах, чувствительных к высокой отрицательной суперспирализации (hyp) и релаксации ДНК (rel) в Escherichia coli . По оси z отложен z-показатель разницы медианы TCDS в генах hyp и rel (medianTCDS (hyp) -medianTCDS (rel)). z-значения основаны на смещении TCDS между генами hyp и rel по сравнению с смещением для случайных наборов генов. Z-оценка закодирована по цвету и высоте.Z-оценка больше 2 или меньше -2, указывающая на значительное отклонение от случайности, обозначается красным и синим цветом соответственно. Следовательно, синий цвет указывает на значительно более отрицательный TCDS у промоторов, предпочитающих сильную отрицательную суперспирализацию, чем у промоторов, предпочитающих релаксацию. Противоположное верно для красного цвета. Ось времени показывает 43 различных временных шага, охватывающих от инокуляции (0) по экспоненциальной фазе (≤120) до стационарной фазы (≥360). Ось TCDS показывает параметр затухания TCDS математической модели.Чем длиннее диапазон TCDS, тем медленнее затухание с расстоянием. В указанном диапазоне TCDS достигает 1% от своей начальной силы. Синяя щель имеет размер ~ 15 т.п.н. и имеет минимальное значение (наибольшее значение) около 10 т.п.н.
Рисунок 3.
Журнал с разрешением соседнего расстояния ₂ соотношение количества генов hyp и rel в наборах генов с расходящимися (синий) и конвергентными (красный) соседями. Расстояние между генами определяется с использованием начальных положений ORF для расходящейся ориентации и конечных положений ORF для конвергентной ориентации.По оси абсцисс указано расстояние до соседа ± 50 бит / с. Гены с расстояниями, попадающими в этот диапазон, были взяты для подсчета генов hyp и rel. Различный размер наборов (| hyp |> | rel |) был нормализован при подсчете. В шкале логарифмических соотношений -1 и +1 указывают на двукратную разницу между количеством генов hyp и rel. В анализ были включены наборы генов hyp и rel, обнаруженные после обработки клеток Escherichia coli дикого типа, Δfis и Δhns ингибитором топоизомеразы норфлоксацином (1).Кривая отображает среднее логарифмическое соотношение трех наборов данных. Тенденция подтверждается всеми тремя наборами данных. Планки погрешностей (SD) обозначены цветной областью вокруг кривой. В случае дивергентной ориентации соседей гены hyp предпочитают короткие расстояния, тогда как гены rel предпочитают большее расстояние до соседа. Обратное можно наблюдать в случае сходящейся ориентации.
Рисунок 3.
Логарифм с разрешением соседнего расстояния ₂ соотношение количества генов hyp и rel в наборах генов с расходящимися (синий) и конвергентными (красный) соседями.Расстояние между генами определяется с использованием начальных положений ORF для расходящейся ориентации и конечных положений ORF для конвергентной ориентации. По оси абсцисс указано расстояние до соседа ± 50 бит / с. Гены с расстояниями, попадающими в этот диапазон, были взяты для подсчета генов hyp и rel. Различный размер наборов (| hyp |> | rel |) был нормализован при подсчете. В шкале логарифмических соотношений -1 и +1 указывают на двукратную разницу между количеством генов hyp и rel. В анализ были включены наборы генов hyp и rel, обнаруженные после обработки клеток Escherichia coli дикого типа, Δfis и Δhns ингибитором топоизомеразы норфлоксацином (1).Кривая отображает среднее логарифмическое соотношение трех наборов данных. Тенденция подтверждается всеми тремя наборами данных. Планки погрешностей (SD) обозначены цветной областью вокруг кривой. В случае дивергентной ориентации соседей гены hyp предпочитают короткие расстояния, тогда как гены rel предпочитают большее расстояние до соседа. Обратное можно наблюдать в случае сходящейся ориентации.
Рис. 4.
Дисбаланс TCDS в генах, чувствительных к суперспирализации, происходит из-за смещения ориентации соседних генов.( A ) Среднее логарифмическое отношение количества генов с положительным и отрицательным вкладом TCDS в уровень TCDS целевого гена в диапазоне 10 т.п.н. в наборах hyp, rel и none (ни hyp, ни rel). Указаны планки погрешностей (SEM). ( B ) Схема предпочтительных ориентаций соседей гена hyp и rel.
Рис. 4.
Дисбаланс TCDS в генах, чувствительных к суперспирализации, обусловлен смещением ориентации соседних генов. ( A ) Среднее логарифмическое отношение количества генов с положительным и отрицательным вкладом TCDS в уровень TCDS целевого гена в диапазоне 10 т.п.н. в наборах hyp, rel и none (ни hyp, ни rel).Указаны планки погрешностей (SEM). ( B ) Схема предпочтительных ориентаций соседей гена hyp и rel.
Модель суперспирализации ДНК, связанной с транскрипцией
Для количественной оценки уровней TCDS на чувствительных к суперспирализации промоторах мы оценили TCDS с использованием данных RNA-seq с временным разрешением. TCDS в основном зависит от силы транскрипции (40), длины транскрипта (17,39,44) и расстояния до его мишени. Мы разработали модель, предполагающую, что уровень TCDS линейно коррелирует с силой транскрипции и длиной гена, а также экспоненциальным уменьшением с расстоянием, чтобы учесть диффузию суперспирали и активность топоизомеразы.Однако ослабление TCDS с расстоянием до конца не изучено. Следовательно, чтобы оценить надежность результатов, представленных в этом исследовании, в отношении настроек модели, мы также протестировали модель с линейным спадом TCDS до 1% в заданном диапазоне. Результаты были качественно идентичны результатам модели экспоненциального затухания, что подтверждает надежность результатов (дополнительный рисунок S1).
Чувствительность суперспирали определяет уровень промотора TCDS
Чтобы изучить влияние TCDS на глобальную регуляцию транскрипции, мы исследовали различия в TCDS, полученном с помощью чувствительных к суперспирализации генов, описанных выше.Для более тщательного исследования различий наборов генов hyp и rel (например, высокотранскрибируемыми генами) мы вывели среднее значение TCDS для каждого набора генов. Чтобы исключить смещение силы экспрессии между наборами генов hyp и rel, мы вычислили TCDS промотора с учетом и без влияния экспрессии собственного гена. Без TCDS собственной транскрипции промоторы генов rel показали положительный уровень TCDS, тогда как набор генов hyp показал сильно отрицательный уровень TCDS в промоторной области на всех стадиях роста.Принимая во внимание TCDS собственной транскрипции, уровень TCDS стал более отрицательным (менее положительным для набора генов rel) на промоторе, поскольку промотор расположен выше транскрипционного комплекса. Следовательно, отрицательный TCDS собственной транскрипции сдвигает TCDS на промоторе к более отрицательному значению. Поскольку гены hyp в среднем дают немного более высокий уровень экспрессии, чем гены rel, разница в TCDS между наборами генов hyp и rel увеличилась еще больше. Если не указано иное, мы исключили эффект собственной транскрипции в следующих анализах, чтобы сосредоточиться на эффектах соседних генов.Для статистической оценки разницы мы случайным образом назначили гены наборам генов hyp и rel и сравнили их медианное значение TCDS с медианным значением TCDS, полученным для правильных наборов генов hyp и rel. Совершенно очевидно, что различия между наборами генов hyp и rel в пределах диапазона supercoiling домена (10-15 kb; (34)) были очень значительными на протяжении всего цикла роста (Figure 2). Эти результаты предполагают, что промоторы, предпочитающие высокую отрицательную суперспирализацию, преимущественно снабжены отрицательным TCDS за счет транскрипционной активности их соседей, тогда как промоторы, предпочитающие более расслабленную ДНК, преимущественно снабжены положительным TCDS за счет близлежащей транскрипционной активности.Следовательно, гены, чувствительные к суперспирализации, снабжены TCDS, соответствующим предпочтению суперспирализации промотора. В полном соответствии с положительной корреляцией локальных паттернов экспрессии генов поставляемый TCDS поддерживает активность промотора и тем самым положительно связывает паттерны экспрессии генов соседних генов.
In vivo Подтверждение предсказаний модели
Чтобы экспериментально подтвердить наши прогнозы модели TCDS, мы выбрали tufB , ген с четкой корреляцией с TCDS (рис. 5B).Промотор tufB относится к строгим промоторам, которые, как предполагается, чувствительны к высоким уровням отрицательной сверхсправедливости (45). Однако ранее не было обнаружено, что экспрессия tufB чувствительна к сверхспирализации. Мы вставили дивергентно ориентированный промотор tet, связанный с mCherry, репортерным геном, кодирующим флуоресцентный белок, перед нативным локусом промотора tufB , который сам был связан с венерой (флуоресцентный репортерный ген). Схема конструкции изображена на рисунке 5А.Штамм с заменой кодирующей последовательности tufB на венеру не показал дефицита роста или какого-либо другого заметного фенотипа в наших экспериментах. Без индукции мы подтвердили паттерн экспрессии tufB дикого типа, наблюдаемый в данных транскриптомики (22). При различных уровнях индукции и без обеспечения репрессора (полностью индуцированный tetp) мы могли постепенно модулировать экспрессию tufB до 3-кратного увеличения экспрессии во время полной индукции. В дополнение к паттерну экспоненциальной фазы экспрессии мы получили дополнительную активацию tufB во время стационарной фазы в условиях индукции / отсутствия репрессора из-за активности tetp в этой фазе.Результат подтверждает, что TCDS может изменять транскрипцию соседей по хромосоме и что эффект зависит от уровня транскрипции соседних генов. Более убедительно, результаты показывают, что чувствительность промотора к суперспирализации можно предсказать, применив нашу модель TCDS к данным экспрессии генов и сопоставив уровни экспрессии TCDS и генов.
Рисунок 5.
Экспрессия гена коррелирует с уровнем TCDS соседних генов. ( A ) Схема расположения репортерного гена.Промотор tufB был выбран из-за его силы экспрессии для надежного обнаружения сигнала и четкой корреляции отрицательного соседнего TCDS и экспрессии гена. В конструкции, созданной в нативном локусе tufB, кодирующая последовательность tufB заменена репортерным геном venus, кодирующим флуоресцентный белок. Перед промотором tufB вставлен промотор tet, связанный с репортерным геном mCherry. ( B ) Временная экспрессия tufB в Escherichia coli дикого типа (21) и TCDS, происходящая из экспрессии и ориентации соседних генов в пределах 10 т.п.н.( C ) Общая экспрессия tetP (mCherry) через 24 часа после индукции различными концентрациями ангидротетрациклина. Абсцисса: без репрессора (клетки без репрессорной плазмиды), индукция с уменьшением уровней (слева направо) ангидротетрациклина и без вставки tetP (конструкция без вставки tetP). По оси ординат: общая флуоресценция mCherry через 24 часа. ( D ) То же, что и в (C), с общей флуоресценцией венеры, измеренной через 24 часа после индукции.
Рисунок 5.
Экспрессия гена коррелирует с уровнем TCDS соседних генов.( A ) Схема расположения репортерного гена. Промотор tufB был выбран из-за его силы экспрессии для надежного обнаружения сигнала и четкой корреляции отрицательного соседнего TCDS и экспрессии гена. В конструкции, созданной в нативном локусе tufB, кодирующая последовательность tufB заменена репортерным геном venus, кодирующим флуоресцентный белок. Перед промотором tufB вставлен промотор tet, связанный с репортерным геном mCherry. ( B ) Временная экспрессия tufB в Escherichia coli дикого типа (21) и TCDS, происходящая из экспрессии и ориентации соседних генов в пределах 10 т.п.н.( C ) Общая экспрессия tetP (mCherry) через 24 часа после индукции различными концентрациями ангидротетрациклина. Абсцисса: без репрессора (клетки без репрессорной плазмиды), индукция с уменьшением уровней (слева направо) ангидротетрациклина и без вставки tetP (конструкция без вставки tetP). По оси ординат: общая флуоресценция mCherry через 24 часа. ( D ) То же, что и в (C), с общей флуоресценцией венеры, измеренной через 24 часа после индукции.
Для воздействия на активность целевого промотора требуется четкое смещение TCDS на целевом промоторе
Чтобы проверить, можно ли обобщить результаты, полученные с tufB , мы исследовали связь между силой TCDS, полученной промотором гена, и экспрессией целевого гена.Мы вычислили коэффициент корреляции Пирсона временной кривой TCDS на целевом промоторе и временной кривой экспрессии генов мишени и построили временное среднее значение TCDS цели против коэффициента корреляции. Это позволяет анализировать корреляцию экспрессии в зависимости от общей ошибки TCDS на целевом промоторе. Примечательно, что при определенном пороге смещения TCDS корреляция экспрессии гена под контролем целевого промотора с полученным TCDS резко возрастает (рис. 6).Следовательно, только при достаточно сильной диспропорции соседних положительных и отрицательных TCDS мы наблюдаем влияние TCDS на паттерн экспрессии целевого гена, лежащий в основе правильности и физиологической значимости нашей модели. Более того, эффект не является строго симметричным для положительной и отрицательной диспропорции. В случае положительного преобладания TCDS эффект менее выражен. Правдоподобным объяснением является общая репрессивная природа положительной суперспирализации ДНК, которая может использоваться только для активации промоторов гена rel, тогда как отрицательная суперспирализация должна иметь положительный эффект на транскрипцию для большинства промоторов.
Рисунок 6.
TCDS и паттерн экспрессии гена сильно коррелирован при пороговом смещении TCDS на промоторе. По оси абсцисс отложено среднее временное значение TCDS. Отклонение от 0 указывает на предвзятость TCDS. По оси ординат показана средняя временная корреляция промотора TCDS и экспрессии генов для генов с TCDS, обозначенным на абсциссе (окно ± 0,05). Сила TCDS вычисляется в произвольных единицах на основе данных временной последовательности РНК для диапазона TCDS в 10 т.п.н., исключая TCDS, генерируемую экспрессией исследуемого промотора.Коэффициент корреляции Пирсона применяется для корреляции временной TCDS и кривой экспрессии.
Рисунок 6.
TCDS и паттерн экспрессии гена сильно коррелирован при пороговом смещении TCDS на промоторе. По оси абсцисс отложено среднее временное значение TCDS. Отклонение от 0 указывает на предвзятость TCDS. По оси ординат показана средняя временная корреляция промотора TCDS и экспрессии генов для генов с TCDS, обозначенным на абсциссе (окно ± 0,05). Сила TCDS вычисляется в произвольных единицах на основе данных временной последовательности РНК для диапазона TCDS в 10 т.п.н., исключая TCDS, генерируемую экспрессией исследуемого промотора.Коэффициент корреляции Пирсона применяется для корреляции временной TCDS и кривой экспрессии.
Правила расположения TCDS-зависимых генов сохранены у Enterobacteriaceae
Чтобы проверить применимость наших результатов к другим бактериям, мы спросили, отражает ли расположение генов TCDS-зависимую регуляцию экспрессии генов у других бактерий. Из-за отсутствия данных транскриптомики с временным разрешением и наборов чувствительных к суперспирализации генов для родственных видов мы решили исследовать сохранение качественного воздействия TCDS (положительного или отрицательного) соседних генов на целевой ген.Качественное влияние TCDS зависит исключительно от ориентации соседей по отношению к их целевому гену, информация, которая предоставляется аннотациями генов NCBI. Кладу Enterobacteriaceae выбрали для набора бактерий, родственных E. coli . В этом наборе основной геном (консервативные гены у всех исследованных видов) по-прежнему включает половину из генов E. coli . Следовательно, основной геном довольно велик и позволяет анализировать влияние TCDS на многие гены и их консервативные соседи.Более того, геномы в этом наборе достаточно разошлись, чтобы можно было наблюдать консервацию генных структур. Для анализа консервации мы определили триады ортологов, которые состоят из гена-мишени TCDS и двух генов с наивысшим положительным и отрицательным вкладом TCDS в уровень TCDS генов-мишеней в E. coli . Для клады Enterobacteriaceae мы исследовали сохранение типа воздействия двух соседей на целевой ген. Отдельно анализировалось сохранение соседа с наибольшим положительным и наибольшим отрицательным воздействием.Далее мы разбиваем группы на наборы с положительным и отрицательным влиянием гена на экспрессию целевого гена. Таким образом, мы получили четыре типа групп (рис. 7). Самый сильный отрицательный вклад TCDS на уровень TCDS гена-мишени с положительным влиянием на транскрипцию был высококонсервативным. Этот вывод согласуется с более ранними исследованиями по сохранению дивергентных промоторов (46). В этом исследовании мы показываем, что это не связано с прямыми расходящимися соседями. Фактически, отрицательный знак TCDS включает в себя прямых и удаленных (<10 т.п.н.) соседей цели либо в восходящем расходящемся, либо в тандемном расположении нисходящего потока.По нашим данным, отрицательный знак TCDS в консервативных триадах в равной степени обусловлен дивергенцией вверх по течению и тандемной ориентацией вниз по течению (данные не показаны). Следовательно, знак TCDS во многих случаях сохранялся даже при перестройке генов. Обратите внимание, что, как правило, существует небольшое количество отрицательных воздействий TCDS на транскрипцию (negExp), что показывает в целом положительное влияние TCDS на соседние промоторы независимо от знака TCDS.
Рисунок 7.
Сравнительный анализ геномики ортологов в кладе Enterbacteriaceae. ( A ) Изображено сохранение эффектов соседних генов с наиболее сильным положительным и отрицательным TCDS на ген-мишень. Эти две группы далее подразделяются на подмножество, которое вносит положительный и отрицательный вклад в экспрессию целевых генов. Мы отдельно исследовали четыре разные группы: posTCDS, posExp = сосед с самым сильным положительным вкладом TCDS на уровень TCDS гена-мишени и положительным влиянием на экспрессию гена-мишени.posTCDS, negExp = сосед с самым сильным положительным вкладом TCDS на уровень TCDS целевого гена и отрицательным влиянием на экспрессию гена-мишени. negTCDS, posExp = сосед с самым сильным отрицательным вкладом TCDS на уровень TCDS целевого гена и положительным влиянием на экспрессию гена-мишени. negTCDS, negExp = сосед с самым сильным отрицательным вкладом TCDS на уровне TCDS целевого гена и отрицательным влиянием на экспрессию гена-мишени. По оси абсцисс отложено общее количество консервативных воздействий TCDS на целевой ген.( B ) Схема расположения генов в четырех отдельных группах. Hyp и rel указывают на предпочтение высокой отрицательной и низкой отрицательной суперспирализации, соответственно, выведенное из временной корреляции или антикорреляции целевого гена TCDS и экспрессии гена.
