Неудачное окрашивание: Самые неудачные окрашивания, фото до и после, как перекраситься из брюнетки в блондинку дома самой — 1 апреля 2021

Содержание

Неудачное окрашивание волос — 72 фото

Трафаретное окрашивание волос Ники Минаж

Ники Минаж цветные волосы

Неудачное окрашивание волос

Некрасивые стрижки женские

Испорченные волосы после окрашивания

Ужасные прически

Плохая стрижка женская

Самые смешные окрашивания волос

Неудачная покраска волос

Ники Минаж прически

Смешная покраска волос

Смешно Покрашенные волосы

Смешная покраска волос

Неудачное окрашивание волос

Прикольные цвета волос

Приколы про окрашивание волос

Смешное окрашивание волос

Неудачное окрашивание волос

Неудачные окрашивания волос звезд

Пиксельное окрашивание

Ugly hair

Неудачное окрашивание волос

Пятнистые волосы после окрашивания

Неудачное окрашивание волос

Ужасные прически знаменитостей

Ужасное окрашивание волос

Неудачное окрашивание волос

Плохое наращивание волос

Женщина красит волосы

Неудачное окрашивание волос

Ники Минаж прически

Необычные стрижки на средние волосы

Неудачное окрашивание

Волосы Билли Айлиш сейчас 2020

Плохой парикмахер

Красно синие волосы

Неудачное окрашивание

Неудачное окрашивание волос

Ужасное окрашивание

Хилари Дафф окрашивание

Окрашивание с широкими прядями

Мелирование с седыми отросшими корнями

Креативный парикмахер

Ники Минаж в леопарде

Последствия после неудачного окрашивания

Сожженные волосы

Ужас после парикмахерской

Ужасные прически

Смешные неудачные причёски

Кривопостриженные волосы

Неудачное окрашивание волос

Русские рэперша черно желтые волосы

Ужасное окрашивание волос

Азиатский волосы смывшейся грязный блонд

Неудачное окрашивание в рыжий

Неудачное окрашивание в блонд

Неудачный блонд

Крашенные волосы интересной формы,

Неудачно нарощенные волосы

Жуткие прически

Неудачное омбре на волосах

Покрасить волосы подмышками

Обесцвечивание волос

Покраска волос ожидание и реальность

Криво подстриженные волосы

Неудачное окрашивание разноцветное

Сплит окрашивание неудачное

Покраска волос рога

Неудачное окрашивание — консультации на Kleos.

Здравствуйте! Моя проблема заключается в очень неудачном окрашивании, при чём попытка перекраситься не удалась. Мои волосы от природы средне-русые, до этого окрашивания никогда волосы не красила. Так как волосы длинные, со временем ближе к концам волосы естественно выцветают, поэтому я решила выровнять цвет волос по всей длине. Цвет в салоне подобрала близкий к своему, с темно-платиновым оттенком, так как мне не нравится золотистость в любых других цветах. Краску выбрали щадящую. Но результат меня просто шокировал. Естественно осветляющие вещества краски «выедают» пигмент из волос, поэтому получился очень светло-золотистый, и абсолютно не тот цвет, который я хотела. Уходила из салона со слезами. Но через неделю решила сама подправить цвет, сделать хотя бы темнее — купила щадящую краску без аммиака, цвет «морозный бежевый». Но получилось из этого эксперимента ужасное — ближе к корням волосы светло-каштановые, а к концам темно-каштановые, практически чёрные. Теперь я вообще не могу на себя смотреть.

Но найти хорошего специалиста, который может исправить это, очень сложно. Я просто боюсь, что в очередной раз со мной сделают что-то, что приведёт к стрижке «под ноль». Скажите пожалуйста, можно ли как-то провести декапирование или что-то подобное, что позволит убрать этот ужасный цвет и по возможности вернуть приблизительно свой цвет? Заранее спасибо!

Инна, Москва, Россия, 23 года

4 ответа

Онлайн НОКС

Добрый день. Действительно, угадать цвет после окрашивания очень сложно. Натуральный пигмент волос у каждого человека очень разный. У одних он стойкий и плохо обесцвечивается, у других он быстро уничтожается перекисями. И предугадать это без опыта невозможно. Прежде чем окрашивать всю голову даже в салоне, попросите окрасить прядь… и только тогда вы сможете говорить, как ляжет краска на вашу голову. Если же неудача уже пришла, то безвыходных путей нет. Обращайтесь в хороший профессиональный салон и опять же пробуйте, в начале, изменить цвет одной из прядей. Удачи!

МАРИЯ

Не ставьте эксперименты над волосами, дороже потом восстановить. Приходите в салон красоты «Версо». Мы исправим это недоразумение. В Вашем случае действительно ничего сложного нет, но специалиста найти действительно трудно. Вы останетесь довольны и с огромным удовольствием станете смотреть на себя в зеркало. Стилист салона красоты — Марина.

120 ответов

Гримерка имидж-студия

Обратитеь к хорошему колористу. Все это исправляется. Ничего сложного в этом нет. Есть различные способы снять краситель. Но это делать лучше в салоне. Конечно, дороговато. Но мастер посоветует, чем дальше краситься.