Рис. 7.
Сравнительный анализ геномики ортологов в кладе Enterbacteriaceae. ( A ) Изображено сохранение эффектов соседних генов с наиболее сильным положительным и отрицательным TCDS на ген-мишень.Эти две группы далее подразделяются на подмножество, которое вносит положительный и отрицательный вклад в экспрессию целевых генов. Мы отдельно исследовали четыре разные группы: posTCDS, posExp = сосед с самым сильным положительным вкладом TCDS на уровень TCDS гена-мишени и положительным влиянием на экспрессию гена-мишени. posTCDS, negExp = сосед с самым сильным положительным вкладом TCDS на уровень TCDS целевого гена и отрицательным влиянием на экспрессию гена-мишени. negTCDS, posExp = сосед с самым сильным отрицательным вкладом TCDS на уровень TCDS целевого гена и положительным влиянием на экспрессию гена-мишени.negTCDS, negExp = сосед с самым сильным отрицательным вкладом TCDS на уровне TCDS целевого гена и отрицательным влиянием на экспрессию гена-мишени. По оси абсцисс отложено общее количество консервативных воздействий TCDS на целевой ген. ( B ) Схема расположения генов в четырех отдельных группах. Hyp и rel указывают на предпочтение высокой отрицательной и низкой отрицательной суперспирализации, соответственно, выведенное из временной корреляции или антикорреляции целевого гена TCDS и экспрессии гена.
Чувствительные к суперспирализации гены
Streptococcus pneumoniae демонстрируют аналогичное смещение TCDS
Для дальнейшего обобщения нашего открытия мы применили наш анализ к эволюционно удаленной грамположительной бактерии S . пневмония . Для этой бактерии уже определены гены, чувствительные к сверхспирализации (19), и доступно несколько наборов данных по экспрессии генов. В этом исследовании уровни суперспирализации ДНК были изменены новобиоцином, расслабляющим ДНК агентом.Новобиоцин блокирует гидролиз аденозинтрифосфата (АТФ) субъединицей ДНК-гиразы B и, следовательно, останавливает преобразование положительных суперспиралей ДНК в отрицательные суперспирали. Это вызывает дисбаланс в гомеостазе суперспирализации ДНК и приводит к релаксации ДНК на глобальном уровне. По аналогии с анализом E. coli , мы разделили эти гены на hyp и rel, где гены с более высоким уровнем экспрессии на необработанном фоне были отнесены к набору hyp генов, а гены с более высокой экспрессией на фоне новобиоцина были отнесены к набор генов rel.Из-за отсутствия данных о временной экспрессии генов у этих видов мы не смогли провести анализ, связанный со временем, который мы провели для E. coli . Однако с использованием данных экспрессии генов дикого типа в условиях роста планктона и биопленки в S . pneumoniae мы смогли проверить, может ли наблюдаться стабильное смещение TCDS между наборами генов hyp и rel в физиологических диапазонах TCDS (рис. 8B). Результаты свидетельствуют о значительном различии TCDS на промоторах с противоположным предпочтением суперспирализации ДНК, на что указывает синяя щель в небольших диапазонах TCDS (фиг. 8B).В диапазоне TCDS около 20 т.п.н. (отрицательная) разница уровней hyp и rel TCDS максимальна. Общая картина напоминает образец, наблюдаемый в разнице TCDS E. coli hyp / rel (рис. 8C).
Рисунок 8.
Анализ смещения
TCDS чувствительных к суперспирализации генов для Escherichia coli и Streptococcus pneumoniae . В ( A и B ) z-оценка смещения TCDS для двух видов бактерий изображена в зависимости от диапазона TCDS и условий эксперимента (см. Раздел «Материалы и методы»).По оси z отложен z-показатель разницы медианы TCDS в генах hyp и rel (medianTCDS (hyp) -medianTCDS (rel)). Z-баллы основаны на смещении TCDS между генами hyp и rel по сравнению с смещением для случайных наборов генов. Z-оценка закодирована по цвету и высоте. Z-оценка больше 2 или меньше -2, указывающая на значительное отклонение от случайности, обозначается красным и синим цветом соответственно. Следовательно, синий цвет указывает на значительно более отрицательный TCDS у промоторов, предпочитающих сильную отрицательную суперспирализацию, чем у промоторов, предпочитающих релаксацию.Противоположное верно для красного цвета. На (A) На оси времени показаны 43 различных временных шага, охватывающих от инокуляции (0) по экспоненциальной фазе (≤120) до стационарной фазы (≥360) для E. coli . На (B) ось условий показывает три повтора. условий формирования биопленки (Bf1-Bf3) и трех повторностей планктонного роста (Pl1-Pl3) S . пневмония . Ось диапазона TCDS показывает параметр распада TCDS математической модели. Чем длиннее диапазон TCDS, тем медленнее затухание с расстоянием.В указанном диапазоне TCDS достигает 1% от своей начальной силы. ( C ) Краткое изложение (A и B) пространственной зависимости смещения TCDS. Средние значения по оси условий нанесены на график и нормализованы по минимуму и максимуму каждого графика.
Рисунок 8.
Анализ смещения
TCDS чувствительных к суперспирализации генов для Escherichia coli и Streptococcus pneumoniae . В ( A и B ) z-оценка смещения TCDS для двух видов бактерий изображена в зависимости от диапазона TCDS и условий эксперимента (см. Раздел «Материалы и методы»).По оси z отложен z-показатель разницы медианы TCDS в генах hyp и rel (medianTCDS (hyp) -medianTCDS (rel)). Z-баллы основаны на смещении TCDS между генами hyp и rel по сравнению с смещением для случайных наборов генов. Z-оценка закодирована по цвету и высоте. Z-оценка больше 2 или меньше -2, указывающая на значительное отклонение от случайности, обозначается красным и синим цветом соответственно. Следовательно, синий цвет указывает на значительно более отрицательный TCDS у промоторов, предпочитающих сильную отрицательную суперспирализацию, чем у промоторов, предпочитающих релаксацию.Противоположное верно для красного цвета. На (A) На оси времени показаны 43 различных временных шага, охватывающих от инокуляции (0) по экспоненциальной фазе (≤120) до стационарной фазы (≥360) для E. coli . На (B) ось условий показывает три повтора. условий формирования биопленки (Bf1-Bf3) и трех повторностей планктонного роста (Pl1-Pl3) S . пневмония . Ось диапазона TCDS показывает параметр распада TCDS математической модели. Чем длиннее диапазон TCDS, тем медленнее затухание с расстоянием.В указанном диапазоне TCDS достигает 1% от своей начальной силы. ( C ) Краткое изложение (A и B) пространственной зависимости смещения TCDS. Средние значения по оси условий нанесены на график и нормализованы по минимуму и максимуму каждого графика.
ОБСУЖДЕНИЕ
В этом исследовании мы показали, что локальное положение и ориентация гена является результатом давления отбора, направленного на поддержание регулирующего влияния суперспирализации ДНК, создаваемого транскрипцией соседних генов.Фактически, механизмы генов высокоорганизованы для совместного использования соседних TCDS. Локальное расположение генов оптимизирует снабжение TCDS для поддержки транскрипционной активности генов, чувствительных к сверхспирализации ДНК, по всей хромосоме. Кооперативный характер эффектов TCDS предполагает перекрестное взаимодействие между соседними генами как механизм взаимного контроля экспрессии генов. В свете этого исследования кажется, что хромосомные гены занимают стратегическое положение для оптимального использования TCDS. В эволюционном масштабе соседство генов со смещением TCDS привлекает гены, предпочитающие соответствующий уровень суперспирализации.Более того, расстояние до источника TCDS для этих генов минимизировано короткими межгенными областями, тогда как гены с противоположной чувствительностью к суперспирализации показывают увеличенное расстояние до источника за счет более крупных межгенных областей. Некоторые аспекты TCDS могут способствовать его использованию в регулирующих схемах. Прежде всего, он связывает экспрессию проксимальных генов без необходимости организации непрерывных единиц транскрипции. Однако, в отличие от единиц транскрипции, взаимодействие можно постепенно ослаблять, увеличивая расстояние e.g путем вставки или перестановки. Этот простой механизм значительно облегчил бы модуляцию регуляторных цепей генов в эволюционном масштабе. Было показано, что чувствительность к суперспирализации сильно зависит от состава ДНК-связывающих белков (1). Например, несколько NAP могут ограничивать суперспирали ДНК, тем самым буферизуя эффекты TCDS локально в зависимости от наличия сайтов связывания. Следовательно, NAP могут по отдельности влиять на промоторы, чтобы отделить паттерны экспрессии, если они благоприятны.Более того, регуляторные эффекты TCDS могут быть более быстрыми, чем эффекты, опосредованные взаимодействиями факторов транскрипции, а также обходят необходимость дорогостоящего синтеза последних. Таким образом, пространственное распределение регуляторных связей в генетической системе демонстрирует довольно дальнюю передачу информации, опосредованную TRN, которая потенциально дополняет короткодействующее соединение экспрессии, опосредованное TCDS — (2). Кажется вероятным, что гены, регулируемые классическим регулятором, могут регулировать соседние гены через TCDS и тем самым локально распространять регуляторную информацию.Для этой гипотезы механизм ретрансляции промотора в ilvIH-leuO-leuABCD (32,33) является поразительной моделью. Оперон ilvIH индуцируется при аминокислотном голодании за счет связывания безлейцинового Lrp, классического регуляторного механизма. Результирующая транскрипция активирует вышестоящий ген leuO через отрицательный TCDS, который снова через отрицательный TCDS активирует дивергентно ориентированный оперон leuABCD . Таким образом, оперон активируется связыванием классического регулятора, и регуляторная информация впоследствии передается соседним генам посредством изменений суперспирализации ДНК через TCDS.Это уменьшило бы сайты связывания факторов транскрипции и соответствующие молекулы регулятора, необходимые для регуляции, и в то же время позволило бы модулировать сигнал фактора транскрипции. Что еще более убедительно, область ilvIH-leuO-leuABCD также предлагает модель для обратного случая. Оперон ilvIH активирует соседний ген leuO через TCDS, тогда как leuO , в свою очередь, кодирует регулятор. Это означает, что классическая регуляторная сеть и регуляторная система соседства TCDS взаимодействуют в обоих направлениях.Степень этого взаимодействия еще предстоит изучить в будущих исследованиях. Один намек может заключаться в том, что для половины генов в хорошо изученном модельном организме E. coli до сих пор не известен регулятор (согласно Regulondb). Другой благоприятный эффект TCDS — это направление TCDS к специфическим областям ДНК, потенциально снижающее затраты АТФ для поддержания высоких уровней глобальной суперспирализации ДНК для достижения активации промотора. Кроме того, локальная поставка суперспирализации ДНК с помощью TCDS обеспечивает оптимальный уровень суперспирализации ДНК на промоторе гена также в хромосомных областях, которые не обеспечивают достаточный уровень глобальной суперспирализации ДНК.Это уменьшает пространственные ограничения для размещения гена в хромосомных областях с определенным глобальным уровнем суперспирализации, но в то же время сохраняет его чувствительность к глобальным изменениям суперспирализации ДНК. Следовательно, TCDS обеспечивает более однородное распределение генов, чувствительных к суперспирализации, на хромосоме, как это наблюдается в E. coli , что увеличивает эволюционную гибкость пространственной организации генов на хромосоме. Наконец, мы предоставляем доказательства того, что те же механизмы действуют и у других бактерий, подтверждая и обобщая предыдущие исследования по сохранению генных структур.Хотя это исследование сосредоточено на двух бактериях и кладе Enterobacteriaceae, мы убеждены, что больше данных транскриптомики покажут общность наших результатов для бактерий и не только. Осведомленность о влиянии TCDS на транскрипцию уже вдохновила исследования на эукариотах (47) с аналогичным выводом на уровне отдельных генов. Учитывая, что TCDS является причиной и следствием процессов чтения ДНК, в ближайшем будущем ожидаются более удивительные результаты во всех сферах жизни.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ДАННЫЕ
Дополнительные данные доступны в NAR Online.
Автор благодарит Георгия Мусхелишвили за предоставленные лабораторные помещения и инструменты, а также за ценные научные обсуждения.
ФИНАНСИРОВАНИЕ
Программа LOEWE земли Гессен; Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) [SO 1447 / 1-1]. Финансирование платы за открытый доступ: DFG [SO 1447 / 1-1].
Заявление о конфликте интересов . Ничего не объявлено.
ССЫЛКИ
1.
Гомеостатическая регуляция чувствительности к суперспирализации координирует транскрипцию бактериального генома
EMBO Rep.
2006
7
710
715
2.
Анализ логических типов сетевого контроля в профилях экспрессии генов
BMC Syst. Биол.
2008
2
18
3.
Активация и ингибирование транскрипции суперспирализацией
J. Mol. Биол.
1985
181
455
465
4.
Механизм активации транскрипции с помощью FIS: роль структуры корового промотора и топологии ДНК
J. Mol. Биол.
2003
331
331
344
5.
Кооперативная роль суперспирали ДНК и белков, связанных с нуклеоидами, в регуляции бактериальной транскрипции
Biochem. Soc. Пер.
2013
41
542
547
6.
Связывание «холостого» РНК-полимеразы в восходящем направлении модулирует инициацию транскрипции с соседнего промотора
J. Biol. Chem.
2015
290
8095
8109
7.
Регулирование генов ДНК-гиразы E. coli: гомеостатический контроль суперспирализации ДНК
Ячейка
1983
34
105
113
8.
Дискоординированная экспрессия генов gyrA и gyrB в ответ на ингибирование ДНК-гиразы в Escherichia coli
J. Basic Microbiol.
1997
37
53
69
9. Суперспирализация ДНК
в Escherichia coli находится под жестким и тонким гомеостатическим контролем, включая экспрессию генов и метаболическую регуляцию как топоизомеразы I, так и ДНК-гиразы
.
евро. J. Biochem.
2002
269
1662
1669
10.
Координация геномной структуры и транскрипции основным бактериальным нуклеоид-ассоциированным белком HU
EMBO Rep.
2010
11
59
64
11.
Связанные с нуклеоидом белки H-NS и FIS модулируют реакцию суперспирализации ДНК генов pel, основных факторов вирулентности в бактерии, патогенной для растений, Dickeya dadantii
Nucleic Acids Res.
2012
40
4306
4319
12.
Изменения связующего числа суперспиральной ДНК сопровождают переходы роста у Escherichia coli
J. Bacteriol.
1987
169
4499
4506
13.
Бактериальные топоизомеразы и контроль суперспирализации ДНК
Trends Genet.
1990
6
433
437
14.
Гомес-Эйхельманн
М. д. е. l.C.
Роль шаперонов и АТФ-синтазы в реактивации ДНК-гиразы в клетках стационарной фазы Escherichia coli после добавления питательных веществ
Springerplus
2014
3
656
15.
Связанный с хроматином белок H-NS взаимодействует с изогнутой ДНК, влияя на топологию ДНК и экспрессию генов
Ячейка
1992
71
255
265
16.
FIS модулирует зависимые от фазы роста топологические переходы ДНК в Escherichia coli
Мол. Microbiol.
1997
26
519
530
17.
Геномный транскрипционный ответ на потерю хромосомной суперспирализации у Escherichia coli
Genome Biol.
2004
5
R87
18.
Функциональный ответ вышестоящей ДНК на динамическую суперспирализацию in vivo
Нац. Struct. Мол. Биол.
2008
15
146
154
19.
Роль глобальной и локальной топологии в регуляции экспрессии генов Streptococcus pneumoniae
PLoS One
2014
9
e101574
20.
Аналоговая регуляция метаболической потребности
BMC Syst. Биол.
2011
5
40
21.
Порядок генов и динамика хромосом координируют пространственно-временную экспрессию генов во время цикла роста бактерий
Proc. Natl. Акад. Sci. США
2012
109
42
50
22.
Термодинамическая стабильность ДНК и динамика суперспирали определяют программу экспрессии генов во время цикла роста бактерий
Мол.Биосист.
2013
9
1643
1651
23.
Пространственные паттерны транскрипционной активности в хромосоме Escherichia coli
Genome Biol.
2004
5
R86
24.
Суперспирализация матрицы ДНК во время транскрипции
Proc. Natl. Акад. Sci. США
1987
84
7024
7027
25.
ДНК-связывающий белок E. coli HU образует нуклеосомоподобную структуру с кольцевой двухцепочечной ДНК
Ячейка
1979
17
265
274
26.
Роль белков HU в формировании и ограничении суперспиралей хромосомной ДНК у Escherichia coli
Мол. Genet Genet.
1995
248
518
526
27.
Гистоноподобный белок HU и топология бактериальной ДНК: подавление дефицита HU за счет мутаций гиразы
J. Mol. Биол.
1996
256
66
76
28.
Суперспирализация необходима для образования и стабильности инициирующего комплекса на расходящихся промоторах malEp и malKp
J. Mol. Биол.
1991
218
529
542
29.
Потребность в тепловой энергии для разделения цепей во время инициации транскрипции: эффект суперспирализации и удлинения контактов ДНК белка
Nucleic Acids Res.
1994
22
3840
3845
30.
Гиперсуперспирализация плазмидной ДНК, индуцированная транскрипцией
J. Mol. Биол.
1999
285
443
448
31.
Дивергентная транскрипция РНК: роль в раскручивании промотора?
Транскрипция
2013
4
162
166
32.
Управляемая транскрипцией суперспирализация ДНК и контроль экспрессии генов
Фронт. Biosci.
2003
8
d430
439
33.
Цис-распространяющийся нуклеопротеиновый филамент отвечает за активность гена сайленсинга, обнаруженную в механизме ретрансляции промотора
Дж.Биол. Chem.
2005
280
5101
5112
34.
Топологическая доменная структура хромосомы Escherichia coli
Genes Dev.
2004
18
1766
1779
35.
О строении свернутой хромосомы Escherichia coli
J. Mol. Биол.
1972
71
127
147
36.
Хромосомы в живых клетках Escherichia coli разделены на домены суперспирализации
Proc. Natl. Акад. Sci. США
1981
78
224
228
37.
Закрепление ДНК на бактериальной цитоплазматической мембране посредством котранскрипционного синтеза полипептидов, кодирующих мембранные белки или белки для экспорта: механизм гиперотрицательной суперспирализации плазмиды у мутантов, дефицитных по топоизомеразе I ДНК
Дж.Бактериол.
1993
175
1645
1655
38.
FtsK представляет собой моторный белок ДНК, который активирует разрешение димеров хромосом путем переключения каталитического состояния рекомбиназ XerC и XerD
Ячейка
2002
108
195
205
39.
Связанная с транскрипцией гиперотрицательная суперспирализация плазмидной ДНК с помощью РНК-полимеразы Т7 в штаммах Escherichia coli, дефицитных по топоизомеразе I
Дж.Мол. Биол.
2007
374
925
935
40.
Зависимость суперспирализации транскрипционной ДНК от силы промотора в штаммах Escherichia coli, дефицитных по топоизомеразе I
Джин
2013
514
82
90
41.
Профиль экспрессии генов ранних биопленок Streptococcus pneumoniae in vitro
Microbiol.Иммунол.
2012
56
621
629
42.
DoriC 5.0: обновленная база данных регионов oriC в геномах бактерий и архей
Nucleic Acids Res.
2013
41
D90
93
43.
Транскрипция генерирует положительно и отрицательно суперспиральные домены в шаблоне
Ячейка
1988
53
433
440
44.
Хромосомы в живых клетках Escherichia coli разделены на домены суперспирализации
Proc. Natl. Акад. Sci. США
1981
78
224
228
45.
суперспирализация ДНК — глобальный регулятор транскрипции для роста энтеробактерий?
Нац. Rev. Microbiol.
2005
3
157
169
46.
Анализ геномного контекста: прогнозирование функциональных ассоциаций из консервативных двунаправленно транскрибируемых пар генов
Нац. Biotechnol.
2004
22
911
917
47.
Торсион-опосредованное взаимодействие между соседними генами
PLoS Comput. Биол.
2014
10
e1003785
© Автор 2016.Опубликовано Oxford University Press от имени Nucleic Acids Research.
Выставка The Lowe Post Show — PodCenter
Крис Вернон и Бен Коэн: 29.04.21,
Зак разговаривает с Крисом Верноном из «Рингера» о «Мемфис Гриззлис» и гонке плей-офф на Диком Западе, затем Бен Коэн из Wall Street Journal обсуждает свою книгу о «горячей руке» и Стивене Карри.
Западная гонка плей-офф и битва за Лос-Анджелес: 27.04.21
Зак разговаривает с Дэйвом Макменамином и Омом Янгмисуком из ESPN о Лейкерс, Клипперс, Блейзеры, а также о ландшафтах плей-офф и игр Западной конференции в целом.
Восточная гонка плей-офф с Кевином Пелтоном: 23.04.21,
Зак рассказывает с Кевином Пелтоном из ESPN о раскаленных Никсах и о гонке плей-офф на Диком Востоке — сценариях игры, восходящих Волшебниках, гонке за № 4, пути Бруклина и многом другом.
Самая совершенная раса игроков: Дэвид Торп: 20.04.21
Зак обсуждает Стивена Карри и гонку MVP, затем проходит гонку «Самый продвинутый игрок» с Дэвидом Торпом из TrueHoop.
Центровой Сиксерс Джоэл Эмбиид: 16.04.21
Зак разговаривает с центровым «Сиксерс» Джоэлем Эмбиидом о своем деле MVP, улучшающемся броске в прыжке, о том, как он злился из-за того, что не попал в All-NBA в прошлом сезоне, и о многом другом.
Джамал Мюррей ушел на неопределенный срок: 13.04.21
Зак обсуждает разрыв передней крестообразной связки Джамаля Мюррея в его левом колене и его значение для «Наггетс» в будущем.
Крис Херринг в гонке плей-офф на Западе: 21.04.21
Зак разговаривает с Крисом Херрингом из Sports Illustrated о середине раунда плей-офф Западной конференции — Mavericks, Spurs, Blazers, Grizzlies — и гонке за то, чтобы избежать как Lakers, так и игрового турнира.
Дорис Берк в плей-офф, гонка MVP: 21.04.21
Зак и Дорис Берк из ESPN обсуждают все горячие темы в НБА: гонки плей-офф, соперники против претендентов, гонка за звание лучшего игрока и многое другое.
Ник Фриделл и Адам Марес: 21.04.21
Зак и Ник Фриделл из ESPN обсуждают заболевших Голден Стэйт Уорриорз, а затем Адам Марес из DNVR говорит о вздымающихся Наггетсах.
Мина Каймс и Кевин Кларк: 30.03.21,
Зак разговаривает с Миной Каймс из ESPN о ее новом фандоме Brooklyn Nets и предполагаемом зле суперкоманд, а затем суперфанат Orlando Magic Кевин Кларк из Ringer проверяет последнюю реконструкцию Magic
.
Реакция крайнего срока сделки с Bobby Marks: 25.03.21
Зак и Бобби Марки мгновенно реагируют на все большие шаги и не ходы крайнего срока торговли НБА.
Выставка крайнего срока торговли
Woj and Lowe ’21: 24.03.21
Зак и Адриан Войнаровски из ESPN обсуждают основные сюжетные линии в преддверии крайнего срока обмена.
Травмы Леброну и ЛаМело: 22.03.21
Зак разговаривает с Дэйвом Макменамином из ESPN о травме Леброна, о том, как далеко «Лейкерс» могут упасть, и о кончине Элгина Бейлора. Затем Кевин Пелтон из ESPN (38:26) рассказывает о травме ЛаМело Болла и гонке «Новичок года».
Самые интригующие команды с крайними сроками торговли со знаками Бобби: 19.03.21
Зак и Бобби Маркс из ESPN выбирают пять самых интригующих команд по срокам обмена.
Кирк Голдсберри о растущем дисбалансе в НБА: 16.03.21,
Зак разговаривает с Кирком Голдсберри из ESPN о преимуществах свободных агентств для крупных рыночных команд и о том, как новый формат плей-офф повлияет на крайний срок обмена.
Рамона Шелберн и Ройс Янг 11 марта 2020 г .: 21.03.20
Зак разговаривает с Рамоной Шелберн о закрытии лиги в марте прошлого года. Затем к нам присоединяется Ройс Янг, чтобы обсудить, каково это было находиться в здании после отмены прошлогодней игры Jazz-Thunder, и делится некоторыми мыслями о команде OKC в этом году.
Билл Симмонс во второй половине сезона 2020/21: 21.03.21
Зак и Билл Симмонс из The Ringer обсуждают важные вопросы второй половины сезона НБА.
Эдди Джонсон на страже «Солнца и джаз» Джордан Кларксон: 21.03.21,
Зак разговаривает с легендой НБА и аналитиком Suns Эдди Джонсоном о раскаленных солнцах, затем присоединяется Джордан Кларксон (44:31), чтобы обсудить ведущий на Западе джаз, его день молодых Лейкерс, грубую ошибку Леброна, Дж. Р. Смита в финале и многое другое.
Крис Херринг о Блейке Гриффине и Расселе Уэстбруке, пытающихся изящно состариться: 21.03.21
Зак разговаривает с Крисом Херрингом из Sports Illustrated о том, как трудно таким парням, как Блейк Гриффин и Рассел Уэстбрук, изящно стареть в сегодняшней НБА, а также в двух командах среднего звена Востока — в Торонто и Индиане.
Скалабрин о Селтикс и драфте всех звезд: 26.02.21
Зак разговаривает с Брайаном Скалабрином о «Бостон Селтикс» (и некоторых классических историях Кевина Гарнетта), а затем готовит драфты All-Stars с Кевином Пелтоном из ESPN.
Рамона о серии поражений Лейкерс и Ом о состоянии клипсаторов: 23.02.21
Зак разговаривает с Рамоной Шелберн из ESPN о «Лейкерс» в серии поражений из трех игр, а затем Ом Янгмисук догоняет Клипперс.
Сиксерс разговаривают с Рики Санчесом и защищают Луку, Тре и Сион с Кевином Арновицем: 19.02.21,
Зак разговаривает с со-ведущими The Rights to Ricky Sanchez Спайком Эскином и Майклом Левином о всегда интересных Sixers, затем присоединяется Кевин Арновиц из ESPN, чтобы обсудить свою статью о проблемах защиты Луки Дончича, Тре Янга и Зайона Уильямсона
Джон Холлингер в гонке MVP: 16.02.21
Зак и Джон Холлингер из Athletic обсуждают многолюдную гонку за звание лучшего игрока.
Выбор звезды 2021 года с Кевином Арновицем: 21.02.21
Зак и Кевин Арновиц из ESPN заполняют свои бюллетени на Матч всех звезд 2021 года.
Де’Аарон Фокс и Ян Бегли: 21.02.21
Зак разговаривает с Яном Бегли из SNY о торговле Деррика Роуза и обо всем, что связано с Никсом, затем к нему присоединяется Де’Аарон Фокс из Сакраменто, чтобы поговорить о раскаленных королях.
Джерами Грант и Крис Уэббер: 21.02.21
Зак разговаривает с Джерами Грантом из Детройта о своем прорывном сезоне в Детройте, а Крис Уэббер обсуждает, что будет означать возрождение «Пистонс», а также воспоминания о плохих парнях, размышления о соперничестве «Кингс-Лейкерс» в начале 2000-х и многое другое.
MacMahon on the Mavs, Pelton on Bucks, Celtics, Suns: 2/2/21
Зак разговаривает с Тимом МакМахоном из ESPN о шатающихся Mavericks, а затем присоединяется Кевин Пелтон, чтобы обсудить взлеты и падения Celtics, Bucks и Suns.
Коллин Секстон и Ник Фриделл: 29.01.21
Зак разговаривает с Ником Фриделлом из ESPN о том, что здесь делают Чикаго Буллз, а затем присоединяется Коллин Секстон (41:06), чтобы рассказать обо всем, что касается Кливленд Кавальерс, а также о своих настоящих мыслях о «Сексланде».«
Говард Бек в годовщину смерти Коби Брайанта: 26.01.21
Зак и Ховард Бек из Sports Illustrated размышляют о жизни и карьере Коби Брайанта в годовщину его смерти.
Майк Шмитц в классе новичков 2020 года: 21.01.21
Зак разговаривает с Майком Шмитцем из ESPN о том, как 3 лучших игрока драфта 2020 года выступают в начале своей карьеры.
Кевин Арновиц о новом облике Nets, резвом Grizz и Jazz: 19.01.21
Зак разговаривает с Кевином Арновицем о новых Сетях, Яннисе, резких Гризли, Джазе, травмах в Портленде и многом другом.
Крис Херринг о торговле Хардена в Бруклине: 13.01.21
Зак и Крис Херринг из 538 реагируют на торговлю блокбастером Джеймса Хардена.
Адриан Войнаровски и доктор Абраар Каран: 21.01.21
Зак разговаривает с Адрианом Войнаровски ESPN о пересмотренных протоколах здравоохранения НБА и ситуации с Кайри Ирвингом, затем доктор Абраар Каран из Гарвардской медицинской школы и больницы Бригама и женщин дает экспертные комментарии о том, будут ли протоколы работать.
Макменамин и Пелтон: 21.01.21
Зак и Дэйв Макменамин из ESPN говорят о «Лейкерс», а затем Кевин Пелтон из ESPN присоединяется к разговору о том, принадлежат ли «Бакс» и «Клипперс» к той же категории, что и «Лейкерс».
Do You Believe с Ричардом Джефферсоном: 21/05/21
Зак и Ричард Джефферсон играют «Веришь ли ты?» с некоторыми тенденциями в начале сезона в НБА: резвыми «Никс», борющимися «Рэпторс», «Сиксерс» 6: 1 и потенциальными соперниками «Лейкерс» на Западе.
Торговая беседа Джеймса Хардена с Брайаном Виндхорстом: 31.12.20.
Зак разговаривает с Брайаном Виндхорстом из ESPN о торговой сфере Джеймса Хардена и о том, как выглядели некоторые потенциальные поклонники Хардена в этом сезоне
Сюрпризы раннего сезона с Крисом Херрингом: 28.12.20
Зак разговаривает с Крисом Херрингом из 538 о сюрпризах и тенденциях в начале сезона: о борьбе Golden State, о том, что травма Спенсера Динвидди означает для Нетс, 3: 0 Pacers, New Orleans, Milwaukee и др.
Превью сезона 2020-21 с Джеффом Ван Ганди: 22.12.20
Зак и Джефф Ван Ганди из ESPN анонсируют сезон НБА 2020–21: претенденты на титул и претенденты, разговоры на MVP и многое другое.
Самые запутанные команды с Кевином Арновицем: 18.12.20
Зак и Кевин Арновиц из ESPN выбирают свои 5 самых запутанных команд на сезон НБА 2020/21
Сара Кусток и Малика Эндрюс: 15.12.20
Зак и Сара Кусток из YES Network анонсируют Brooklyn Nets с Кевином Дюрантом и Кайри Ирвингом, затем Малика Эндрюс из ESPN подробно останавливается на том, что движет Яннисом Антетокунмпо и приближается срок его принятия.
Голдсберри, Бонтемпс и Корин: 11.12.20,
Зак анонсирует Miami Heat — и обсуждает слухи о Джеймсе Хардене — с Кирком Голдсберри из ESPN, затем разговаривает с Celtics с Тимом Бонтемпсом из ESPN и Raptors с Эриком Корином из Athletic.
Тим МакМахон и Кевин Пелтон: 07.12.20,
Зак разговаривает с Тимом МакМахоном из ESPN о ситуации с Джеймсом Харденом, а затем Кевин Пелтон обсуждает «Пеликаны», «Воины», «Джаз» и перспективы Западной конференции.
Говард Бек и Ллойд Пирс: 03.12.20
Зак и Говард Бек обсуждают обмен Рассела Уэстбрука и Джона Уолла и возрождение звезд «Лейкерс», затем тренер Атланты Ллойд Пирс рассказывает о работе команды по регистрации избирателей Джорджии в этом избирательном цикле, а также о новых «Ястребах». .
Кевин Арновиц и Тейлор Рукс: 30.11.20,
Зак разговаривает с Кевином Арновицем из ESPN о переделанных «Атланта Хокс» и новой иерархии в Восточной конференции.Затем к Тернер присоединяется Тейлор Рукс, чтобы рассказать о своей новой статье в журнале о жизни в клубе NBA Orlando Bub
.
Крис Херринг о победителях и проигравших в рамках бесплатного агентства 2020 года: 23.11.20
Зак и Крис Херринг из 538 обсуждают победителей и проигравших в безумном межсезонье НБА.
Бобби Маркс и Джонатан Гивони: 19.11.20
Зак, Бобби Маркс и Джонатан Гивони из ESPN подводят итоги драфта НБА 2020 года и ждут, что на этих выходных будет свободное агентство НБА.
Что такое глагол ?: 17.11.20
Зак Лоу присоединяется к Брайану Виндхорсту, чтобы обсудить, что сделка Джру Холидей означает для будущего Янниса Антетокунмпо с Баксом. Кроме того, ребята ознакомятся с некоторыми сделками, уже заключенными в рамках лиги.
Брайан Виндхорст о слухах о Harden и CP3 в Phoenix: 16.11.20
Зак и Брайан Виндхорст из ESPN обсуждают первый день трансакционного периода НБА: слухи о Джеймсе Хардене, от Криса Пола до Феникса, о перезагрузке «Лейкерс» и многом другом.
Томми Шеппард и Кевин Кларк: 12.11.20
Зак разговаривает с генеральным менеджером Wizards Томми Шеппардом о предстоящем драфте и межсезонье, а с Кевином Кларком из Ringer — о сделках Рассела Уэстбрука и странном путешествии «Орландо Мэджик».
Анонс драфта НБА 2020 с Майком Шмитцем и Джонатаном Гивони: 09.11.20.
Зак анонсирует драфт НБА с экспертами ESPN Майком Шмитцем и Джонатаном Гивони — новый пробный проект, возможности для обмена, грохот и многое другое.
Бобби Маркс о слухах о Джру Холиде и планах Golden State с выбором №2: 05.11.20.
Зак разговаривает с Бобби Марксом из ESPN о дате старта НБА на 2020–2021 годы, слухах о сделках с Джру Холидей, о том, что Golden State может сделать с выбором № 2, и многом другом.
Ярон Вейцман и Купер Райфф: 29.10.20,
Зак разговаривает с автором «Танка на вершину» Яроном Вайцманом о том, что Шестёрки наняли Дэрила Мори, а затем — о суперфанате «Мэвс» Купере Райффе о его потрясающем дебютном фильме «S #!% House».«
Межсезонье на 2020 год с Бобби Марксом: 26.10.20
Зак и Бобби Маркс из ESPN делают прогнозы относительно некоторых вариантов для крупных игроков и потенциальных продлений контрактов, которые нависают над грядущим межсезонным безумием в НБА
Билл Симмонс в межсезонье НБА: 19.10.20
Зак и Билл Симмонс из The Ringer анонсируют долгожданное межсезонье в НБА.
Тим МакМахон о пребывании Дэрила Мори в Хьюстоне: 15/10/20
Зак разговаривает с Тимом МакМахоном из ESPN о пребывании Дэрила Мори в Хьюстоне, о том, что ждет Рокетс в будущем, и о том, что Клипперс нанимает Тая Лю
Тренер Лейкерс Фрэнк Фогель: 14.10.20
Зак разговаривает с тренером «Лейкерс» Фрэнком Фогелем о 17-м титуле «Лейкерс», их путешествии из Китая в предсезонный период к настоящему моменту, его невероятном взлете, комедийных клипах в сеансах фильмов и многом другом.
Игра 6 финала 2020 года: 10.11.20
Зак Лоу и Брайан Виндхорст мгновенно отреагируют на победу в 6-м матче закрытого матча Лос-Анджелес Лейкерс над Майами Хит в финале НБА 2020 года.
Игра 5 финала 2020 года: 09.10.20
Зак Лоу, Брайан Виндхорст и бывший нападающий НБА Крис Бош предлагают мгновенную реакцию на грандиозную победу в пятом матче Майами Хит над Лос-Анджелес Лейкерс в финале НБА 2020 года.
Игра 4 финала 2020 года: 06.10.20
Зак Лоу, Брайан Виндхорст и тренер Рэпторс Ник Нерс предлагают мгновенную реакцию на победу в четвертом матче Лос-Анджелес Лейкерс над Майами Хит в финале НБА 2020 года.
Игра 3 финала 2020 года: 04.10.20
Зак Лоу, Брайан Виндхорст и тренер Дэвид Физдейл предлагают мгновенную реакцию на победу в третьем матче Майами Хит над Лос-Анджелес Лейкерс в финале НБА 2020 года.
Игра 2 финала 2020 года: 02.10.20
Зак Лоу, Брайан Виндхорст и Кендрик Перкинс мгновенно реагируют на победу в матче 2 Лос-Анджелес Лейкерс над Майами Хит в финале НБА 2020 года.
Игра 1 финала 2020 года: 30.09.20
Зак Лоу, Брайан Виндхорст и Дорис Берк предлагают мгновенную реакцию на победу в первом матче Лос-Анджелес Лейкерс над Майами Хит в финале НБА 2020 года.
Джефф Ван Ганди в финале НБА: 29.09.20
Зак и Джефф Ван Ганди анонсируют финал НБА 2020 года.
Рамона Шелберн и О’Ши Джексон-младший: 28.09.20
Зак говорит с Рамоной Шелберн из ESPN о возвращении «Лейкерс» в финал, а затем с О’Ши Джексоном-младшим о том, что титул будет значить для болельщиков Лос-Анджелеса в этом сезоне.
Крис Херринг из 538 в финале конференции: 25.09.20,
Зак разговаривает с Крисом Херрингом из 538 человек о финале конференции, защите Леброна и возможном своего рода воссоединении финала.
Ховард снова в финале конференции, боевик и телеэссе: 21.09.20
Зак разговаривает с Говардом Беком из Bleacher Report о моменте Энтони Дэвиса, сериале финалов конференции и его телеэссе на TNT о социальной справедливости.
Предварительный просмотр финала Западной конференции Стэна Ван Ганди: 17.09.20,
Зак обсуждает окончание сезона «Клипперс» и анонсирует финал Западной конференции со Стэном Ван Ганди из TNT.
Кевин Арновиц о 7-й игре Nuggets-Clippers и предварительном просмотре ECF: 14.09.20.
Зак и Кевин Арновиц из ESPN обсуждают 7-ю игру «Клипперс-Наггетс» и анонсируют финал Восточной конференции между Майами и Бостоном.
Тепловая культура с Дунканом Робинсоном и Дэном Ле Батардом: 9/10/20
Зак разговаривает с Дэном Ле Батардом из ESPN о маловероятном переизобретении Майами Хит, а затем приветствует Рамону Шелберн и стража тепла Дункана Робинсона, чтобы они заглянули внутрь #HeatCulture.
МакМэхон и МакМенамин о Рокетс-Лейкерс: 9/7/20
Зак разговаривает с Дэйвом Макменамином и Тимом МакМахоном из ESPN о первых двух партиях шахматного матча Рокетс-Лейкерс и о том, что будет дальше. Плюс: Сможет ли П.Дж. Такер одолеть четырех медведей за свободный мяч?
Кевин Арновиц о Нэш в сети и DEFCON 1 за Бакс: 9/3/20
Зак разговаривает с Кевином Арновицем о том, что «Нетс» наняли Стива Нэша, о странных финишах в двух седьмых играх и о том, что «Бакс» отстает от «Хита».
538s Крис Херринг о матче Nuggets-Jazz и Celtics-Raptors 1: 31.08.20
Зак разговаривает с Крисом Херрингом из 538 о дуэли Джамал Мюррей-Донован Митчелл, игре «Селтикс-Рэпторс» 1, ракетах и многом другом.
Малика Эндрюс и Уильям Роден: 27.08.20
Зак разговаривает с Маликой Эндрюс из ESPN и Уильямом Роденом из The Undefeated о том, что Бакс инициировал прекращение работы в НБА и о борьбе за социальную и расовую справедливость.
Тим МакМахон и Ярон Вайцман: 24.08.20
Зак разговаривает с Тимом МакМахоном из ESPN о блеске Луки Дончича в его первом постсезоне и Яроном Вайцманом из Bleacher Report о том, что пошло не так с Sixers.
Кевин Арновиц в первом раунде: 20.08.20
Зак и Кевин Арновиц из ESPN обсуждают все, что связано с плей-офф: борьба за номер 1, Mavs-Clippers, Jazz-Nuggets и Sixers выглядят ужасно.
Си Джей Макколлум из Портленда: 17.08.20,