Клуб красоты ДИВО

Здравствуйте Инна, попасть цвет в цвет натуральным волосам на 100% не возможно, но поправить ваше настоящее положение сложно, но можно.

Добавить ответ

Другие вопросы темы «Парикмахерские услуги»

Как вернуть натуральный цвет волос?

Еще летом была неудачная покраска, цвет русый ушел в шоколадно-рыжий, потом в салоне красками без амиака закрашивали, но они держатся всего 2 недели и когда смываются, то опять проявляется рыжий цвет!

Юлия, Москва, 20 лет

4 ответа

Мастера ожидают «чаевые»?

Только переехал из Штатов в Москву. Там парикмахеру принято оставлять 15-25% на чай от суммы счета, а как в принято в Москве? Не хочу попасть впросак.

Alex, Москва, 34 года

4 ответа

Быстро пачкаются волосы

Добрый день, у меня быстро пачкаются волосы, не вредно ли мыть их каждый день и как ухаживать за таким типом волос?

Специалист: Бодяева Светлана

Все фото

Краска на основе шампиньонов – это не шутка!

При частом окрашивании волосы становятся ломкими и безжизненными. Некоторые красители способны вызывать тяжелые аллергические реакции. Возможно, скоро эти проблемы станут неактуальными. Журнал Chemist…

Окрашивание волос 2020: самые модные оттенки наступающей осени

Смена сезонов всегда была отличным поводом для женщин внести некоторые корректировки в свою внешность. Если к радикальным переменам вы пока не готовы, то есть простой и проверенный способ обновить сво…

Деми Мур ради очередной роли перекрасилась в блондинку

Интернет буквально гудит после выхода в свет тизера нового сериала «Дивный новый мир», снятого по мотивам романа-антиутопии Олдоса Хаксли. Причем обсуждения возникли не вокруг сюжета или режиссерской …

Поклонники «отругали» Нюшу за неудачную смену имиджа

Видимо, после выхода из карантина многим российским звездам не хватает новых эмоций. Поэтому они продолжают экспериментировать, и иногда ходят буквально по лезвию ножа. В этот раз сменой имиджа своих …

1 | 20

20% скидка на первое посещение маникюрного зала

Anait beauty

скидка

10%

Скидка в День Рождения 10%

Ногтевая студия Юлии Панченко

скидка

20%

акция действует до 19. 02.2023

Маникюр и педикюр

Shine

Метро: м.Планерная

Все скидки

Устранение распространенных проблем с пятнами H&E

Разделение на секции часто играет важную роль для получения пятен хорошего качества. Толстые и тонкие срезы, дребезжание, «взрывающиеся» ткани и поплавки от водяной бани — все это артефакты срезов, которые могут негативно повлиять на то, как ткань улавливает пятно.

Толстые и тонкие срезы чаще всего являются результатом плохой техники на станции резки из-за неравномерного вращения микротома. Многие лаборатории в настоящее время используют автоматизированное секционирование на микротомах не только для уменьшения эргономических травм, но и для получения стабильно ровных срезов предметных стекол.

Трещины и разрывы обычно связаны с обработкой тканей. Болтливость является результатом чрезмерной обработки/чрезмерной обезвоженности ткани, а «взрывающиеся» срезы возникают в результате недостаточной обработки/плохой инфильтрации тканей. Еще один показатель чрезмерно обработанных тканей можно легко заметить, если посмотреть на красные кровяные тельца (эритроциты) в сосудах.

Вода часто используется в качестве дифференциатора эозина, так как она может аккуратно удалить избыток эозина с предметного стекла. Дегидратирующие спирты и первый 100% спирт могут содержать достаточно воды, чтобы вызвать осветление эозина и дальнейшую дифференциацию эозина. Слишком большое количество этапов «вода или разбавленный спирт» приведет к более светлым оттенкам эозина и нечеткости цитоплазматических структур.

Во время окрашивания вода может попасть в спирты (вслед за эозином) из-за переноса между этапами. Если реагенты не заменяются регулярно, содержание воды будет продолжать увеличиваться и будет переходить в ксилолы, которые следуют перед покровным стеклом. Этот избыток воды в ксилоле может со временем вызвать просачивание эозина из ткани. На слайде он виден в виде розовой дымки. Этот артефакт может возникать, даже если ксилол не имеет видимых загрязнений водой.

Перенос — не единственный способ попадания воды в ксилолы. Влажность окружающей среды может изменить скорость загрязнения ксилола водой.

В зависимости от географического положения качество воды может сильно различаться. Фторирование, pH или другие присутствующие минералы могут влиять не только на то, как красители поглощаются тканью, но и на срок службы красителей. Поскольку гематоксилин, например, слегка кислый, водопроводная вода с щелочным pH может повысить pH гематоксилина, что сделает его менее эффективным. Если качество водопроводной воды плохое или непостоянное, отличным вариантом будет использование деионизированной (ДИ) воды. Просто не забудьте убедиться, что давление деионизированной воды достаточно для окрашивания платформы.

Замороженные ткани могут быть очень сложными для окрашивания образцами. Время очень важно, и команды постоянно просят сократить время окрашивания, что позволяет патологоанатому быстро реагировать на запросы хирургического персонала. Тем не менее, может быть трудно найти баланс между качеством окрашивания и скоростью.

Одним из самых больших артефактов, с которыми я столкнулся, является неравномерное окрашивание, не связанное с срезами замороженных тканей. Причина номер один — спешка с фиксацией и промывкой предметного стекла перед окрашиванием. Помните, что среда, используемая для поддержки замороженных тканей во время срезов, является водорастворимой и ДОЛЖНА быть удалена из образца, в отличие от удаления парафина из обычных образцов перед окрашиванием. Среда может предотвратить даже проникновение красителя, как это делает парафин. И, в отличие от воска, вы, вероятно, не увидите остатков среды на предметном стекле в конце окрашивания, потому что шаги во время окрашивания удаляют среду по пути.

Образцы обычно не берутся лабораторным персоналом, поэтому важно обучать персонал, собирающий образцы. При сборе образцов с помощью марлевых тампонов, бумажных полотенец, аппликаторов с ватными наконечниками или других промежуточных устройств образцы можно высушить простым переносом воды с ткани на устройство. Этот артефакт чаще всего наблюдается при биопсии, особенно когда несколько образцов берутся у одного и того же пациента с использованием одного и того же устройства для сбора. В этих случаях, когда промывание устройства для сбора формалином может нанести вред пациенту, следует использовать непористые материалы для удаления ткани с устройства. Солевой раствор также можно использовать для полоскания ткани из устройства в другой контейнер, поскольку это не приведет к удалению воды из собранного образца.

Образцы должны быть собраны и немедленно погружены в фиксатор для обеспечения надлежащей фиксации. Формалин является наиболее часто используемым фиксатором в лаборатории и обеспечивает хорошую детализацию ядер. Однако с формалином следует обращаться так же, как и с любым другим реагентом, особенно в отношении сроков хранения и истечения срока годности. Если оставить формалин под прямыми солнечными лучами, pH раствора может измениться, что создаст кислую среду для тканей. Кислотность фиксаторов оказывает два основных воздействия на ткани:

Прижигание наружных краев тканей
Пересушивание тканей

Обжигание происходит, когда внешний край образца был изменен, чтобы придать ему «обожженный» вид. Это изменение также препятствует надлежащему проникновению реагента в образец, поскольку белки вдоль внешней части образца создают барьер для входа реагента и выхода воды.

В зависимости от уровня кислотности ткани могут просто стать чрезмерно сухими. Всякий раз, когда возникают опасения по поводу жизнеспособности формалина, лучше всего начинать со свежего реагента, чтобы снизить риск повреждения тканей.

Поскольку процессоры тканей продолжают развиваться, должны развиваться и наши методы обработки. Время обработки протоколов становится все более оптимизированным для удовлетворения потребностей пациентов за счет повышения эффективности обработки. По этой причине объединение всех образцов в один и тот же протокол больше нецелесообразно. Небольшие образцы, помещенные на ночной протокол, станут чрезмерно обезвоженными, что затруднит секционирование. Замачивание может помочь, но часто ткань будет сильно трескаться. Большие образцы, помещенные в протокол, более подходящий для биопсии, будут недостаточно обезвожены и вряд ли будут разделены на срезы до тех пор, пока не будет завершена соответствующая обработка.

Ядерный пузырь возникает, когда белки в ядре коагулируют. Этот артефакт часто является результатом плохо закрепленных образцов, подвергшихся сильному нагреву. Фиксатор с высоким pH также может вызвать появление пузырьков. Суровая среда заставляет белки коагулировать вокруг маленьких капелек жидкости, что придает им вид мыльных пузырей. К сожалению, удалить этот артефакт после его появления невозможно.

После разрезания влажные предметные стекла часто помещают в печь для сушки. Высокие температуры (например, 70°C) могут вызвать быстрое испарение воды из-под разреза через ткань. Испарение может привести к коагуляции белков, создавая артефакт мыльного пузыря. Лучший способ избежать образования пузырей в этом случае — либо понизить температуру в духовке, либо дать предметным стеклам немного высохнуть на воздухе перед помещением их в духовку.

Поплавки, к сожалению, слишком распространены. Ключ к определению источника плавающих помутнений заключается в том, чтобы увидеть, где они находятся на предметном стекле по отношению к ткани. Если они находятся в той же плоскости фокуса, что и образец ткани, то они, скорее всего, были контаминацией в блоке (либо в результате скопления, либо встраивания).

При внешнем загрязнении (например, в водяных банях или в реагентах для окрашивания) обычно обнаруживаются плавающие помутнения либо над тканью, либо за ее пределами. В любом случае, поддержание чистоты в местах сбора и заливки, использование бани с чистой водой и частая смена или фильтрация реагентов — лучший способ избежать поплавков.

Бактерии и грибки могут размножаться в красителях и сосудах для реагентов, если эти участки не очищаются регулярно. Следуйте инструкциям производителя по обслуживанию прибора. Помните, что хотя отбеливатель подходит для большинства вещей, он может вызвать проблемы с вашим инструментом.