Зак разговаривает со звездой Portland Trail Blazers Си Джей МакКоллумом о жизни в Орландо, беге команды к восьмому месту, снимкам логотипа Dame, матче Lakers и многом другом.
Превью первого раунда с Дэвидом Торпом из TrueHoop: 14.08.20
Зак и Дэвид Торп из TrueHoop воссоединились для своего ежегодного скорострельного превью первого раунда в формате восемь на восемь, плюс мысли о Дамиане Лилларде, Карис Леверт и многом другом.
Майкл Шварц и Дорис Берк: 11.08.20
Зак разговаривает с постоянным поклонником ESPN Suns Майклом Шварцем об утопии пузыря, а Дорис Берк приступает к обсуждению дикой гонки плей-офф Западной конференции.
Пабло Торре и Джефф Ван Ганди: 06.08.20
Зак разговаривает с Пабло Торре о травмах Бена Симмонса и Джеффа Ван Ганди, о том, как «Лейкерс» борются за нападение на половине корта, и как «Наггетс» должны вести себя с Майклом Портером-младшим., и успех Pacers.
Кевин Арновиц о перезапуске НБА: 8/4/20
Зак разговаривает с Кевином Арновицем о гонке за 8-е место на Западе, раннем успехе «Санз» на пузыре, загадке «Сиксерс», «Рапторсах», напоминающих всем, насколько они хороши, и тренерах по моде.
Итак, где мы были, черт возьми? Финал 8 команд: 29.07.20
Зак и Кевин Пелтон из ESPN обстреливают восемь команд, чтобы закончить наш «Так где же, черт возьми, мы были?» ряд.
Рэйчел Николс и Ховард Бек: 28.07.20,
Зак разговаривает с Рэйчел Николс из ESPN и Говардом Беком из Bleacher Report за бокалом напитка об их самых жестких решениях по бюллетеням, о найме Тома Тибодо в Никсе и поездке Лу Уильямса в Волшебный город.
Крис Херринг из 538 о шестом человеке года: 23.07.20
Зак и Крис Херринг из 538 заполняют свои бюллетени за «Шестого человека года».
Итак, где мы были, черт возьми? Гризли и пеликаны: 20.07.20,
Зак и аналитик TNT Стэн Ван Ганди играют в пьесе «Так где же мы были, черт возьми?» с пеликанами и гризли — плюс кто представляет наибольшую угрозу для баксов на востоке и для команды Лос-Анджелеса на западе?
Итак, где мы были, черт возьми? Гром и ножницы: 16.07.20
Зак продолжает сериал «Итак, где мы были адом», разговаривая с Громом с Ройсом Янгом из ESPN и Клипперс с Кирком Голдсберри из ESPN.
Внутри пузыря с Маликой Эндрюс из ESPN и Майерсом Леонардом из Майами: 13.07.20
Зак разговаривает с Маликой Эндрюс из ESPN и Мейерсом Леонардом из Майами Хит о жизни внутри пузыря НБА, а также с Леонардом о стрельбе из пива, культуре тепла, видеоиграх и многом другом.
Итак, где мы были, черт возьми? Raptors, Bucks и Jazz: 9.07.20,
Зак играет «Так где же мы были, черт возьми?» о Raptors с Эриком Кореином из The Athletic; и Bucks and Jazz с Кевином Пелтоном и Тимом МакМахоном из ESPN.
Крис Бош рассказывает о Heat, Raptors, Тиме Дункане и последнем чипе: 7/7/20
Зак разговаривает с Крисом Бошем о своих матчах плей-офф в Майами, своих первых днях в Торонто, своем новом информационном бюллетене «Последний чип», о защите Тима Дункана и многом другом.
Джон Холлингер о Sixers, Heat и Rockets: 02.07.20
Зак и Джон Холлингер из The Athletic разыгрывают второе издание «Итак, где, черт возьми, мы были?» в главных ролях Sixers, Heat и Rockets.
Брайан Виндхорст о наследии «Решения»: 30.06.20
Зак разговаривает с Брайаном Виндхорстом из ESPN о наследии «Решения» 10 лет спустя и о положительных тестах на коронавирус в Brooklyn Nets.
Кевин Пелтон Там, где остановилась НБА: 25.06.20
Зак и Кевин Пелтон из ESPN обсуждают, следует ли НБА отменить сезон, а затем сыграть первый выпуск «Итак, где мы были?» с «Лейкерс», «Мавс», «Селтикс» и «Наггетс» (19:02).
Ллойд Пирс и Рене Монтгомери из Атланты: 22.06.20,
Зак разговаривает с тренером «Хоукс» Ллойдом Пирсом о пересечении баскетбола и социальной справедливости в Атланте, а также Рене Монтгомери из WNBA о перерывах в сезоне 2020 года, чтобы сосредоточиться на реформе (46:04).
Билл Симмонс, редактирование 2009: 18.06.20
Зак и Билл Симмонс из «Звонаря» переработали драфту НБА 2009 года.
Кевин Арновиц о командах общей защиты: 16.06.20
Зак и Кевин Арновиц из ESPN обсуждают пузырь Орландо, а затем заполняют свои защитные бюллетени.
Кэрон Батлер: 11.06.20
Зак рассказывает бывшей звезде НБА Кэрон Батлер о своей работе в сфере реформы уголовного правосудия, протестах, охвативших США, уроках Коби, пиковых шутках Wizards-Cavaliers и многом другом.
Говард Бек о его устной истории Лоба: 8.06.20
Зак разговаривает с Говардом Беком из Bleacher Report о своей устной истории об эпической игре 7 между «Лейкерс» и в 2000 году, наследии партнерства Кобе-Шак, плане перезапуска НБА и многом другом.
Кевин Пелтон о формате 22 команд НБА: 03.06.20
Зак разговаривает с Кевином Пелтоном из ESPN о предложенном НБА формате из 22 команд.
Тренер «Пистонс» Дуэйн Кейси: 01.06.20
Зак разговаривает с тренером «Пистонс» Двэйном Кейси о протестах, охвативших страну, и о том, что сообщество НБА может сделать в будущем.
Защитник Лейкерс Алекс Карузо: 29.05.20
Зак разговаривает с защитником «Лейкерс» Алексом Карузо о своем невероятном путешествии в НБА, сюрреалистическом сезоне «Лейкерс», потенциальном возвращении НБА, всех мемах и многом другом.
Woj & Lowe Crossover, часть I: 26.05.20,
Зак разговаривает с Адрианом Войнаровски из ESPN о возможном перезапуске НБА.
Игра зон: 22.05.20,
Зак разговаривает с Крейгом и Адамом Маламутом, создателями Game of Zones, об окончании их серии хитов — любимых шутках, отрывках, которые почти не попали в сериал, их творческом процессе и многом другом.Включает спойлеры как для Game of Zones, так и для Game of Thrones.
Чарльз Баркли: 19.05.20
Зак разговаривает с Чарльзом Баркли о «Последнем танце», историях Dream Team, расширении возможностей игроков, его обмене из Филадельфии в Феникс и многом другом.
Райен Руссильо из The Ringer: 17.05.20,
Зак и Рингерс Рен Руссилло пересматривают 7-ю игру финала конференции 1998 года между Bulls и Pacers.
Дэнни Эйндж: 14.05.20
Зак разговаривает с гроссмейстером «Селтикс» Дэнни Эйнджем о встрече с Майклом Джорданом в двух финалах НБА, матче с 63 очками, потенциальном возвращении НБА после перерыва в связи с COVID-19 и многом другом.
J.A. Аданде: 11.05.20
Зак разговаривает с Дж. А. Аданде о выходе Майкла Джордана на пенсию в 1993 году, сезоне Скотти Пиппена без Майкла Джордана и обо всем, что касается «Последнего танца».«
Джек МакКаллум: 07.05.20
Зак рассказывает Джеку МакКаллуму о своей новой серии подкастов «Ленты команды мечты», ужине с Чарльзом Баркли, спорах об Исайе Томасе, обо всем, что касается Майкла Джордана, и многом другом.
ESPN, Майк Гринберг: 04.05.20,
Зак разговаривает с Майклом Гринбергом из ESPN о первых трех выступлениях «Буллз», «Последний танец», быках 1992 и 1996 годов, Леброне и Джордане и многом другом.
Майкл Уилбон из ESPN: 29.04.20,
Зак разговаривает с Майклом Уилбоном из ESPN обо всем, что касается Майкла Джордана и «Последнего танца».
ESPN’s Bobby Marks: 27.04.20,
Зак говорит с Бобби Марксом из ESPN о том, как «Нетс» пытались отвлечь Денниса Родмана в плей-офф 1998 года, о наследии «Плохих парней», их печально известном уходе и многом другом.
Крис Херринг из FiveThirtyEight: 23.04.20,
Зак и Крис Херринг из 538 выбирают свои команды новичков НБА
Тренер Уорриорз Стив Керр: 20.04.20
Зак разговаривает со Стивом Керром о Чикаго Буллз 1997-98 гг., «Последнем танце» и многом другом.
Джеки Макмаллан из ESPN: 17.04.20,
Зак и Джеки Макмаллан говорят о Майкле Джордане накануне «Последнего танца»: ее воспоминания, покрывающие его; ее визит, чтобы увидеть, как он играет в бейсбол; разница между первыми тремя и последними тремя названиями; его величайшие и самые запоминающиеся моменты, многое другое.
Майк Брин: 14.04.20,
Зак разговаривает с Майком Брином о главном Майкле Джордане, разбивающем сердца Никс, Линсанити, выстреле Рэя Аллена и многом другом.
Брэдли Бил: 09.04.20,
Зак разговаривает со звездой Вашингтона Брэдли Билом о том, хочет ли он снова играть в этом сезоне, о своих отношениях с Джоном Уоллом (8:46), почему он подписал продление в Вашингтоне (11:09) и многое другое.
Пол Шеер: 8.04.20
Зак разговаривает с Полом Шеером из «Черного понедельника» и миллионом других вещей о своем фэндоме «Клипперс» (16:19), о превращении «Клипперс» из проигравших в фаворитов, о своем комедийном путешествии (30:25), «Скала 30», «Человек-великан», » и многое другое.
Сью Берд и Меган Рапино: 07.04.20,
Зак разговаривает со Сью Берд и Меган Рапино о жизни в карантине, о том, как Меган становится всемирной знаменитостью (24:21), о будущем их спорта, о том, как они смеялись над фильмом (55:34) и многом другом.
Pau Gasol: 05.04.20
Зак разговаривает с Пау Газолем о COVID-19, Коби Брайанте, его игровом будущем и многом другом в рамках кампании NBA NBA Together.
Бюллетень за MVP с Биллом Симмонсом: 02.04.20
Зак и Рингеры Билл Симмонс обсуждают свои бюллетени за MVP с 1 по 5.
Сандро Галеа и Кейон Дулинг: 30.03.20
Зак разговаривает с Сандро Галеа, деканом Школы общественного здравоохранения Бостонского университета, и Кейоном Дулингом, консультантом по здоровью игроков из NBPA, о проблемах психического здоровья, связанных с пандемией COVID-19.
Дэвид Торп из TrueHoop: 30.03.20
Зак разговаривает с Дэвидом Торпом из TrueHoop о Луке Дончиче, Трэ Янге, Джейсоне Татуме и остальных участниках списка самых продвинутых игроков.
Рэйчел Николс о закрытии НБА: 19.03.20
Зак разговаривает с Рэйчел Николс из ESPN о том, как справляться с неопределенностью, об ее интервью с Адамом Сильвером, сюжетных линиях НБА, которые могут остаться незаконченными, и многом другом.
Ховард Бек о COVID-19 и приостановке сезона НБА: 13.03.20
Зак разговаривает с Говардом Беком из Bleacher Report о COVID-19, закрывающем НБА, и многом другом.
Дэрил Мори с конференции Sloan Sports Analytics: 09.03.20
Зак разговаривает с генеральным менеджером Rockets Дэрилом Мори о размене Клинта Капелы (2:41), будущем баскетбола (21:32), инновациях и многом другом.
Кевин Арновиц о разводе Кенни Аткинсона и Нетс: 3/7/20
Зак и Кевин Арновиц из ESPN обсуждают, что Нетс и Кенни Аткинсон соглашаются разойтись.
Метта Мир во всем мире: 06.03.20
Зак рассказывает Metta World Peace о своей пресс-конференции после завоевания титула в 2010 году, кончине Коби Брайанта (6:50), его недооцененной карьере (9:56), его влиянии на осведомленность о психическом здоровье в НБА (12: 33) и многое другое.
Кевин Арновиц о гонке Бакс и MVP: 03.03.20
Зак и Кевин Арновиц из ESPN обсуждают статус «Милуоки» как фаворитов и гонку MVP (49:57).
MINI POD: Zion vs. LeBron: 26.02.20
Зак и Джон Холлингер из «Атлетика» реагируют на яркую игру между «Пеликанс» и «Лейкерс» и обсуждают возможный матч плей-офф между ними на полу в Staples Center.
Лейкерс Ф Джаред Дадли: 24.02.20,
Зак рассказывает о «Лейкерс» Джареду Дадли о мемориале Коби Брайанта, о том, каким был последний месяц в «Озерных», о ситуации в плей-офф Западной конференции и многом другом.
Крис Херринг из 538: 19.02.20
Зак и Крис Херринг из 538 игроков выбирают пятерку самых интересных игроков на оставшуюся часть сезона НБА.
Ник Элам: 18.02.20
Зак разговаривает с Ником Эламом, создателем концовки «Элам», о своем дебютном выступлении на большой сцене в воскресном матче всех звезд, потенциальных ловушках, будущем и многом другом.
Матч звезд Бам Адебайо разогревает Майами: 14.02.20
Центровой «Майами Хит» Бам Адебайо переживает новый сезон. И это происходит быстрее, чем можно было ожидать, всего лишь его третий год в НБА.Зак Лоу из ESPN объясняет, что делает впервые участвующего в Матче всех звезд выдающимся талантом на площадке и что за этим стоит за его невероятной мотивацией.
Пабло Торре из ESPN: 13.02.20,
Зак разговаривает с Пабло Торре из ESPN об эксперименте с смолл-болом Rockets (4:02), изменении состава Филадельфии (35:52), новом формате Матча звезд (20:54) и многом другом.
Реакция крайнего срока торговли с Bobby Marks: 06.02.20
Зак и Бобби Маркс из ESPN реагируют на сделку между Д’Анджело Расселом и Эндрю Виггинсом, «Ракетами» становится мало (18:38), Клипперс получает Маркуса Морриса (49:44) и многое другое.
Выставка Woj & Lowe Trade Крайний срок: 05.02.20
Зак и Адриан Войнаровски обсуждают противостояние между «Лейкерс» и «Клипперс» (2:32), как увольнение Стива Миллса повлияет на «Никс» в срок (19:32), сделки, которые они хотят видеть (21:28), и многое другое. .
Talking Trades в НБА: 04.02.20
В преддверии крайнего срока обмена в НБА в четверг ходят слухи о некоторых из самых известных баскетболистов, в результате чего фанаты и Twitter НБА теряют рассудок.Старший писатель ESPN NBA Зак Лоу анализирует покупателей, продавцов и целевые показатели по мере приближения крайнего срока 6 февраля.
Брайан Виндхорст о сроках совершения сделок: 03.02.20
Зак разговаривает с Брайаном Виндхорстом из ESPN о приближающемся крайнем сроке обмена в НБА.
Мэтт Барнс: 29.01.20
Зак рассказывает Мэтту Барнсу о том, каким был Коби Брайант вне игры, Коби-папа, конец эры Фила Джексона с «Лейкерс», переход от врага к другу с Коби, и многое другое.
Рамона Шелберн и Рэйчел Николс: 27.01.20
Зак, Рамона Шелберн и Рэйчел Николс делятся своими воспоминаниями о жизни Коби Брайанта.
Дэйв Макменамин, ESPN: 23.01.20
Зак разговаривает с Дэйвом Макменамином из ESPN о мощных «Лейкерс» (15:58), будущем Кайла Кузьмы (24:57), ротации Фрэнка Фогеля, дебюте Сиона (2:14) и многом другом.
Дэнни Грин: 22.01.20,
Зак разговаривает с защитником Лейкерс Дэнни Грином о Леброне в конце карьеры (2:16), почему это самая веселая командная среда, которую он когда-либо испытывал (18:44), те классические финалы шпор-хита, выстрел Рэя Аллена (23 : 00), решение Кавхи (33:34) и многое другое.
Кевин Арновиц из ESPN: 16.01.20,
Зак разговаривает с Кевином Арновицем из ESPN о восходящем Гризе (1:07), гонке за №8 на Западе (12:38), Наггетс, Джаз, Рокетс и Клипперс, а также тренерская работа Фрэнка Фогеля в «Лейкерс» (1:02:57).
Mini Pod: Joe Ingles Приложение: 15.01.20
Зак выслеживает Джо Инглза, чтобы он рассказал нелепую историю, о которой он забыл спросить его о той ночи.
Джаз Ф Джо Инглес: 14.01.20
Зак разговаривает с нападающим Юты Джо Инглсом о стремительном росте джаза (4:02), искусстве и ограничениях мусорных разговоров (19:04), лесных пожарах, опустошающих его родную Австралию (42:53), и многом другом.
Говард Бек из отчета об отбеливателе: 1/8/20
Зак и Ховард Бек из Bleacher Report выбирают своих звезд Западной конференции, а также обсуждают торговую ценность Кайла Кузьмы (25:20), травму Кайри Ирвинга (33:04) и многое другое.
Дэн Ле Батар из ESPN: 06.01.20,
Зак разговаривает с Дэном Ле Батардом из ESPN о наследии Жары эпохи Леброна в конце 2010-х годов.
Стивен Адамс: 30.12.19
Зак рассказывает центру Оклахома-Сити Стивену Адамсу о своем нетрадиционном пути в НБА (9:25), уходе Кевина Дюранта и Рассела Уэстбрука (39:05), лучших и худших болтунов (35:35), Дреймонда. Зеленый инцидент (21:33), многое другое.
Кореин и Артур: 26.12.19
Зак разговаривает с Эриком Корином из Athletic и Брюсом Артуром из Toronto Star о Рэпторах после Кавхи, торговых вопросах, пиках Востока и Матча звезд.
Билл Симмонс звонящего: 19.12.19
Зак и Билл Симмонс из Рингера заполняют свои ранние бюллетени за MVP (3:02) и все-НБА (44:02).
Woj & Lowe Show: 16.12.19
Зак и Адриан Войнаровски открывают торговый сезон НБА: покупатели (2:18), продавцы, громкие имена, которые могут быть в движении (11:09), и многое другое.
Джон Холлингер: 11.12.19
Зак разговаривает с Джоном Холлингером из The Athletic о торговых покупателях и продавцах (3:33), Кевине Лаве (21:15) и многом другом.
Загадка Хардена: Как звезда «Хьюстон Рокетс» Джеймс Харден мешает защите НБА: 10.12.19
Сильные стороны Джеймса Хардена в баскетболе разнообразны, и для защиты, пытающейся его защитить, это разочаровывает. Теперь команды пытаются что-то другое против разносторонней звезды «Хьюстон Рокетс». Старший писатель ESPN Зак Лоу присоединяется к Мине Каймс, чтобы измерить влияние Хардена на лигу в этом сезоне и обсудить эффективные способы его остановить.
Марк Спирс: 05.12.19
Зак разговаривает с Марком Спирсом из The Undefeated о его полнометражном сюжете Дамиана Лилларда (1:40), Blazers (28:36), комментариях Криса Пола о его торговле с Громом (32:20), борьбе Юты и многом другом.
Гэри Гульман: 04.12.19
Зак рассказывает комику Гэри Гулману о его специальном выпуске HBO «Великий Депреш», баскетболе как механизме преодоления (5:20), противостоянии НБА 80-х и сегодняшней игре (38:36), искусстве написания анекдотов и происхождении его бит аббревиатуры состояний (48:20).
Маркус Смарт: 25.11.19
Зак разговаривает с бостонским игроком Маркусом Смартом о том, что он растянул 6, напряженность в раздевалке Селтикс в прошлом сезоне (3:18), что изменилось сейчас, что он находится в дюйме от проигрыша в баскетболе (9:22) и защищает Кайри Ирвинга (26 : 13).
Берк и Арновиц: 22.11.19
Зак разговаривает с Дорис Берк из ESPN о первых впечатлениях от Kawhi-PG Clippers (4:19), о том, чем отличается эта бостонская команда (17:26), является ли это конец шпор (31:19) и многое другое. .Затем к нему присоединяется Кевин Арновиц из ESPN, чтобы обсудить свою историю об эпической афере НБА (41:02).
Хорошее место: 18.11.19
Зак разговаривает с создателем «Хорошего места» Майклом Шуром и писателями Джо Манде и Джен Статски об их фэндоме в НБА, своих любимых шутках в истории сериала и закулисных историях.
Ховард Бек: 14.11.19
Зак разговаривает с Говардом Беком из Bleacher Report о хаосе в Никсе (2:55), Эндрю Виггинсе (33:09) и 9: 2 Лейкерс (49:09).
Рик Карлайл: 12.11.19
Зак разговаривает с тренером Mavs Риком Карлайлом о партнерстве Луки Дончича и Кристапса Порзингиса (4:23), чемпионате Далласа в 2011 году (16:59), Malice in the Palace (22:10), Celtics 1986 года (28: 29), против Майкла Джордана в плей-офф, и многое другое.
Крис Херринг: 07.11.19
Зак разговаривает с Крисом Херрингом из 538 о мании управления нагрузкой (1:13) и о четырех интересных командах на Западе: Феникс (11:24), Даллас (1:00:31), Хьюстон (30:04) и Сан-Антонио (48:15).
Джей Уильямс из ESPN: 31.10.19,
Зак разговаривает с Джей Уильямсом из ESPN о травме Стивена Карри (5:53), поединке Джоэла Эмбиида-Карла-Энтони Таунса (15:02), сюрпризах и разочарованиях в начале сезона и многом другом.
Зак ЛаВин: 28.10.19
Зак разговаривает с охранником Bulls Заком ЛаВайном об адаптации к Джиму Бойлену, будущему Bulls, его моменту Vontae Mack (14:43), диким историям KG (37:44) и многому другому.
Брайан Виндхорст и Мина Каймс из ESPN: 24.10.19,
Зак разговаривает с Брайаном Виндхорстом из ESPN о продлении контрактов (20:52), торговых целях и начале сезона. Мина Каймс присоединяется, чтобы обсудить Шестых, людей-собак против людей-кошек и многое другое (45:03).
MINI POD: Игра 1 сезона 2019-20: 22.10.19
Клипперс обыграли Лейкерс в ночь открытия сезона 2019-20, и Зак Лоу и Брайан Виндхорст сломали его с пола в Staples Center сразу после игры.
Бакстер Холмс ESPN: 16.10.19
Зак разговаривает с Бакстером Холмсом из ESPN о том, как он рассказывает о том, что Кармело Энтони не участвует в НБА, о карьере и наследии Мело и многом другом.
Джефф Ван Ганди: 15.10.19
Зак обсуждает комментарии Леброна Джеймса о Китае и анонсирует сезон НБА с Джеффом Ван Ганди.
Адриан Войнаровски, ESPN: 11.10.19,
Зак и старший инсайдер ESPN Адриан Войнаровски обсуждают китайскую проблему НБА, фаворитов на титул 2020 года, торговые цели и многое другое в телевизионном спецвыпуске.
Дэйв Макменамин из ESPN: 08.10.19,
Зак разговаривает с Дэйвом Макменамином из ESPN о своей статье о сделке Энтони Дэвиса, Лейкерс 2019-20, партнерстве Леброна и AD, расширении возможностей игроков и многом другом.
Джоэл Эмбиид и Джош Ричардсон: 30.09.19
Зак разговаривает с Джоэлом Эмбиидом о новом облике Сиксерс, о горе в прошлом сезоне, его диете и привычках к грязным разговорам; Джош Ричардсон присоединяется к нам, чтобы поговорить о том, как его обменяли на Филадельфию, воспоминания о Майами и многое другое.
Кевин Арновиц: 24.09.19
Зак и Кевин Арновиц из ESPN составляют пятерку самых запутанных команд в сезоне НБА 2019-20.
J.J. Редик: 17.09.19
Зак разговаривает с охранником Нового Орлеана Дж. Дж. Редик о подписании контракта с «Пеликансами», который застрелил Кавай Леонард, оставив Филадельфию, свои старые команды «Клипперс», данки и многое другое.
Сэм Андерсон: 9/12/19
Зак разговаривает с Сэмом Андерсоном из журнала New York Times о своей книге «Город бума», истории Грома в Оклахома-Сити, недавних комментариях Кевина Дюранта, сделках Рассела Уэстбрука и Джеймса Хардена и многом другом.
Дэвид Эпштейн: 09.09.19
Зак рассказывает Дэвиду Эпштейну о своих книгах «Диапазон» и «Спортивный ген» — о том, что они говорят о том, как команды НБА принимают решения, предотвращении травм, управлении нагрузкой, воспитании детей и многом другом.
Билл Симмонс: 04.09.19
Зак разговаривает с Биллом Симмонсом из The Ringer о сборной США, слиперах Восточной конференции, странных «Лейкерс» и многом другом.
Рамона Шелберн: 28.08.19
Зак разговаривает с Рамоной Шелберн из ESPN о ее эпическом подкасте о Дональде Стерлинге, а также о дополнении Карис ЛеВерт.
Кевин Арновиц: 17.07.19
Зак разговаривает с Кевином Арновицем из ESPN о наследии Криса Пола, Mavs and Kings и многом другом.
Райан Сондерс: 15.07.19
Зак разговаривает с тренером «Миннесоты Тимбервулвз» Райаном Сондерсом о строительстве вокруг Карл-Энтони Таунс, наследии своего отца Флипа, о том, что он был сыном Кевина Гарнетта, о мусорной речи Сэма Кассела и многом другом.
Beck & Nichols: 09.07.19
Зак разговаривает с Рэйчел Николс и Ховардом Беком за напитками в Лас-Вегасе о торговых слухах Рассела Уэстбрука, скрытых под радаром интересных командах в межсезонье, эре расширения прав и возможностей игроков после того, как Кави увез Пола Джорджа из Оклахома-Сити, и многом другом.
Джон Коллинз: 08.07.19
Зак разговаривает с большим человеком Ястребов Джоном Коллинзом о будущем в Атланте, его стремлениях к участию в Матчах звезд, периоде безудержной свободы агентств и многом другом.
Крис Херринг: 06.07.19,
Зак приветствует Криса Херринга из 538, и они вместе реагируют на сделки Кавай Леонарда и Пола Джорджа, прежде чем обсудить, как эти ходы меняют ландшафт лиги.
Адриан Войнаровски: 06.07.19
В перекрестном выпуске The Lowe Post и Woj Pod Зак Лоу и Адриан Войнаровски реагируют на подписание контракта с Кавай Леонардом и торговлей Полом Джорджем.Два инсайдера НБА обсуждают, как эти сделки немедленно меняют лигу, когда Леонард нацелился на Джорджа как на парня, с которым он хотел объединиться, облачное будущее Оклахома-Сити, которое может быть на рынке для Рассела Уэстбрука, если он будет доступен, как Торонто будет двигаться вперед и больше.
Уильямс и Бонтемпс: 01.07.19
Зак разговаривает с Джеем Уильямсом о решении Кевина Дюранта, преобразовании Сиксерс, провале Никс и многом другом.Затем присоединяется Тим Бонтемпс из ESPN, чтобы поговорить о Юте, Портленде, Денвере и Западе.
Брайан Виндхорст: 26.06.19
Зак и Брайан Виндхорст из ESPN выбирают пять самых интересных команд из числа свободных агентств НБА, а также новости, слухи, торговые идеи и многое другое.
Вой и Лоу: 25.06.19
Zach & Woj анонсирует все о предстоящем сезоне свободных агентств в НБА.
Marks & Givony: 21.06.19
Зак разговаривает с Бобби Марксом и Джонатаном Гивони из ESPN о драфте НБА и свободном агентстве.
Ник Медсестра: 18.06.19
Зак разговаривает с главным тренером «Рэпторс» Ником Нерсом о чемпионате Торонто.
Кевин Арновиц: 17.06.19
Зак разговаривает с Кевином Арновицем из ESPN о размене Энтони Дэвиса (1:48), о том, что ждет Пеликанс и Лейкерс (20:10), Бостонском году из ада (32:27), широко открытой погоне за титулом 2020 года (49). : 19), свободное агентство и многое другое.
MINI POD: игра 6 финала 2019 года: 13.06.19
Брайан Виндхорст, Зак Лоу, Эндрю Хан и Кендрик Перкинс мгновенно реагируют на победу в шестой игре Toronto Raptors над Golden State Warriors в финале НБА 2019 на полу Oracle Arena. Специальная камео от чемпиона НБА 2019 года Марка Газоля.
Ховард Бек: 12.06.19
Зак разговаривает с Говардом Беком из Bleacher Report о последствиях травмы Кевина Дюранта, о том, чего ожидать в 6-й игре, последнем с Энтони Дэвисом и многом другом.
MINI POD: игра 5 финала 2019 года: 11.06.19
Зак Лоу, Брайан Виндхорст, Кэссиди Хаббарт, Эндрю Хан и Кендрик Перкинс мгновенно реагируют на победу в пятой игре Golden State Warriors над Toronto Raptors в финале НБА 2019 года на полу Scotiabank Arena.
Артур и Кореин: 09.06.19
Зак разговаривает с Брюсом Артуром из Toronto Star и Эриком Кореином из Athletic о Рэпторсах на грани, о том, как Воины могут вернуться в сериал и что титул будет значить для города Торонто.
MINI POD: игра 4 финала 2019 года: 07.06.19
Брайан Виндхорст, Зак Лоу, Рамона Шелберн, Эндрю Хан и Джеки Макмаллан мгновенно реагируют на победу в четвертой игре Toronto Raptors над Golden State Warriors в финале НБА 2019 года на полу Oracle Arena.
Крис Херринг: 06.06.19
Зак разговаривает с Крисом Херрингом из FiveThirtyEight о победе в третьей игре Raptors, ключах для продвижения обеих команд и многом другом.
Дорис Берк: 04.06.19,
Зак разговаривает с представителем Зала славы Дорис Берк о том, где мы находимся в момент перехода финала НБА в Окленд, чего ожидать от обеих команд, продвигающихся вперед, и о многом другом.
Ричард Джефферсон: 31.05.19
Зак разговаривает с Ричардом Джефферсоном о победе в первой игре Торонто и о том, что будет дальше.
Бакстер Холмс: 29.05.19
Зак разговаривает с ESPN.Бакстер Холмс из com о своей взрывоопасной истории о внутреннем устройстве «Лейкерс».
Джефф Ван Ганди: 29.05.19
Зак и Джефф Ван Ганди с нетерпением ждут каждого аспекта финала НБА между Warriors и Raptors.
Арновиц и Артур: 22.05.19
Зак разговаривает с Брюсом Артуром из Toronto Star и Кевином Арновицем из ESPN о Рэпторс-Бакс, о том, как Торонто сравнял серию, чего ожидать в дальнейшем и многом другом.
Ховард Бек: 20.05.19
Зак разговаривает с Говардом Беком из Bleacher Report о финале Восточной конференции (6:30), «Голден Стэйт» без Кевина Дюранта (34:24), дисфункции «Лейкерс» (49:52) и многом другом.
Кевин Арновиц: 17.05.19
Зак разговаривает с Кевином Арновицем из ESPN о лотерее (1:45), Энтони Дэвисе (11:55), непростом межсезонье в Бостоне (19:06), других торговых целях (35:01), Warriors-Blazers (42:41) , и больше.
Крис Херринг: 13.05.19
Зак разговаривает с Крисом Херрингом из 538-х о том эпическом баскетбольном уик-энде НБА, броске Кавай, поражении Хьюстона, Bucks-Raptors, Warriors-Blazers и многом другом.
Ингибирование пути миокардин-связанного фактора транскрипции увеличивает эффективность траметиниба в клеточных линиях меланомы, мутантных по NRAS.
РЕЗЮМЕ
Путь Ras / MEK / ERK был основным направлением целенаправленной терапии меланомы; он аномально активируется почти в 80% кожных меланом человека (~ 50% мутаций BRAF ^V600 и ~ 30% мутаций NRAS).В то время как таргетная терапия принесла успех у пациентов с мутантной меланомой BRAF ^V600, такая терапия оказалась неэффективной при меланоме с мутантными NRAS отчасти из-за их цитостатических эффектов и первичной резистентности в этой популяции пациентов. Здесь мы демонстрируем, что повышенная активация пути Rho / MRTF коррелирует с высокой внутренней устойчивостью к ингибитору MEK, траметинибу, в панели мутантных клеточных линий меланомы NRAS. Комбинация траметиниба с ингибитором пути Rho / MRTF, CCG-222740, синергетически снижает жизнеспособность клеток мутантной линии клеток меланомы NRAS in vitro .Кроме того, комбинация CCG-222740 с траметинибом индуцировала апоптоз и снижала клоногенность в клетках SK-Mel-147, которые имеют высокий уровень устойчивости к траметинибу. Эти данные свидетельствуют о роли пути Rho / MRTF во внутренней устойчивости к траметинибу в подмножестве мутантных линий клеток меланомы по NRAS и подчеркивают потенциал одновременного воздействия на путь Rho / MRTF и MEK в меланомах с мутантными NRAS.
ВВЕДЕНИЕ
С расширением знаний о геномном ландшафте меланомы за последнее десятилетие развивались таргетные методы лечения (1).Почти половина пациентов с меланомой имеет мутации BRAF ^V600, за которыми следует вторая по частоте мутация онкогенного драйвера, встречающаяся в гене NRAS примерно у 30% пациентов с меланомой (2,3). Ряд одобренных FDA методов таргетной терапии стал стандартом лечения пациентов с мутантной меланомой BRAF. Ингибиторы, нацеленные на мутантный BRAF, такие как вемурафениб и дабрафениб, первоначально использовались в качестве монотерапии. В последние годы комбинации ингибиторов BRAF / MEK, включая дебрафениб / траметиниб, вемурафениб / кометиниб и энкорафениб / биниметиниб, были одобрены FDA, что привело к средней выживаемости без прогрессирования заболевания (ВБП) до 14.9 месяцев у пациентов с мутантной меланомой BRAF (4). По сравнению с пациентами с меланомой с мутациями BRAF ^V600, пациенты с активирующими мутациями NRAS связаны с более агрессивным прогрессированием заболевания и плохим прогнозом (5). На сегодняшний день пациенты с мутантной меланомой NRAS имеют ограниченные возможности лечения, состоящие из химиотерапевтических и иммунотерапевтических препаратов, оба из которых связаны с высокой токсичностью (6-9). К сожалению, таргетных методов лечения пациентов с мутантной меланомой NRAS крайне не хватает.
Низкомолекулярные ингибиторы, нацеленные на белок
N-Ras, сложно разработать, и попытки ингибировать посттрансляционную модификацию N-Ras с помощью ингибиторов фарнезилтрансферазы еще не принесли одобренных методов лечения (10-12). Таким образом, усилия по разработке таргетных методов лечения меланомы с мутантными NRAS были сосредоточены на сигнальных компонентах ниже NRAS в пути MAPK, таких как митоген-активируемая протеинкиназа киназа (MEK). Только часть пациентов получает пользу от ингибиторов MEK, используемых в качестве отдельных агентов, потому что они вызывают только цитостатические эффекты, а не цитотоксические эффекты в мутантных клетках меланомы NRAS (13).Ингибиторы MEK также связаны с первичной и приобретенной резистентностью, а также с частыми побочными эффектами, связанными с токсичностью (14,15). Однако ингибиторы MEK могут обеспечить многообещающее лечение в сочетании с ингибиторами других сигнальных механизмов (12,15-17). В настоящее время ингибитор MEK FCN-159, который имеет в 10 раз более высокую селективность в отношении активированного MEK1 / 2 по сравнению с траметинибом, исследуется в качестве единственного агента в клинических испытаниях фазы I (NCT03932253). Кроме того, в настоящее время проводятся клинические испытания ингибитора MEK траметиниба в комбинации с антителом ErbB3 (NCT03580382) или пан-ингибитором RAF, LXh354 (NCT02974725).Однако все эти исследования все еще находятся на ранней стадии клинических испытаний. Кроме того, возникает первичная и приобретенная устойчивость к некоторым комбинациям, таким как ингибитор MEK MEK162 с ингибитором CDK4 / 6 (18,19). Следовательно, существует постоянная потребность в понимании механизма устойчивости мутантных меланом по NRAS к ингибиторам MEK и в разработке новых стратегий лечения.
У пациентов с кожной меланомой повышенная экспрессия мРНК RhoC или MRTF-A была связана с общей плохой выживаемостью пациентов (20).Связанный с миокардином фактор транскрипции (MRTF) представляет собой пару (MRTF-A и -B) кофакторов транскрипции, расположенных ниже Rho GTPases (21,22). Rho GTPases регулируют актиновый цитоскелет и, как уже давно было продемонстрировано, играют решающую роль в клеточной инвазии и метастазировании при многих раковых заболеваниях человека, включая меланому (23,24). Активация RhoA и RhoC GTPases вызывает последующую активацию их эффекторного белка, Rho-ассоциированной протеинкиназы (ROCK), что приводит к образованию полимеров F-актина и, как следствие, истощению свободных мономеров G-актина (25).В цитозоле мономер G-актина связывается с доменом RPEL в N-концевой области MRTF и изолирует MRTF от ядра (26). При полимеризации F-актина во время формирования стрессовых волокон MRTF перемещается в ядро, где он взаимодействует с фактором ответа сыворотки (SRF), чтобы индуцировать транскрипцию многочисленных генов, участвующих в пролиферации и миграции клеток (21,22). Ось транскрипции MRTF-SRF играет прометастатическую роль в контексте меланомы и других видов рака (27).Истощение MRTF посредством РНК-интерференции (RNAi) в высокометастатической клеточной линии меланомы B16F2 снижает миграцию клеток in vitro, и in vivo, метастазов в легкие (26). Кроме того, фармакологическое ингибирование пути Rho / MRTF с помощью низкомолекулярного CCG-203971 значительно снижает клеточную миграцию и инвазию in vitro, (20,28), а также in vivo, метастазов в легкие в RhoC-экспрессирующих NRAS. мутантная линия клеток меланомы SK-Mel-147 (20). В дополнение к своим антимиграционным и антиметастатическим свойствам CCG-203971 индуцировал остановку клеточного цикла G1 в клетках меланомы.Недавнее наблюдение, что клетки меланомы, задержанные в фазе G1, обладают более высокой чувствительностью к ингибиторам MEK (29), предполагает потенциальную пользу комбинированного лечения ингибиторами MEK и ингибиторами пути Rho / MRTF.
Благодаря оптимизации взаимосвязи структура-активность CCG-203971, мы недавно сообщили об аналоге CCG-222740 с повышенной эффективностью ингибирования пути MRTF в первичных дермальных фибробластах человека (30). Кроме того, CCG-222740 продемонстрировал больший ингибирующий эффект на гены-мишени MRTF / SRF (ACTA2 и CTGF) и меньшую цитотоксичность, чем CCG-203971, на доклинической модели фиброза (31).Основываясь на нашей предыдущей работе, показывающей, что CCG-203971 ингибирует метастазирование меланомы, здесь мы оценили фармакологический потенциал CCG-222740, более мощного аналога CCG-203971, в сочетании с ингибитором MEK (траметиниб) в клетках меланомы, мутантных по NRAS. В панели мутантных клеточных линий меланомы по NRAS мы наблюдали корреляцию между степенью активации пути Rho / MRTF и внутренней устойчивостью клеток к апоптозу, опосредованному траметинибом. CCG-222740 усиливает действие траметиниба в подмножестве мутантных клеток меланомы NRAS, которые имели высокий уровень активации пути Rho / MRTF.В этих клетках комбинация траметиниба и CCG-222740 кооперативно индуцировала апоптоз и снижала потенциал образования колоний.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Ингибиторы
CCG-222740, о которых ранее сообщалось Hutchings et al. (30), был любезным подарком Скотта Ларсена из Vahltechich Medicinal Chemistry Core (Анн-Арбор, Мичиган). CCG-222740 растворяли в ДМСО в 10 мМ аликвотах и хранили при -20 ° C. Траметиниб (каталожный номер S2673), винбластин (каталожный номер S1248), Y-27632 (каталожный номер S1049) были приобретены у Selleck Chemicals (Хьюстон, Техас), восстановлены в ДМСО, и аликвоты по 10 мМ хранили при -20 ° C.
Культура клеток и анализ жизнеспособности
Клеточные линии меланомы кожи человека WM-3451 и WM-3623 были приобретены в Институте Вистар (Филадельфия, Пенсильвания), клетки SK-Mel-2 были приобретены в ATCC (Манассас, Вирджиния) и SK -Mel-19 и SK-Mel-147 были получены от доктора Марии Соенгас из Мичиганского университета и были описаны ранее (20). Клетки культивировали в среде DMEM (Life Technologies) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки и однократного раствора антибиотика-антимикотика (Life Technologies).Клетки размножали и замораживали непосредственно перед аутентификацией, а затем размораживали только за два-три месяца до экспериментов. Профили коротких тандемных повторов были получены на клеточных линиях SK-Mel-19 и SK-Mel-147 (Genewiz, South Plainfield, NJ). Полученные профили не соответствуют ни одному из установленных опубликованных профилей, и мы не смогли идентифицировать опубликованные профили для SK-Mel-19 или SK-Mel-147. Экзон 3 NRAS и экзон 15 BRAF амплифицировали с помощью ПЦР из геномной ДНК и подвергали секвенированию по Сэнгеру (MSU Genomics Core).Используемые клетки имели мутационный статус: NRAS ^Q61L (SK-Mel-2, SK-Mel-147, WM-3451), NRAS ^Q61K (WM-3623), BRAF ^V600E (SK-Mel- 19). Для анализа жизнеспособности 1000 клеток в 20 мкл DMEM, содержащей 10% FBS, высевали в 348-луночные планшеты с белым дном. Через четыре-шесть часов добавляли 10 мкл соединения 4X вместе с дополнительными 10 мкл либо второго соединения 4X, либо среды. Через 72 часа в каждую лунку добавляли 20 мкл CellTiterGlo (Promega). Планшет для анализа центрифугировали при 300 × g в течение 3 минут.Люминесценцию измеряли с помощью планшет-ридера BioTek Synergy Neo. Данные были нормализованы к значениям, полученным для клеток, обработанных носителем. Данные были нанесены на график как средние значения по крайней мере трех независимых экспериментов. Нелинейный анализ методом наименьших квадратов использовали для подгонки данных к 4-параметрической кривой зависимости [ингибитор] от ответа с использованием GraphPad Prism версий 6-8 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA).