Имейте в виду, что организм может и производит материалы, которые могут проявляться на пятнах H&E в виде пигмента. Меланин, гемосидерин (старые эритроциты) и воспалительный мусор могут отвлекать внимание. Даже фиксаторы могут создавать внеклеточные пигменты, такие как пигмент Ценкера, что может вызывать беспокойство, если патологоанатом не знает, что образец был зафиксирован в чем-то другом, кроме формалина. Хотя Zenker’s (дихромат калия / хлорид ртути) в значительной степени запрещен из-за его токсичности, есть некоторые места, которые все еще могут производиться самостоятельно. Запишите любые необычные условия фиксации, которые могут изменить окрашивание.

Лаборатории гистологии исторически использовали всевозможные методы для прикрепления тканей к предметным стеклам. В прошлом, когда заряженные предметные стекла считались слишком дорогими для рутинных срезов, лаборатории полагались на альбумин или другие белки, помогающие тканям прикрепляться к предметным стеклам. Коммерческие реагенты были (и остаются) доступными для использования в качестве добавок к водяной бане. Проблема, однако, заключается в последовательности. Каждый технолог будет наполнять свою водяную баню по-разному и добавлять в ванну разное количество клея. В то время как один человек может быть щедрым на клей, другой может быть скупым, что затрудняет контроль фонового окрашивания.

Адгезивы имеют свои ограничения (например, фоновое окрашивание H&E) и могут даже мешать иммуногистохимическим окрашиваниям.

Заряженные предметные стекла теперь легко доступны и хорошо работают с лабораторными красителями, уменьшая вероятность фоновых или других аномалий, связанных с клеями. Поскольку все слайды обрабатываются последовательно, различия между слайдами ограничены.

Наличие как заряженных (плюс) слайдов, так и клея означает, что их совместное использование должно улучшить прилипание салфетки, верно? Неправильный! Суть обоих методов заключается в привлечении ионов из ткани. При совместном использовании свойства обоих компенсируют друг друга, по существу превращая положительно заряженное предметное стекло в простое предметное стекло.

Заменители ксилола в настоящее время широко доступны и могут обеспечить дополнительный уровень безопасности в лаборатории. Имейте в виду, что у них есть свои ограничения, такие как низкая переносимость воды. Также может быть необходимо использовать совместимые среды для заливки, рекомендованные производителем, поскольку не все они совместимы с типичными средами для заливки на основе ксилола.

Хотя заменители ксилола, как правило, более безопасны, с ними следует обращаться с той же осторожностью, что и с ксилолом. Законы об утилизации отходов различаются в зависимости от региона, но заменители ксилола ВСЕГДА следует утилизировать так же, как ксилол, а не выливать в канализацию. Эти реагенты по-прежнему представляют собой углеводороды, вредные для окружающей среды. Они также, как правило, довольно ароматны, поэтому лаборатории, использующие заменители, нуждаются в несколько лучшей вентиляции для борьбы с запахом.

На рынке есть и другие спирты, которые так же хороши для окрашивания, как этанол. Метанол, изопропиловый спирт (IPA) и Flex являются наиболее распространенными и могут быть более экономичными для лабораторий, чем использование этанола. Производители флекс-алкоголя комбинируют этанол, метанол и ИПС в разных смесях, поэтому не забудьте узнать процентное содержание (если возможно). Если есть какие-либо опасения по поводу использования определенного реагента на красителе, всегда обращайтесь к производителю инструмента на предмет совместимости. В конце просто убедитесь, что пятно внутренне подтверждено.

Один из самых простых способов сохранить хороший вид предметных стекол H&E — просто обеспечить частую смену реагентов. У большинства производителей есть некоторая информация о количестве предметных стекол, которое могут выдерживать их реагенты, прежде чем их нужно будет заменить. Хотя эти данные являются ориентировочными, посмотрите, что имеет смысл для вашей лаборатории. Если лучше менять реагенты ежедневно, меняйте их ежедневно.

В настоящее время большинство лабораторий используют какую-либо платформу для окрашивания. Это не только освобождает аптеков от выполнения других задач, но и способствует постоянству пятен. Но, как и для всех других инструментов в лаборатории, техническое обслуживание и контроль качества необходимы для успешного окрашивания. Чистите и ухаживайте за красителем в соответствии со спецификациями производителя.

Если лаборатория имеет большой объем, может быть целесообразно уменьшить время между задачами обслуживания. В любом случае, ВСЕГДА поручайте механическую работу с прибором обученному инженеру. Большинство компаний предлагают планы обслуживания, которые позволяют пользователям обращаться за обслуживанием, и обычно они также планируют профилактическое обслуживание. Остерегайтесь компаний, которые пытаются предоставлять услуги, не показывая свои учетные данные для прибора! Плохое обслуживание со стороны стороннего поставщика может быть столь же разрушительным, как и полное отсутствие обслуживания.

Хотя это кажется простым, удивительно, как много команд тратят мало времени на обучение персонала работе со своими инструментами. Регулярные проверки компетентности и предоставление возможности членам команды освежить свое мастерство с помощью вебинаров или других внешних тренингов — отличный способ убедиться, что все понимают основы окрашивания.

Конечно, заставить всех согласиться с тем, какое пятно лучше всего, может быть непросто. Возможно, проще всего запрограммировать любое используемое окрашивание, чтобы приспособить несколько протоколов с немного разным временем, чтобы у патологоанатомов было несколько вариантов. Я также создаю простую систему кодов, чтобы знать время окрашивания, но патологоанатомам придется отвечать только на основании того, что они видят.

При настройке цвета лучше всего делать это просто. Часто хорошо работают следующие корректировки:

Гематоксилин +/- 30 секунд
Эозин Y +/- 15 секунд

Как правило, полезно выполнять только одну регулировку за раз. Этого времени как раз достаточно, чтобы внести тонкие изменения. При необходимости вы можете быть более агрессивным. Если гематоксилин слишком легкий, то обязательно увеличьте время на одну минуту или больше. Однако для настройки указанные выше времена, как правило, работают хорошо.

ПОМНИТЕ: иногда может быть достаточно просто отрегулировать гематоксилин или эозин, чтобы сделать другой ярче или светлее, в зависимости от того, что вы ищете.

Окрашивание всего препарата скелета — PMC

Список журналов
Рукописи авторов HHS
PMC5384832

Методы Мол Биол. Авторская рукопись; доступно в PMC 2017 7 апреля.

Опубликовано в окончательной редакции как:

Methods Mol Biol. 2014; 1130: 113–121.

DOI: 10.1007/978-1-62703-989-5_9

PMCID: PMC5384832

NIHMSID: NIHMS853686

PMID: 24482169

Spearight Spearight и лицензия. анализ тотальных препаратов скелета. Окрашивание всего скелета позволяет оценить формы и размеры элементов скелета в соответствующих местах. Таким образом, этот метод является основным методом обнаружения изменений в структуре скелета. Поскольку хрящи и кости можно различить с помощью дифференциального окрашивания, этот метод также является мощным средством для оценки темпов созревания скелета. Этот протокол охватывает окрашивание скелета мыши до и после рождения с использованием альцианового синего и ализаринового красного для идентификации хрящей и костей соответственно.

Ключевые слова: Альциановый синий, Ализариновый красный, Хрящ, Кость, Очищенный препарат скелета, Цельный препарат

Формирование кости происходит посредством двух процессов: эндохондрального и внутримембранозного. Эндохондральное костеобразование происходит после того, как клетки мезенхимальных сгущений дифференцируются в хондроциты. Эти клетки секретируют хрящевой внеклеточный матрикс, богатый протеогликанами, гликозаминогликанами (ГАГ) и коллагеном (типы II и X). Хондроциты подвергаются процессу послойной дифференцировки и апоптоза, что позволяет заменить хрящ на кость. Напротив, при внутримембранозной оссификации мезенхимальные клетки дифференцируются непосредственно в костеобразующие остеобласты. Альциановый синий и ализариновый красный окрашивают хрящ и кость соответственно. Как катионный краситель, альциановый синий прочно связывается с сульфатированными ГАГ и гликопротеинами, в то время как ализариновый красный, анионный краситель, связывается с катионными металлами, такими как кальций [1]. Поскольку хрящ содержит более высокие концентрации ГАГ, чем любая другая ткань, он связывает больше альцианового синего. Однако другие ткани, такие как кожа, содержат ГАГ и другие гликопротеины, связывающие альциановый синий. Напротив, потому что 99 % кальция в организме находится в костях, ализариновый красный обладает высокой специфичностью для костей. Селективные окрашивающие свойства альцианового синего и ализаринового красного и их использование в препаратах цельного скелета широко используются уже более века [2]. Протокол совершенствовался на протяжении многих лет, и существуют вариации с использованием ферментативных стадий и различных фиксаторов [2-5]. Описанный здесь протокол используется в нашей лаборатории. Большинство лабораторий используют очень похожие протоколы.

В качестве краткого обзора процесса, образцы готовятся путем удаления кожи, органов и бурого жира. Затем их обезвоживают и фиксируют в 95 % этанол. Для дальнейшего удаления жировой ткани и проницаемости тканей образцы обрабатывают ацетоном, а затем последовательно переводят в растворы для окрашивания альциановым синим и ализариновым красным. Одновременно с окрашиванием ализариновым красным воздействие гидроксида калия (КОН) гидролизует мягкие ткани, что приводит к прозрачности и позволяет визуализировать окрашенные элементы скелета. Процедура может быть скорректирована в зависимости от размера/возраста образцов.

2.1 Растворы

Используйте реактивы ч. д. а.