Анализ клоногенности
Двести клеток в среде DMEM, содержащей 10% FBS, высевали в 6-луночные чашки и одновременно обрабатывали носителем или 6 мкМ CCG-222740 с 0.2) фиксированный на 50-бесконечности и округлость, определенная как 0,2–1,0.
Иммунофлуоресценция и окрашивание F-актина
Клетки
(5 × 10 ⁴) высевали на предметные стекла Falcon 8 Chamber Slides в 500 мкл DMEM, содержащей 10% FBS, и оставляли для прилипания в течение ночи. Клетки фиксировали 3,7% формальдегидом в течение 10 минут при комнатной температуре. Камеры промывали 3 раза 1X PBS по 5 минут каждая. Клетки подвергали проницаемости 0,25% Triton X-100 в PBS в течение 10 минут с последующими 3 5-минутными промывками PBS.Для обнаружения стрессовых волокон использовали родамин фаллоидин (Cytoskeleton, Inc., номер по каталогу PHDR1) в соответствии с рекомендациями производителя. Напряженные волокна оценивались с небольшими изменениями из справочного материала Verderame et al. (32). Значения баллов соответствовали критериям: 5:> 90% площади ячейки заполнено толстыми кабелями; 4: По крайней мере, два толстых кабеля, идущие под ядром, и остальная область, заполненная тонкими кабелями; 3: Нет толстых кабелей, но есть несколько тонких кабелей; 2: Кабели не видны в центре ячейки; 1: Кабель не виден.
Для окрашивания MRTF-A 10% ослиную сыворотку в PBS использовали в качестве блокирующего раствора в течение 30 минут. Для окрашивания MRTF-B и YAP в течение 30 минут использовали 5% бычий сывороточный альбумин (BSA) в PBS в качестве блокирующего раствора. Первичные антитела к MRTF-A (Santa Cruz, cat # sc-21558), MRTF-B (Santa Cruz, cat # sc-98989) или YAP (Santa Cruz cat # sc-15407) разводили 1: 100 в 1%. BSA, 0,01% Triton X-100 в PBS и инкубировали при 4 ° C в течение ночи. После 3 5-минутных промываний PBS вторичные антитела к MRTF-A (ослиные антитела против козьих IgG Alexa-Fluor® 594, Life Technologies, каталожный номер A11058), к MRTF-B или YAP (козьи анти-кроличьи антитела Alexa-Fluor® 594) IgG-антитело, Life Technologies, кат. № A11037) разводили 1: 1000 в том же буфере для первичных антител и инкубировали 1 час при комнатной температуре.После 3 5-минутных промывок PBS клетки монтировали (антифатический реагент Prolong Gold с DAPI, Invitrogen, номер по каталогу P36935) и отображали на системе визуализации клеток EVOS FL (Life Technologies) при 40-кратном увеличении. Вся оценка стрессовых волокон и ядерной локализации факторов транскрипции проводилась наблюдателем, который не знал идентичности образца.
Количественная ПЦР в реальном времени (qRT-PCR)
Клетки (2 × 10 ⁵) высевали в 6-луночные планшеты и оставляли на ночь, затем собирали на следующий день для анализа мРНК CYR61.Вкратце, РНК выделяли с использованием набора RNeasy (Qiagen) в соответствии с инструкциями производителя. РНК (1 мкг) использовали в качестве матрицы для синтеза кДНК с использованием набора для обратной транскриптазы (Life Technologies cat # 4368814). ПЦР в реальном времени проводили с использованием SYBR Green Master Mix (Life Technologies, кат. № 4309155) с использованием 4 мкл реакции кДНК на приборе Stratagene Mx3000P (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния), и значения cT анализировали относительно экспрессии GAPDH. Клетки SK-Mel-19, которые имеют низкую степень активации Rho (20), были использованы для нормализации относительных уровней мРНК CYR61 для тестирования линий клеток с мутацией NRAS.Для экспериментов с мРНК SRF клетки обрабатывали 2 нМ траметиниба и собирали в определенные моменты времени. ДМСО-контроль использовали для нормализации относительной экспрессии. Для оценки эффектов CCG-222740 на уровни мРНК CYR61, CRIM1, THBS1 и ANKRD1 4,5 × 10 ⁵ клеток высевали в 6-луночные планшеты и оставляли для прикрепления на ночь. Затем клетки обрабатывали 10 мкМ CCG-222740 в течение 24 часов. Выделение РНК и синтез кДНК выполняли, как указано выше. ПЦР в реальном времени проводили с использованием смеси SYBR Green Master Mix и 2 мкл кДНК на приборе Stratagene Mx3000P.Значения cT нормализовали относительно экспрессии GAPDH, и кратность изменения экспрессии мРНК после обработки CCG-222740 рассчитывали относительно контроля носителя (0,02% ДМСО). Последовательности праймеров: CYR61 F1: 5’-GAAGGTGAAGGTCGGAGTCA-3 ’; CYR61 R1: 5’-TTGAGGTCAATGAAGGGGTC-3 ’; CYR61 F2: 5’-CTCGCCTTAGTCGTCACCC-3 ’; CYR61 R2: 5’-CGCCGAAGTTGCATTCCAG-3 ’; GAPDH F1: 5’-CTCGCGGCTTACCGACTG-3 ’; GAPDH R1: 5’-GGCTCTGCTTCTCTAGCCTG-3 ’; GAPDH F2: 5’-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3 ’; GAPDH R2: 5’-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3 ’; SRF F: 5’-CCTTCAGCAAGAGGAAGACG-3 ’; SRF R: 5’-GATCATGGGCTGCAGTTTTC-3 ’; CRIM1 F: GGTTCCTGTTGTGCTCTTGT; CRIM1 R: TGCCAAGAATCAAGTTGCAGATAA; THBS1 F: AGACTCCGCATCGCAAAGG; THBS1 R: TCACCACGTTGTTGTCAAGGG; ANKRD1 F: AGAACTGTGCTGGGAAGACG; ANKRD1 R: GCCATGCCTTCAAAATGCCA.
Вестерн-блоттинг
Клетки
(8 × 10 ⁵) высевали в чашки диаметром 60 мм. Для иммуноблотов как pERK1 / 2, так и pMLC (Phospho-Myosin Light Chain 2, Thr18 / Ser19) клетки собирали через 24 часа после посева прямым лизисом в 2X буфере Лэммли, смешанном с равным объемом буфера RIPA (10 мМ Tris-Cl, pH 8,0. , 1 мМ EDTA, 1% Triton X-100, 0,1% дезоксихолата натрия, 0,1% SDS, 140 мМ NaCl, коктейль ингибиторов протеазы / фосфатазы Thermo Fisher cat # 88266). Образцы обрабатывали ультразвуком 2 раза в течение 5 секунд и нагревали в течение 5 минут при 95 ° C.Равные объемы лизата белка (30 мкл) для каждой клеточной линии разделяли с использованием 15% гелей SDS-PAGE, переносили на мембраны PVDF и блокировали 5% BSA в трис-буферном солевом растворе Tween. Первичные и вторичные антитела разводили в 1% BSA, 0,01% Triton X-100 в PBS. Мембраны инкубировали с первичными антителами pERK1 / 2 pT202 / Y204, разведенными 1: 1000 (Calbiochem cat # KP26001), общим ERK1 / 2 (Cell Signaling cat # 9102), pMLC (Cell Signaling cat # 3674S), GAPDH (Santa Cruz cat # 365062) в течение ночи при 4 ° C. Конъюгированные с HRP антитела против кролика (Cell Signaling, кат. № 7074P2) и конъюгированные с HRP антитела против мыши (Cell Signaling, кат. № 7076P2) разводили 1: 6000.Блоты проявляли с использованием хемилюминесцентного субстрата HRP FemtoGlow ™ Western (Michigan Diagnostics, кат. № FWPS02). Полосы визуализировали и количественно оценивали с помощью сканера Li-Cor Odyssey Fc и количественно оценивали с помощью Image Studio Lite версии 5.2.
Анализ активности каспазы 3/7 Клетки
(2 × 10 ⁵) помещали в 6-луночные планшеты в среде DMEM с 10% FBS и оставляли для прилипания в течение ночи. Лечение проводилось на следующий день либо 10 мкМ CCG-222740, либо 12,5 нМ траметиниба отдельно или в комбинации и 0.2% ДМСО использовали в качестве контроля носителя. Набор для анализа проточной цитометрии CellEvent ™ Caspase-3/7 Green (Invitrogen) использовали в соответствии с протоколом производителя с небольшими изменениями. Вкратце, среду и клетки собирали с использованием скребка для клеток через 48 часов после начала обработки и центрифугировали при 300 × g в течение 5 минут. Осадки клеток промывали PBS и снова осаждали. Клетки ресуспендировали в 1 мл PBS и 150 мкл раствора клеток добавляли в 96-луночный планшет с V-образным дном. Планшет центрифугировали при 300 x g в течение 5 минут и супернатант PBS удаляли.Компенсационные контроли с однократным окрашиванием включали для каждой клеточной линии для каждого эксперимента. 25 мкл либо буфера FACs (1% FBS в PBS), либо реагента для обнаружения зеленого цвета CellEvent ™ Caspase-3/7 (разведенного 1: 1000 в буфере FACS) добавляли в соответствующие лунки, планшет покрывали пленкой и инкубировали при 37 ° C при 5% CO ₂ в течение 25 минут. Планшет удаляли и 25 мкл либо буфера FACs, либо красителя мертвых клеток SYTOX ™ AADvanced ™ (разведенного 1: 1000 в буфере FACS) добавляли в соответствующие лунки.Планшет покрывали пленкой и инкубировали при 37 ° C в течение 5 минут. После инкубации в каждую лунку добавляли 100 мкл буфера FAC и образцы переносили в пробирки Эппендорфа объемом 0,5 мл в атмосфере 5% CO ₂. Флуоресценцию детектировали с помощью проточного цитометра C6 BD Accuri (BD Accuri, Сан-Хосе, Калифорния). Флуоресценцию количественно оценивали с помощью программного обеспечения CFLow (BD Accuri). События (20 000) были обнаружены в трех повторностях для всех групп лечения, были проведены три независимых эксперимента, и результаты были усреднены.
Подготовка образцов RNA-Seq и обработка данных
Клетки SK-Mel-147 обрабатывали — / + 10 мкМ CCG-222740 или контрольный носитель в течение 24 часов. Полную клеточную РНК экстрагировали (две биологические повторы для каждого условия лечения) с использованием набора Qiagen, Hilden, Германия, RNeasy (# 74104) согласно протоколу производителя. РНК элюировали не содержащей нуклеаз H ₂ О. Концентрацию РНК измеряли с помощью Qubit, а контроль качества выполняли на биоанализаторе Agilent 2100 в MSU Genomics Core.Все образцы РНК имели показатель RIN> 8. Библиотеки со штрих-кодами получали с использованием набора для подготовки библиотеки многожильных мРНК Illumina TruSeq на роботе Perkin Elmer Sciclone G3 в соответствии с рекомендациями производителя. Завершенные библиотеки подвергали контролю качества и количественной оценке с использованием комбинации анализов Qubit dsDNA HS и Caliper LabChipGX HS DNA. Библиотеки объединяли и запускали на двух дорожках, а секвенирование выполняли в формате одностороннего считывания 1 × 50 п.н. с использованием реагентов HiSeq 4000 SBS. Вызов базы был выполнен компанией Illumina Real Time Analysis, RTA_ v2.7.7, а вывод RTA был демультиплексирован и преобразован в формат FastQ с помощью Illumina Bcl2fastq v2.19.0. Секвенирование выполняли на глубине> 30 млн считываний на образец. Контроль качества выполнялся для файлов FastQ с помощью FastQC v0.11.5, а чтения были обрезаны с помощью Trimmomatic v0.33. Считывания были сопоставлены с помощью HISAT2 v2.1.0 и проанализированы с помощью HTSeq v0.6.1. Дифференциальную экспрессию генов рассчитывали с использованием edgeR. Необработанные считывания RNA-Seq и счетчики обработанных считываний HTSeq доступны на GEO под GSE134320.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Активация пути MRTF коррелирует с устойчивостью к траметинибу
Сообщается, что траметиниб вызывает апоптоз на различных уровнях и в целом менее эффективен в клетках мутантной меланомы NRAS по сравнению с клетками меланомы мутанта BRAF (5).Поэтому мы сначала определили чувствительность панели из четырех мутантных клеточных линий меланомы NRAS к ингибированию жизнеспособности клеток лечением траметинибом. Кроме того, мы сравнили их с мутантной линией клеток меланомы BRAF ^V600E SK-Mel-19. Панель клеточных линий включала клетки SK-Mel-147, SK-Mel-2 и WM-3451, содержащие мутации NRAS ^Q61L, и клетки WM-3451, содержащие мутацию NRAS ^Q61K. Все линии мутантных клеток меланомы NRAS в нашей панели были менее чувствительны к лечению траметинибом, чем мутантные клетки BRAF SK-Mel-19 (рис.1А). Площадь под кривой (AUC), определенная по логарифмическим кривым ответа концентрации [траметиниба] (от -11 до -7), продемонстрировала значительно большую устойчивость к траметинибу, а также значительную вариабельность среди мутантных клеток NRAS по сравнению с SK-Mel-19 ( Рис. 1Б). Ранее было показано, что клетки меланомы, несущие мутации NRAS ^Q61, обладают гиперактивацией пути MAPK (33). Таким образом, мы количественно оценили pERK1 / 2 с помощью вестерн-блоттинга в базовых условиях для каждой клеточной линии (рис. 1C). Мы обнаружили, что уровни pERK1 / 2 существенно варьировались по всей панели клеточных линий с уменьшением количества pERK1 / 2, связанным с повышенной устойчивостью к траметинибу (рис.1D).
Рис. 1. Мутантные линии клеток меланомы по NRAS обладают различными уровнями внутренней устойчивости к индуцированной траметинибом гибели клеток.
A. Чувствительность к траметинибу определяли путем обработки каждой клеточной линии в 10% FBS с возрастающими концентрациями траметиниба в течение 72 часов. Жизнеспособность клеток определяли с помощью Cell-TiterGLO®. Значения на графике выражены как доля люминесценции относительно контроля носителя для по крайней мере трех независимых экспериментов. Значения pIC ₅₀ (-log IC ₅₀, M) значения указаны для каждой клеточной линии. B. Площадь под кривой (AUC) строили на основе кривых логарифмической реакции на концентрацию (log [траметиниб] от -11 до -7), полученных на панели A с использованием GraphPad Prism. Большая площадь означает меньший ответ на траметиниб или повышенную резистентность к траметинибу (* p <0,05, *** p <0,01, **** p <0,001 по сравнению с SK-Mel-19; * p <0,05, WM-3451 по сравнению с SK-Mel-19; ** p <0,01, WM-3623 по сравнению с WM-3451; * p <0,05, SK-Mel-147 по сравнению с WM-3623). C. Вестерн-блот-анализ pERK1 / 2 на панели клеточных линий.Каждую клеточную линию меланомы высевали на чашки диаметром 60 мм в 10% FBS и собирали через 24 часа. Изображение представляет собой типичный блот из трех независимых экспериментов. D. Количественный анализ плотности полос выполняли для каждого эксперимента, сравнивая интенсивность pERK1 / 2 относительно общей ERK1 / 2. Результаты выражены как среднее значение (± SEM) для трех экспериментов (* p <0,05, **** p <0,001 по сравнению с SK-Mel-19).
Наши недавние открытия показали роль пути Rho / MRTF в миграции, инвазии и метастазировании агрессивной кожной меланомы человека (20,34), а также в приобретенной устойчивости мутантных клеток меланомы BRAF к ингибиторам BRAF (34).Таким образом, мы предположили, что путь Rho / MRTF может играть роль во внутренней устойчивости некоторых мутантных клеток меланомы NRAS к индуцированному траметинибом ингибированию жизнеспособности клеток. После активации пути Rho / MRTF легкая цепь миозина (MLC) фосфорилируется, и G-актин полимеризуется в стрессовые волокна F-актина (35). Истощение G-актина во время формирования стрессовых волокон приводит к транслокации MRTF в ядро, где он регулирует транскрипцию гена, включая повышение уровня цистеин-богатого ангиогенного индуктора 61 (CYR61) (36).Мы наблюдали повышенные уровни фосфорилированной MLC (pMLC) в мутантных клеточных линиях NRAS по сравнению с SK-Mel-19, со статистически значимо более высокими уровнями pMLC в клетках SK-Mel-2 (Supp. Fig.1). Затем мы окрашивали клетки на актин и оценивали изображения на наличие клеток с положительным стрессовым волокном, как описано в разделе «Методы». Подобно pERK1 / 2, мы обнаружили повышенное образование стрессовых волокон в мутантных клеточных линиях NRAS по сравнению с мутантными клеточными линиями BRAF SK-Mel-19. Среди мутантных клеточных линий NRAS клетки SK-Mel-147 показали самую сильную положительную реакцию на стрессовые волокна (рис.2А-Б). Когда мы сравнили процент клеток, положительных на стрессовые волокна, с устойчивостью к траметинибу (AUC), мы обнаружили сильную положительную корреляцию (r ² = 0,96, p = 0,003) (рис. 2C). Эта корреляция все еще была сильной при простом сравнении линий мутантных клеток NRAS (r ² = 0,95, p = 0,024). Аналогичным образом, значимая корреляция между уровнями мРНК CYR61 и устойчивостью к траметинибу (AUC) также наблюдалась для всех клеток. (r2 = 0,92, p = 0,012) и только для мутантных клеток NRAS (r2 = 0.74, p = 0,0003) (рисунок 2D). Поскольку экспрессия гена CYR61 может регулироваться при активации либо пути Rho / MRTF через ядерный MRTF-A / B, либо пути Hippo через ядерный YAP, соответственно (37), мы затем исследовали локализацию этих факторов транскрипции. Либо MRTF-A, либо MRTF-B были сильно ядерными в 3 из 4 мутантных клеточных линий NRAS, но не в клетках WM-3451 или SK-Mel-19 (фиг. 2E-F, Supp. Фиг. 2A). Интересно, что WM-3623 имел только MRTF-B в ядре, но не MRTF-A (см. Обсуждение). Наконец, мы обнаружили высокий процент клеток с ядерным YAP в нашей клеточной панели, включая мутантные клетки BRAF SK-Mel-19, без существенных различий между клеточными линиями (рис.2G и Supp. Рис. 2Б). Взятые вместе, эти результаты показывают, что путь Rho / MRTF активируется в мутантных клеточных линиях меланомы по NRAS, обладающих внутренней устойчивостью к индуцированному траметинибом ингибированию пролиферации клеток.
Рис. 2. Активация пути MRTF коррелирует с устойчивостью к траметинибу.
A. Окрашивание актина (красный) оценивали на панели линии клеток меланомы с использованием фаллоидинового токсина, конъюгированного с флуорофором. B. Для количественной оценки stres-волокон использовали оценку от 1 до 5, как описано в способах, и процент клеток, набранных 3-5 баллов, представлен как положительный стресс-волокно для каждой линии клеток.Результаты выражены как среднее значение (SEM) для трех экспериментов (* p <0,05, *** p <0,005, **** p <0,001 по сравнению с SK-Mel-19 или SK-Mel-147). C. Устойчивость к траметинибу коррелирует с% положительности стрессовых волокон. Используя значения, изображенные на Рисунке 1B и Рисунке 2B, наблюдалась сильная положительная корреляция (r ² = 0,96, p = 0,003, коэффициенты корреляции Пирсона, GraphPad Prism). D. Уровни мРНК CYR61 коррелируют с устойчивостью к траметинибу. Используя значения, изображенные на рисунке 2D, по сравнению с нормализованными уровнями экспрессии мРНК log CYR61, определенными с помощью кПЦР, наблюдалась значимая положительная корреляция (r ² = 0.71, p = 0,04, коэффициенты корреляции Пирсона, GraphPad Prism). E. Репрезентативные изображения клеточной локализации MRTF-B с использованием иммунофлуоресценции в клетках меланомы (10% FBS). F. Клеточная локализация MRTF-A или MRTF-B, наблюдаемая с помощью иммуноцитохимии клеток меланомы. Изображения количественно оценивали путем оценки отдельных клеток как исключительно ядерных (N), цитозольных (C) или даже распределения (N / C) MRTF-A (черные столбцы) или MRTF-B (серые столбцы). Подсчеты из трех независимых экспериментов с не менее чем 100 клетками, набранными для каждой клеточной линии (*** p <0.005, **** p <0,001 по сравнению с SK-Mel-19). G. Клеточная локализация YAP с использованием иммунофлуоресценции была определена, как указано выше, для изоформ MRTF. Существенной разницы между клеточными линиями меланомы не наблюдалось.
Ингибитор пути MRTF, CCG-222740, взаимодействует с траметинибом для снижения жизнеспособности мутантных клеток меланомы NRAS
Учитывая потенциальную роль активации пути Rho / MRTF во внутренней устойчивости мутантных клеточных линий NRAS к лечению траметинибом, мы затем попытались определить, может ли ингибитор пути Rho / MRTF CCG-222740 усиливать эффекты траметиниба на жизнеспособность в нашей панели мутантных клеточных линий NRAS (рис.3А). Используя эксперименты с перекрестной концентрационной реакцией, мы наблюдали, что клетки SK-Mel-147 продемонстрировали значительный сдвиг влево в логарифме IC ₅₀ с почти 2 логарифмическим сдвигом при самой высокой использованной концентрации CCG-222740 (фиг. 3A-B). ). Клетки WM-3623 и клетки SK-Mel-2 также показали усиление эффектов траметиниба, когда траметиниб был объединен с CCG-222740 (см. Графики Δlog IC ₅₀, фиг. 3A-B). Клетки WM-3451, которые имели минимальные доказательства активации Rho / MRTF, не проявляли потенцирования траметиниба при использовании CCG-222740 в комбинации (рис.3А-Б). Чтобы определить, представляют ли наблюдаемые сдвиги влево в log IC ₅₀ траметиниба в комбинации с CCG-222740 синергетический эффект, мы рассчитали избыток Loewe, чтобы получить оценку синергизма (38). Синергия (Loewe Excess 1.67–3.03) наблюдалась для трех мутантных клеточных линий NRAS с наибольшей внутренней устойчивостью к траметинибу, а также наибольшей обнаруженной активностью пути Rho / MRTF. С другой стороны, клетки WM-3451 не проявляли признаков синергизма (фиг. 3C).Эти результаты демонстрируют, что траметиниб и CCG-222740 совместно снижают жизнеспособность подмножества линий мутантных клеток меланомы NRAS, которые обладают повышенной активностью пути Rho / MRTF и высокой внутренней устойчивостью к траметинибу.
Рисунок 3. CCG-222740 действует синергетически с траметинибом, подавляя жизнеспособность мутантных клеток меланомы NRAS.
A. Чувствительность к CCG-222740 и траметинибу в комбинации определяли путем обработки каждой клеточной линии возрастающими концентрациями траметиниба в присутствии диапазона концентраций CCG-222740.Жизнеспособность клеток через 72 часа определяли с помощью Cell-TiterGLO®. Значения выражены как доля люминесценции по сравнению с контрольным носителем, по крайней мере, для трех независимых экспериментов. Красная стрелка указывает на logIC ₅₀ траметиниба в отсутствие CCG-222740, а черная стрелка указывает на logIC ₅₀ совместной обработки при 12,5 нМ или 25 нМ CCG-222740, который когда-либо демонстрировал наибольший сдвиг влево в кривая ответа концентрации траметиниба. B. ΔlogIC ₅₀ траметиниба определяют как разницу между logIC ₅₀ траметиниба в отсутствие и в присутствии CCG-222740. C. Loewe Excess использовался в качестве показателя синергетических эффектов комбинированного лечения. Избыток Loewe определяли путем определения числовых избыточных значений с помощью анализатора чаши. Это программное обеспечение сравнивает наблюдаемый набор данных с прогнозируемой моделью аддитивности для оценки синергизма. Выраженные значения представляют собой среднее значение по крайней мере трех независимых экспериментов.
CCG-222740 нарушает ядерную локализацию MRTF-A и MRTF-B, но не YAP
Как сообщалось ранее (20) для структурно аналогичного соединения, CCG-203971, CCG-222740 эффективно снижает ядерную локализацию MRTF-A в концентрации зависимым образом в клетках SK-Mel-147 (рис.4A-B). Он также снизил процент ядерных MRTF-B (фиг. 4C-D), однако не было значительных различий в ядерной локализации YAP после обработки CCG-222740 (фиг. 4E-F). Мы также наблюдали снижение уровней мРНК генов-мишеней MRTF CYR61, ANKRD1, CRIM1 и THBS1 после 24-часовой обработки клеток SK-Mel-147 CCG-222740 в анализе RNA-Seq (дополнительная таблица S1), что было подтверждено с помощью qRT. -ПЦР-анализ (снижение на 40-80%, дополнительный рисунок S3). Эти результаты соответствуют ингибированию пути Rho / MRTF.
Рисунок 4. CCG-222740 нарушает ядерную локализацию MRTF-A и MRTF-B, но не YAP.
A. Клеточную локализацию MRTF-A определяли в клетках SK-Mel-147 с использованием иммунофлуоресценции после 24-часовой обработки контрольного носителя (VC) 0,1% ДМСО или 10 мкМ CCG-222740 в присутствии 10% FBS. B. Количественную оценку клеточной локализации MRTF-A определяли путем оценки отдельных клеток как исключительно ядерных (N), цитозольных (C) или даже распределенных (N / C). Подсчет из двух независимых экспериментов с не менее чем 100 клетками, оцениваемыми вслепую для каждого состояния. C. Клеточную локализацию MRTF-B определяли в клетках SK-Mel-147, как указано выше для MRTF-A. D. Количественную оценку клеточной локализации MRTF-B определяли путем оценки отдельных клеток как исключительно ядерных (N), цитозольных (C) или даже распределенных (N / C). Подсчет из двух независимых экспериментов с не менее чем 100 клетками, оцениваемыми вслепую для каждого состояния. E. Клеточную локализацию YAP определяли в клетках SK-Mel-147, как указано выше для MRTF-A. F. Количественную оценку клеточной локализации MRTF-B определяли путем оценки отдельных клеток как исключительно ядерных (N), цитозольных (C) или даже распределенных (N / C). Подсчет результатов трех независимых экспериментов с не менее чем 100 клетками, оцениваемыми вслепую для каждого состояния.
Усиление траметиниба CCG-222740 специфично для механизмов пути Rho / MRTF
Чтобы определить, является ли усиление траметиниба CCG-222740 специфическим для ингибирования пути Rho / MRTF или просто результатом комбинации с цитотоксическим агентом, мы впервые протестировали траметиниб в сочетании с винбластином, который представляет собой химиотерапевтический агент, нарушающий сборку микротрубочек (39).Один винбластин при использовании в дозе 1-10 нМ эффективно снижал жизнеспособность клеток SK-Mel-147, однако при использовании в комбинации с траметинибом не наблюдалось значительного сдвига в log IC ₅₀ траметиниба (фиг. 5A). Кроме того, оценка синергии была низкой, 1,42, для комбинации винбластина и траметиниба (рис. 5B). В качестве еще одного агента, нарушающего передачу сигналов Rho / MRTF, мы протестировали эффекты ингибитора ROCK Y-27632 в сочетании с траметинибом (40). Передача сигналов ROCK предшествует активации MRTF и является ключевым компонентом пути Rho / MRTF.Когда Y-27632 использовался в комбинации с траметинибом в клетках SK-Mel-147, наблюдался значительный сдвиг в log IC ₅₀, почти на один логарифм по сравнению с одним траметинибом (фиг. 5C). По результатам анализа Loewe Excess, показатель синергии также был высоким — 2,11 (рис. 5D). Эти результаты показывают, что ингибирование пути Rho / MRTF двумя разными агентами является синергическим в комбинации с траметинибом, в то время как эффекты нецелевого агента винбластина и траметиниба являются аддитивными.
Рисунок 5.Усиление действия траметиниба специфично для механизмов пути Rho / MRTF.
A. Чувствительность к траметинибу в сочетании с винбластином. Комбинированные методы лечения изучались таким же образом, как описано на Фигуре 3А. Приведенные значения выражены как доля люминесценции по сравнению с контрольным носителем для трех независимых экспериментов. B. Loewe Excess использовали в качестве показателя синергетических эффектов комбинированных обработок на фиг. 5A, как показано на фиг. 3C.Выраженные значения представляют собой среднее значение трех независимых экспериментов. C. Чувствительность к траметинибу в сочетании с ингибитором ROCK Y-27632. Комбинированное лечение определяли таким же образом, как описано выше на Фигуре 3A . D. Loewe Excess был определен для комбинированных обработок на фиг. 5C, как показано на фиг. 3C. Выраженные значения представляют собой среднее значение трех независимых экспериментов.
Комбинированное лечение траметинибом и CCG-222740 индуцирует апоптоз и подавляет клоногенность в клетках SK-Mel-147
Для оценки функциональных эффектов комбинированного лечения мы измерили активность каспазы3 / 7 как меру индукции апоптоза.Один только CCG-222740 (10 мкМ) не влиял на базальный апоптоз, на что указывает отсутствие изменений активности каспазы3 / 7 по сравнению с контролем (фиг. 6A). Низкий наномолярный траметиниб увеличивал активность каспазы3 / 7 по сравнению с необработанными клетками, хотя эффект не был статистически значимым (фиг. 6A). Однако, когда траметиниб использовался в сочетании с CCG-222740, в клетках SK-Mel-147 наблюдалось значительное увеличение активности каспазы3 / 7 (фиг. 6A). Эти данные свидетельствуют о том, что клетки SK-Mel-147, которые обладают высокой устойчивостью к гибели клеток, вызванной траметинибом, демонстрируют кооперативную индукцию апоптоза, когда ингибитор пути Rho / MRTF CCG-222740 используется в комбинации.
Рисунок 6. Комбинированная обработка траметинибом и CCG-222740 индуцирует апоптоз и подавляет клоногенность в клетках SK-Mel-147.
A. Активность каспазы 3/7 определяли с помощью проточной цитометрии через 48 часов после обработки 10 мкМ CCG-222740 и 12,5 нМ траметиниба отдельно или в комбинации и 0,2% DMSO VC. B. Клетки SK-Mel-147 высевали с низкой плотностью (200 клеток / лунку) в 6-луночные планшеты и одновременно обрабатывали ДМСО контролем, 6 мкМ CCG-222740, 0,1 нМ траметинибом, 1 нМ траметинибом или их комбинацией. каждого.2) фиксированный на 50-бесконечности и округлость, определенная как 0,2–1,0. Результаты выражены как среднее значение (± SEM) для трех экспериментов (*** p <0,005 по сравнению с VC). D. Средняя площадь колонии была определена с помощью ImageJ, и результаты выражены как среднее (± SEM) трех повторных экспериментов (** p <0,01, *** p <0,005, **** p <0,0001 по сравнению с VC. ).
Наконец, мы выполнили анализ образования колоний для оценки клоногенности клеток SK-Mel-147 в присутствии траметиниба и CCG-222740. Обработка одним CCG-222740 (6 мкМ) или одним траметинибом (1 нМ) не оказала значительного влияния на количество колоний, образованных клетками SK-Mel-147 (рис.6Б). Однако, когда клетки обрабатывали комбинацией 1 нМ траметиниба и 6 мкМ CCG-222740, образование колоний почти прекратилось (фиг. 6B-C). Когда мы оценивали среднюю площадь колоний, мы обнаружили значительное снижение при лечении одним агентом и комбинацией, за исключением 0,1 нМ траметиниба (рис. 6D). Наибольшее уменьшение средней площади колоний было обнаружено, когда клетки обрабатывали 1 нМ траметиниба в комбинации с 6 мкМ CCG-222740 (фиг. 6D). Таким образом, комбинированное лечение траметинибом и CCG-222470 заметно ингибировало клоногенность клеток SK-Mel-147.
ОБСУЖДЕНИЕ
Учитывая отсутствие в настоящее время утвержденных целевых методов лечения пациентов с мутантной меланомой NRAS, ингибиторы MEK предлагают потенциальный вариант лечения. Однако внутренняя и приобретенная устойчивость к этим ингибиторам является серьезным препятствием. В недавнем исследовании Najem et al. наблюдали, что ингибирование MEK с использованием пимасертиба имело лишь ограниченный эффект на апоптоз в мутантных клеточных линиях меланомы NRAS ^Q61 (14). Они объяснили это систематической активацией MITF и результирующей активацией Bcl-2 при лечении пимасертибом.Здесь мы показываем, что панель из четырех мутантных клеточных линий меланомы NRAS ^Q61 имела разную чувствительность к лечению траметинибом и что путь Rho / MRTF был активирован в подмножестве мутантных клеточных линий меланомы NRAS с высокой внутренней устойчивостью к опосредованным траметинибом клеткам. задержка роста.
Амплификация RhoA / C или MKL1 / 2 (названия генов MRTF-A / B) или мутации в вышестоящих активаторах RhoA / C были обнаружены примерно в 30% кожных меланом. Повышенная экспрессия RhoC или MRTF-A была связана с агрессивным заболеванием и общей плохой выживаемостью пациентов (20).В то время как ось транскрипции MRTF-SRF играет прометастатическую роль при раке, путь Rho / MRTF также становится механизмом лекарственной устойчивости при различных типах злокачественных новообразований кожи. Whitson et al. сообщили, что активация пути Rho / MRTF способствует устойчивости к сглаженному ингибитору (SMO) при базально-клеточной карциноме (BCC) (41). Лечение ингибиторами пути MRTF CCG-1432 и CCG-203971 имело значительную эффективность при лечении резистентного BCC in vivo , что указывает на терапевтический потенциал этого пути при лекарственно-устойчивых злокачественных новообразованиях.Кроме того, мы недавно сообщили об активации пути Rho / MRTF в подмножестве устойчивых к ингибитору BRAF клеточных линий мутантной меланомы BRAF ^V600 (34). Ингибирование этого пути с помощью CCG-222740 повторно сенсибилизировало резистентные клетки к вемурафенибу. Здесь мы наблюдали большую активацию пути Rho / MRTF в SK-Mel-147 и других мутантных клетках меланомы по NRAS по сравнению с мутантными BRAF клетками SK-Mel-19, что было измерено по образованию стрессовых волокон, ядерной локализации MRTF-A / B и уровни экспрессии мРНК целевого гена, CYR61.Важно отметить, что активация пути Rho / MRTF сильно коррелировала с внутренней устойчивостью к траметинибу в этих мутантных клеточных линиях NRAS. В свете обратной связи между активацией pERK и Rho / MRTF вполне вероятно, что путь Rho / MRTF берет верх над путем MAPK в управлении пролиферацией и выживанием клеток.
Принимая во внимание неэффективность терапии, направленной на BRAF и MEK, у пациентов с мутантной меланомой по NRAS (42), недавние усилия были сосредоточены на поиске других терапевтических целей и разработке комбинированной терапии.Например, сообщалось, что ингибирование новой NRAS-активирующей киназы (STK19) и сочетание ингибиторов MEK с ингибиторами тирозинкиназы рецептора MER (MERTK), BET и HDAC блокируют рост мутантной NRAS меланомы in vitro, и in vivo. (15-17,43). В этом исследовании мы демонстрируем, что комбинация ингибитора пути Rho / MRTF, CCG-222740 и ингибитора MEK траметиниба синергетически ингибирует жизнеспособность подмножества мутантных клеток меланомы NRAS, а также индуцирует апоптоз в клетке с высокоактивированным путем Rho / MRTF.Аналогичные результаты в отношении жизнеспособности клеток были получены при использовании траметиниба в сочетании с ингибитором ROCK, который является важным компонентом пути Rho / MRTF. Наши результаты соответствуют предыдущим отчетам, которые продемонстрировали, что комбинация ингибиторов MEK и ROCK не только снижает жизнеспособность мутантных клеток меланомы NRAS in vitro , но также снижает рост опухоли in vivo (12). В клетках SK-MEL-147, которые являются наиболее устойчивыми к траметинибу клетками в нашей панели, 12.Для индукции апоптоза требовалось 5 нМ траметиниба в комбинации с 10 мкМ CCG-222740. Эта доза траметиниба соответствует или ниже, чем в других исследованиях in vitro , включающих синергетическую комбинацию траметиниба с другим низкомолекулярным ингибитором (14,16,44). Например, Vogel et al. сообщили о кооперативной индукции апоптоза в клетках SK-MEL-147 при использовании комбинации 100 нМ траметиниба и 1 мкМ ингибитора ROCK GSK269962A (12). Примечательно, что для резкого подавления клоногенности клеток SK-Mel-147 потребовался только 1 нМ траметиниба вместе с 6 мкМ CCG-222740.Кроме того, 12,5 нМ траметиниба и 10 мкМ CCG-222740 индуцировали апоптоз в клетках SK-Mel-147. Использование таких низких концентраций ингибитора MEK является значительным преимуществом, поскольку серьезная ограничивающая дозу токсичность является проблемой для ингибиторов MEK.
Мы наблюдали, что CCG-222740 нарушил ядерную локализацию MRTF в клетках SK-Mel-147, что сопровождалось подавлением генов-мишеней MRTF CYR61, ANKRD1, CRIM1 и THBS1. Эти гены в оси MRTF-SRF также могут регулироваться с помощью YAP, фактора транскрипции в пути Hippo.Используя CYR61 в качестве модельного гена-мишени Yu et al. продемонстрировали, что активация путей MRTF-A и YAP и функциональные взаимодействия между MRTF-A и YAP необходимы для транскрипционного контроля генов, регулируемых RhoA (45). Foster et al. далее показали, что экспрессия генов-мишеней MRTF-SRF и экспрессия генов-мишеней YAP взаимозависимы, даже если только один из этих путей напрямую регулирует целевой ген (46). Далее они обнаружили, что активация одного из этих путей косвенно активирует другой путь в зависимости от динамики цитоскелета.Здесь мы обнаружили, что YAP был локализован в ядрах всех протестированных клеточных линий, независимо от мутационного статуса BRAF или NRAS и чувствительности клеток к траметинибу. Кроме того, YAP оставался локализованным в ядре даже после лечения CCG-222740. Мы попытались изучить участие пути YAP и Hippo в потенцировании траметиниба с помощью CCG-222740 с использованием вертепорфина, ингибитора YAP (47). Однако нам не удалось получить последовательные и воспроизводимые результаты в анализе жизнеспособности клеток при тестировании эффектов комбинации вертепорфина и траметиниба (данные не показаны).
В заключение мы сообщаем о роли пути Rho / MRTF во внутренней устойчивости мутантных клеток меланомы NRAS к гибели клеток, индуцированной ингибитором MEK. CCG-222740, ингибитор пути Rho / MRTF, заметно увеличивал активность траметиниба на клеточных линиях меланомы, мутантных по NRAS. Комбинация CCG-222740 и траметиниба индуцировала апоптоз и ингибировала клоногенность в тех клеточных линиях меланомы, мутантных по NRAS, имеющих повышенную активацию Rho / MRTF. Эти результаты требуют дальнейших исследований in vivo и потенциально клинической разработки комбинаций ингибиторов MEK с ингибиторами пути Rho / MRTF.
Конфликт интересов
Доктор Нойбиг является основателем и президентом компании FibosIX, Inc., у которой есть опция лицензии на CCG-222740.
Благодарности
Мы хотели бы поблагодарить доктора Эрику Лизабет, доктора Уильяма Джексона, доктора Шерил Роквелл и доктора Кэтлин Галло за полезные обсуждения.
👗 Loewe — Письменный и устный перевод для сектора высокой моды
Loewe