Фосфатно-солевой буфер (PBS): 137 мМ NaCl, 10 мМ фосфат, 2,7 мМ KCl, pH 7,4. Для приготовления 1 л 1× PBS налейте в химический стакан 800 мл дистиллированной воды. Добавить по порядку 8 г NaCl, 0,2 г KCl, 1,44 г Na ₂ HPO ₄, 0,24 г KH ₂ PO ₄. Отрегулируйте pH до 7,4 с помощью HCl. Добавьте дистиллированную воду до общего объема 1 л.
100 % этанол (EtOH).
100 % ацетон ((Ch4) ₂ CO).
Глицерин (C ₃ H ₈ O ₃ ).
1 % Гидроксид калия (KOH): 1 % (масса/объем) KOH, 99 % dH ₂ O. Чтобы приготовить раствор объемом 200 мл, взвесьте 2 г гранул KOH. Постепенно добавляйте в химический стакан, содержащий 200 мл деионизированной воды (, см. ). Примечание 1).
Краситель альциановым синим: 0,03 % (масса/объем), 80 % EtOH, 20 % (ледяная) уксусная кислота. Чтобы приготовить раствор объемом 200 мл, взвесьте 0,06 г Alcian blue 8GX и поместите в химический стакан, добавьте 160 мл 100 % этанола и 40 мл 100 % ледяной уксусной кислоты (9).0097 см. примечания 2 и 3).
Краситель ализариновый красный: 0,005 % (вес/объем) в 1 % (вес/объем) КОН. Чтобы приготовить 200 мл раствора, взвесьте 10 мг ализаринового красного и добавьте к 200 мл 1 % КОН (, см. ). примечания 4 и 5).

2.2 Инструменты/Принадлежности

Препаровальный микроскоп и фотографическое оборудование.
Подгузники.
Ванна с горячей водой.
Щипцы.
Скальпель.
Стеклянные сцинтилляционные флаконы, 15 мл или конические пробирки 50 мл.

3.1 Окрашивание элементов скелета: средние стадии беременности (E12.5–E16.5)

Соберите эмбрионы после эвтаназии беременных самок, подвергнутых своевременной эвтаназии, и поместите в 1× PBS.
Удалите экстраэмбриональные оболочки, окружающие эмбрион. Удалите глаза в то время как в PBS [3-7]. Для эмбрионов на ранней стадии (E12.5–E14.5) нет необходимости удалять кожу или потрошить эмбрион. Для более старых эмбрионов потрошите следующим образом: инициируйте удаление кожи, создав горизонтальную щель в коже на животе с помощью рассекающих ножниц. Затем растяните пальцами или щипцами. Продолжайте осторожно оттягивать кожу. Повторите, сделав вертикальный разрез в спинной коже эмбриона и потянув края друг от друга. Чтобы снять кожу с рук, сделайте вертикальный разрез на вентральной и дорсальной поверхностях передних и задних конечностей. Очистите кожу с помощью щипцов.
Поместите эмбрионы в стеклянные сцинтилляционные флаконы, содержащие 70 % этанола, и зафиксируйте в течение ночи при 4 °C ( см. ). Примечание 6).
Удалить 70 % EtOH и заменить 95 % EtOH на 1 час.
Удалите 95% EtOH и замените его ацетоном на ночь при комнатной температуре ( см. Примечание 7).
Удалите ацетон и замените красителем Alcian blue на 1–4 часа ( см. Примечание 8).
Удалите краситель альциановым синим и замените красителем ализариновым красным на 3–4 часа ( см. ). Примечание 9).
Удалите краситель ализариновый красный и замените его 1 % КОН на 12 часов или на ночь для очистки эмбриона [5, 7–9] ( см. Примечание 10).
Перенесите эмбрионы в раствор 50 % глицерин:50 % (1 %) KOH при комнатной температуре до тех пор, пока ткань не станет прозрачной.
После очистки перенесите образец в 100 % глицерин для длительного хранения [5, 7–9]. См. .
Открыть в отдельном окне
Окрашивание альциановым синим и ализариновым красным ( a ) E14.5 и ( b ) E16.5 эмбрионов. Изображения были получены с использованием оптики светлого поля. После настройки уровней цвета с помощью Photoshop эмбрионы были наклеены на белый фон . водой в течение 20–30 с при температуре 65 °С для облегчения мацерации (пермеабилизации) ткани и удаления кожи [9].] ( см. Примечание 11).
Удалить глаза, всю кожу, внутренние органы, жировую ткань и пузыри из полости тела [7, 10] ( см. Примечания 12 и 13).
Зафиксируйте эмбрионы в 95 % EtOH на ночь при комнатной температуре [5, 7–9].
Поместите образцы в ацетон на ночь при комнатной температуре ( см. Примечание 7).
Окрашивание хрящей путем погружения эмбриона в стеклянную сцинтилляционную пробирку, содержащую по крайней мере достаточное количество раствора альцианового синего, чтобы покрыть эмбрион. Инкубируйте образец в течение ночи при комнатной температуре [5, 7–9] ( см. Примечание 14).
Очистите эмбрионы, сначала промыв их в двух сменах 70 % EtOH, а затем инкубируя их в 95 % EtOH в течение ночи [5] ( см. Примечание 15).
Для предварительной очистки ткани удалите 95 % EtOH и добавьте 1 % раствор KOH на 1 ч при комнатной температуре [7].
Затем удалите раствор КОН и замените его раствором ализаринового красного на 3–4 ч при комнатной температуре. Чтобы замедлить окрашивание, поместите образцы на ночь при температуре 4 °C [5, 7, 9].] ( см. Примечание 16).
Замените раствор ализаринового красного раствором 50 % глицерина: 50 % (1 %) раствором КОН. Вы можете инкубировать образец в этом растворе при комнатной температуре или 4 °C до тех пор, пока не исчезнет излишняя красная окраска и образец не станет прозрачным [7].
Перенести образец в 100 % глицерин для длительного хранения [7–11]. См. .
Открыть в отдельном окне
Окрашивание щенка P0 альциановым синим и ализариновым красным. Изображение было обработано как в

3.3 Поздняя постнатальная и взрослая стадии (3 недели и старше)

Усыпить мышь и опрыскать 70 % EtOH.
Удаление кожицы ( см. , подзаголовок 3.1, , шаг 2, , и примечания 12 и 13).
Удаление глаз и внутренних органов.
Удалите как можно больше жировой и другой избыточной ткани ( см. Примечание 17).
Место в две смены по 95% EtOH на ночь при комнатной температуре для обезвоживания и фиксации образца.
Заменить раствор 100 % ацетоном на 2 дня для дальнейшей фиксации образца и удаления жировой ткани ( см. Примечание 7).
Инкубируйте образец в растворе альцианового синего в течение 1–3 дней ( см. Примечания 8 и 14).
Очистите эмбрионы, сначала промыв их в двух сменах 70 % EtOH, а затем инкубируя в 95 % EtOH в течение ночи [5, 7] ( см. Примечание 15).
Заменить 1 % KOH на 4 часа при комнатной температуре до ночи при 4 °C для предварительной очистки образцов.
Замените 1 % KOH раствором ализаринового красного и инкубируйте образцы в течение 2–5 дней ( см. Примечания 16 и 17).
Перенесите образец в 1 % KOH в качестве очищающего раствора ( см. Примечание 18).
Для длительного хранения храните образец в 100 % глицерине. См. .
Открыть в отдельном окне
Окрашивание 4-недельной постнатальной мыши альциановым синим и ализариновым красным. Изображение было обработано, как в

3.4 Подготовка к визуализации

Осторожно поместите окрашенный скелет в прозрачную пластиковую или стеклянную чашку диаметром 60 мм или 10 см с помощью черпака ( см. ). Примечание 19).
Заполните планшет 100 % глицерином и дайте шлирен-схемам осесть ( см. Примечание 20).
Поместите образец под препаровальный микроскоп с яркопольной оптикой и белым фоном.
При необходимости обрезать лишнюю ткань ( см. Примечание 21).

¹ КОН очень едкий для кожи. При работе с этим химическим веществом следует надевать лабораторный халат, перчатки и защитные очки. КОН растворяет стекло, поэтому этот раствор следует хранить в пластиковой таре или делать свежим.

² Очень хорошо перемешайте раствор Alcian blue; это может занять от 30 минут до часа. Затем отфильтруйте раствор. В противном случае неравномерное и пятнистое распределение красителя приведет к неравномерному окрашиванию скелетных препаратов.

³ Этот раствор можно хранить в течение нескольких недель, но лучше всего он работает, когда он свежеприготовлен. Его нужно фильтровать перед каждым использованием.

⁴ Для окрашивания кости в пурпурно-красный цвет используйте приведенную выше формулу. Если предпочтителен более оранжево-красный цвет, можно использовать ализариновый красный, разведенный в этаноле: Ализариновый красный: 0,05 % (вес/объем) в 95 % (мас./об.) EtOH. Затем растворите в КОН до тех пор, пока образец не станет прозрачным.

⁵ Растворы ализарина красного лучше всего действуют, если они приготовлены свежеприготовленными.

⁶ Эмбрионы можно переносить в конические пробирки объемом 15 мл или стеклянные сцинтилляционные флаконы. Мы предпочитаем последнее, потому что легче визуализировать степень окрашивания.

⁷ Ацетон действует как фиксатор, проницаемость клеточных мембран для проникновения красителя и растворение жира.

⁸ Кожа молодых эмбрионов достаточно пористая для проникновения красителя Alcian blue после обработки ацетоном. Однако длительное воздействие красителя альциановым синим приведет к почти необратимому чрезмерному окрашиванию кожи и других мягких тканей, что затруднит просмотр основных элементов скелета. Если происходит чрезмерное окрашивание, помещение эмбриона в 20 % ледяную уксусную кислоту может привести к некоторому выщелачиванию красителя из мягких тканей.

⁹ Инкубируйте образцы в ализариновом красном, пока кость не станет красной. Чрезмерное окрашивание приведет к необратимому поглощению красителя мышцами.

¹⁰ Если образец будет храниться в KOH слишком долго, эмбрион распадется и/или элементы скелета расчленятся. Продолжительность времени, в течение которого образец должен находиться в КОН, зависит от его размера, но в конце инкубации образец должен быть почти прозрачным.