Письменный и устный перевод для индустрии высокой моды

Письменный и устный перевод для индустрии высокой моды
01/
КЛИЕНТ
Loewe , фирма высокой моды, основанная в 1846, является визитной карточкой моды в Испании и мировым эталоном.Бренд является синонимом роскоши, качества и элегантности и имеет отличную репутацию в мире роскошных домов моды. Фонд Loewe Foundation , созданный по заказу фирмы, стремится сохранить искусство и культуру и отмечает знаменитую Loewe Craft Prize .
02/
ВЫЗОВ
Loewe регулярно публикует маркетинговые и коммуникационные материалы и нуждается в их переводе на несколько разных языков, чтобы они были четкими, эффективными и высококачественными, в частности, их пресс-релизы и другие редакционные публикации аналогичного характера.Кроме того, им требуются услуги переводчика на пресс-конференциях, чтобы облегчить общение между докладчиками и гостями или журналистами. С другой стороны, Loewe Foundation нуждается в точном и строгом общении на других языках при проведении тендеров и других элементах.
03/
РЕШЕНИЕ
Для Loewe и Loewe Foundation , Nóvalo создала команду модных писателей, переводчиков и корректоров с творческим и самобытным стилем, чтобы удовлетворить требовательные требования клиентов к стилю своих публикаций.

до 17 лет
18 — 24
25 — 34
35 — 44
старше 45

нестойкий
маленькая
средняя
большая
очень стойкий

до 17 лет
18 — 24
25 — 34
35 — 44
старше 45

нестойкий
маленькая
средняя
большая
очень стойкий

маленький
небольшой
средний
большой

Праймер вперед .	Праймер обратный .	Шаг клонирования .
5′-CATGTTGCCTGGTTGATGTGGTGA TATCACCGATTTATCCGTGTCTTAGA GGGACAATCGATGGTGAGCAAGGGCG AGGAGC-3 ‘	5′-GGGCATCAAATGATGCCCTTTTAGTGCG CATTGCGTCAAATGTTATCGGCAACATT ACCCTGTTATCCCTAGTTAC-3′	венера праймера с фланкирующими гомологии последовательностей tufB ORF для красного Е / Т рекомбинации
5 ‘-GTCTTCTTGCGCTAATTTTTTGCTAG GGATAACAGGGTAATTCTAGAGACGC ACACCGTGGAAAC-3’	5′-CATGGAATTCATTACCCTGTTATCCCTA TGGACTCACAAAGAAAAAACGCCCGGTG TGCAAGACCGAGCGTTCTGAACAACCCG GGGCGGCGTTGTGACAATTTAC-3 ‘	Гентамицин ген устойчивости к праймер для удлинения перекрытия с tetP-mCherry
5′-CATGAAGCTTGTTGACACTCTATCAT TGATAGAGTTATTTTACCACTCGGAT CCAGGAGGAACAATATGGTGTCTATC ACTAAAGATCAAATCATGGTGAGCAA GGGCGAGGAG-3′	5′-ATTACCCTGTTATCCCTAGCAAAAAATT AGCGCAAGAAGACAAAAATCACCTTGCG CTAATGCTCTGTTACAGGGTACCTTACTTG TACAGCTCGTCCATG-3 ‘	праймер tetP-mCherry для перекрытия ген устойчивости к ампициллину
5′-GGGAGGAATAATAAGAAAAAATCT CTGCCAGGAAGCTATCGTTGAAAAGC AATGTGACGAGCGGATAACAATTTCA CACAGG-3 ‘	5′-CACTTTTTCAACATCATTGTGCTCAACA ATGCGCTCCTGCTAAACCATAATTCTTTTT ATCAGAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTT-3′	праймеров дл амплификации конструкции tetP-mCherry-ампициллина с гомологии для вставки расходящихся в верхнем течении область tufB

зима
весна
лето
осень

утро
½ дня
день
вечер
ночь

нравится
хороший
не нравится

зима
весна
лето
осень

Loewe Aura — описание аромата, отзывы и рекомендации по выбору

Ароматы со скидкой

Описание аромата Loewe Aura

Рекомендации по выбору в инфографике

Для какого возраста:

Для какого времени года:

Для какого времени суток:

Стойкость аромата:

Шлейф аромата:

Общее впечатление:

Ароматы, похожие на Aura

Другие ароматы бренда Loewe

Ароматы с названиями близкими Aura

Вам могут нравиться ароматы

Вам могут понравиться ноты

Вас могут интересовать бренды

Loewe 7 — описание аромата, отзывы и рекомендации по выбору

Ароматы со скидкой

Описание аромата Loewe 7

Рекомендации по выбору в инфографике

Для какого возраста:

Для какого времени года:

Для какого времени суток:

Стойкость аромата:

Шлейф аромата:

Общее впечатление:

Ароматы, похожие на 7

Другие ароматы бренда Loewe

Ароматы с названиями близкими 7

Вам могут нравиться ароматы

Вам могут понравиться ноты

Вас могут интересовать бренды

Loewe

Пользователи также искали:

Tommy hilfiger транскрипция произношения. Парфюмерные бренды: произносим правильно

Converse

Coccinelle

Desigual

Dsquared2

Loewe

TOUS

Hublot

Guy Laroche

Philipp Plein

Louis Vuitton

Alber Elbaz

Levi’s

Marchesa

Moschino

Nike

Hermes

Azzedine Alaia

Badgley Mischka

Vionnet

Elie Saab

Proenza Schouler

Givenchy

Balmain

Comme Des Garcons

Christian Louboutin

Giambattista Valli и Gianfranco Ferre

Hedi Slimane

Burberry Prorsum

Mary Katrantzou

Как правильно произносить названия модных брендов

Другие дизайнерские бренды и марки

Как правильно произносить названия бьюти-брендов

15 мировых брендов, названия которых мы произносим с ошибкой

1. Lanvin

2. Nikon

3. Ralph Lauren

4. Bottega Veneta

5. Honor

6. Guess

7. Agent Provocateur

8. Erborian

9. Narciso Rodriguez

10. O.P.I

11. Loewe

12. Clarisonic

Ник Фриделл и Адам Марес: 21.04.21