¹¹ Для более взрослых щенков с шерстью пропустите этот шаг и просто обильно распылите на образец 70 % EtOH, чтобы смочить шерсть и облегчить препарирование.

¹² Одной из наиболее часто встречающихся проблем с очищенными препаратами скелета является недостаточное окрашивание пальцев из-за невозможности удаления кожи вокруг них. Одним из способов удаления кожи с рук и ног является надрез скальпелем по тыльной поверхности кисти/стопы, а затем по каждому пальцу. Затем используйте щипцы, чтобы зажать кожу между пальцами, чтобы снять ее.

¹³ Обеспечивают удаление жира, органов и пузырей из полости тела; они ухудшают окрашивание альциановым синим. Важно удалить коричневый жир за шеей и между лопатками, потому что он пигментирован и плохо очищается. Кроме того, альциановый синий окрашивает жир.

¹⁴ Весь образец вместе с хрящом должен стать синим. Слабое окрашивание может быть связано с неправильным потрошением, старым раствором или неадекватным воздействием альцианового синего. Если наблюдается слабое окрашивание, держите образец в растворе в течение более длительного периода времени, но это создает риск чрезмерного окрашивания.

¹⁵ Продолжайте менять 70 % EtOH, пока не исчезнет синяя окраска. Эта дегидратация зафиксирует раствор альцианового синего в хрящах и поможет очистить окружающие мягкие ткани.

¹⁶ Образцы можно инкубировать в растворе ализаринового красного в течение ночи при комнатной температуре; однако избегайте более длительных инкубаций, так как может произойти чрезмерное окрашивание, а КОН может привести к экзартикуляции.

¹⁷ Если раствор помутнеет после 2–3-дневной инкубации, перенесите образец в 1 % раствор КОН. Для старых мышей приемлемо воздействие 2 % КОН; однако помните, что гидролиз происходит быстрее. Ежедневно меняйте раствор, пока он не перестанет быть мутным и ткань не станет чистой. Затем поместите в раствор 50 % глицерина: 50 % (1 %) КОН для полного очищения.

¹⁸ Для дальнейшего осветления образца можно использовать убывающий градиент от 1 % КОН до глицерина; однако для длительного хранения убедитесь, что образец хранится в глицерине; в противном случае KOH вызовет расчленение скелета.

¹⁹ Возьмите пластиковую одноразовую пипетку на 1 мл и отрежьте верхнюю половину груши вдоль — получится мерная ложка, а пипетка образует ручку.

²⁰ Вязкость глицерина облегчает позиционирование скелета для визуализации; однако шлирен-паттерны возникают из-за различий в концентрации растворов глицерина или содержания соли. Чтобы они исчезли, может потребоваться от нескольких часов до ночи. Хранение образцов в достаточно большом объеме 100 % глицерина или градуированных концентраций глицерина в EtOH, чтобы полностью погрузить образец, когда содержимое флакона переносится в чашку, устраняет эту проблему.

²¹ Удаление лишней ткани на этом этапе имеет большое значение для конечного качества изображения. Для более крупных эмбрионов и постнатальных стадий может быть достаточно щипцов. Для эмбрионов среднего срока беременности набор из 4 дюймов. прямые микроножницы — отличная инвестиция.

1. Горобин Р.В. Как красители придают цвет различным компонентам тканей? В: Кумар Г.Л., редактор. Учебное пособие по специальным красителям и H&E. 2. Carpinteria; Калифорния: 2010. С. 159–166. [Академия Google]

2. Schultze O. Ueber herstellung und conservirung durchsichtiger emberonen zum Stadium der skeletbildung. Анат Анз. 1897; 13:3–5. [Google Scholar]

3. Nagy A, Gerstsenstein M, Vintersten K, Behringer R. Окрашивание альциановым синим хрящевого скелета плода мыши. Протокол Колд-Спринг-Харб. 2009 г.: 10.1101/pdb.prot5169. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

4. Jegalian BC, De Robertis EM. Гомеотические трансформации у мышей, вызванные сверхэкспрессией трансгена Hox3.3 человека. Клетка. 1992;71:901–910. [PubMed] [Google Scholar]

5. Estrada K, Retting KN, Chin AM, et al. Smad6 необходим для ограничения передачи сигналов bmp во время развития хряща. Джей Боун Шахтер Рез. 2011;26(10):2498–2510. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

6. Nagy A, Gerstsenstein M, Vintersten K, Behringer R. Изоляция экстраэмбриональных мембран. Протокол Колд-Спринг-Харб. 2006 г.: 10.1101/pdb.prot4267. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

7. Hogan BLM, Beddington R, Costantini F, Lacy E. Манипулирование эмбрионом мыши: лабораторное руководство. Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор; Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк: 1994. [Google Scholar]

8. Реттинг К.Н., Сонг Б., Юн Б.С., Лайонс К.М. Передача сигналов BMP и Smad через Smad1 и Smad5 необходима для формирования эндохондральной кости.

Рубрики

Неудачное окрашивание: Самые неудачные окрашивания, фото до и после, как перекраситься из брюнетки в блондинку дома самой — 1 апреля 2021

Неудачное окрашивание волос — 72 фото